一种病原性鱼肠道弧菌快速检测试纸制造技术

本发明专利技术提供一种病原性鱼肠道弧菌的竞争免疫层析快速检测试纸，能特异性的对鱼类病原性鱼肠道弧菌进行快速检测，并能避免交叉免疫反应导致的检测误差。本发明专利技术提供的鱼肠道弧菌快检测试纸其硝酸纤维素膜上从靠近金标垫一侧开始设有依次排列的四条检测线T1、T2、T3、T4和一条质控线，其中检测线T1为鱼肠道弧菌的外膜蛋白、检测线T2为鞭毛蛋白、检测线T3为鱼肠道弧菌的胞外产物、检测线T4为全菌破碎蛋白；质控线C包被有羊抗兔IgG。本发明专利技术将病原菌的多种抗原特异性的排列组合在一起与待检样品同时进行反应，且在T4线上特别设置全菌蛋白，解决了其他菌的共同抗原导致的交叉反应对结果判定的干扰问题，可以准确区别阳性结果与交叉反应。

A rapid test paper for pathogenic intestinal Vibrio of Vibrio

The present invention provides a immunochromatographic strip for rapid detection of competitive pathogenic Vibrio fish intestine, specific to the fast detection of pathogenic Vibrio in intestine of fish fish, and can avoid the detection error due to the cross immune reaction. The invention provides a quick test of the Vibrio ichthyoenteri nitrocellulose membrane from close to the gold standard pad arranged side is provided with four detection lines T1, T2, T3, T4 and a quality control line, the detection line T1 for Vibrio ichthyoenteri outer membrane protein, T2, flagellin detection line for line detection T3 for the extracellular products of Vibrio ichthyoenteri and detection line T4 to all the bacteria broken protein; C control line is coated with Goat anti rabbit IgG. The pathogens of various antigen specific combinations together with the sample to be tested at the same time of reaction, and special set of whole bacterial proteins on the T4 line, solving the problem of interfering cross reactions lead to the common antigen of other bacteria to result, positive results can accurately distinguish and cross reaction.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于病原微生物检测
，具体涉及一种病原性鱼肠道弧菌(Vibrioichthyoenteri)快速检测试纸及其制备方法。
技术介绍
鱼肠道弧菌是革兰氏阴性菌，是海洋环境中常见菌群之一，广泛分布在海水和生物群体中，它的致病性受宿主的生理状况和水质环境条件等综合因素影响，是一种条件致病菌。鱼肠道弧菌能够引起多种养殖鱼类发病，给水产养殖业造成严重的经济损失。有效快速的检测诊断是预防和控制该病原菌传播的关键。目前常用的鱼肠道弧菌的检测方法有间接免疫荧光抗体技术、免疫酶联反应、聚合酶链式反应(PCR)、实时定量PCR等，但这些技术在实用性上皆有一定的局限，耗时长，操作复杂，需要专业设备和人员，不适用于普通养殖人员在现场对鱼肠道弧菌的实时检测。胶体金免疫层析试纸具有易于携带、操作简便快捷、结果肉眼可见、不需要专业人员和设备、经济实用等优点，是一种十分有发展前景的现场快速检测技术。水产动物中虽已制备多种养殖动物病原的单(多)克隆抗体，但现场快速检测试纸技术未能得到很好地开发，目前尚无鱼肠道弧菌胶体金快速检测试纸的报道。细菌是多种抗原成分组成的复合体，其抗原包括菌体抗原、鞭毛抗原、荚本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鱼肠道弧菌快检测试纸，所述的检测试纸包括载体板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中样品垫和吸水垫位于载体板的两端，硝酸纤维素膜位于载体板的中部；样品垫与硝酸纤维素膜交界处设有载有金标兔抗鱼肠道弧菌抗体的金标垫，金标垫一端边缘重叠在样品垫之下，另一端边缘重叠在硝酸纤维素膜之上；其特征在于，所述的硝酸纤维素膜上从靠近金标垫一侧开始设有依次排列的四条检测线T1、T2、T3、T4和一条质控线C，其中检测线T1为鱼肠道弧菌的外膜蛋白、检测线T2为鞭毛蛋白、检测线T3为鱼肠道弧菌的胞外产物、检测线T4为全菌破碎蛋白；质控线C包被有羊抗兔IgG。

【技术特征摘要】
1.一种鱼肠道弧菌快检测试纸，所述的检测试纸包括载体板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中样品垫和吸水垫位于载体板的两端，硝酸纤维素膜位于载体板的中部；样品垫与硝酸纤维素膜交界处设有载有金标兔抗鱼肠道弧菌抗体的金标垫，金标垫一端边缘重叠在样品垫之下，另一端边缘重叠在硝酸纤维素膜之上；其特征在于，所述的硝酸纤维素膜上从靠近金标垫一侧开始设有依次排列的四条检测线T1、T2、T3、T4和一条质控线C，其中检测线T1为鱼肠道弧菌的外膜蛋白、检测线T2为鞭毛蛋白、检测线T3为鱼肠道弧菌的胞外产物、检测线T4为全菌破碎蛋白；质控线C包被有羊抗兔IgG。2.如权利要求1所述的鱼肠道弧菌快检测试纸，所述的兔抗鱼肠道弧菌抗体的制备方法如下：将鱼肠道弧菌扩大培养，并将菌液浓度调至1×108CFU/mL，福尔马林灭活后免疫纯种新西兰大白兔；第一次混入弗氏完全佐剂，；间隔一周后加强免疫，混入弗氏不完全佐剂，间隔两周后重复一次；一周后取血，分离得到血清，纯化得到兔抗鱼肠道弧菌抗体。3.如权利要求1所述的鱼肠道弧菌快检测试纸，所述的鱼肠道弧菌外膜蛋白，其制备方法如下：将鱼肠道弧菌扩大培养，离心后磷酸盐缓冲液洗涤，重悬至原体积1/25，加入10％蔗糖，混匀后-20℃下作用15min；室温下加入等体积0.4％Triton-X100，作用一段时间后离心取上清，加入2.5倍体积的冰乙醇-20℃过夜；离心取沉淀，洗涤重悬后，加入等体积KI溶液，37℃作用1h；离心取上清，加入2.5倍体积冰乙醇-20℃过夜；离心取沉淀，重悬后透析、冻干得到鱼肠道弧菌外膜蛋白。4.如权利要求1所述的鱼肠道弧菌快检测试纸，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：绳秀珍，李嘉文，战文斌，唐小千，邢婧，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东;37