一种从木瓜中提取的异黄酮类化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种从木瓜中提取的异黄酮类化合物及其制备方法和应用。该化合物的分子式为C18H16O5，具有下述结构式：

An isoflavone extracted from papaya and its preparation methods and Applications

The present invention discloses a isoflavone compound extracted from papaya and a preparation method and application of the isoflavone compound. The molecular formula of the compound is C18H16O5 and has the following structural formula:

【技术实现步骤摘要】
一种从木瓜中提取的异黄酮类化合物及其制备方法和应用
本专利技术属于植物化学
，具体是涉及一种首次从木瓜中提取得到的异黄酮类化合物，该化合物具有良好的抗氧化活性。同时，本专利技术还涉及该化合物的制备方法，以及该化合物在抑制香料氧化变质方面的应用。
技术介绍
木瓜(学名：Chaenomelessinensis(Thouin)Koehne)，为蔷薇科木瓜属植物贴梗海棠的果实。椭圆形，长10－15厘米，暗黄色，木质，味酸甜，芳香浓郁。它具有开胃、丰胸美容、治疗风湿痛等保健作用。木瓜还可以制作果脯、果酒、泡酒等。也可以做菜，如：各式木瓜鸡、木瓜鱼、木瓜炖猪脚等等。其味道鲜美，是具美味、药用价值为一身的绿色水果。木瓜营养丰富，富含维生素、有机酸、黄酮、三萜类、皂苷类、糖类、鞣质等多种功效成分，具有保肝，抗菌，抗肿瘤等作用。可治风湿痹痛，肢体酸重，筋脉拘挛，吐泻转筋，脚气水肿。木瓜提取物也常用作烟用添加剂，在卷烟中添加木瓜提取物具有柔和烟气，降低烟气刺激性，增补烟香、丰满烟气的作用。异黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环(A-与B-环)通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，其基本母核为3-苯基色原酮。异黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等官能团。此外，它还常与糖结合成苷。异黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧剂，阻止氧化的能力是维生素E的十倍以上，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。异黄酮可以改善血液循环，降低胆固醇，改善心脑血管疾病。国内外研究证实，异黄酮类化合物的功效作用与化学结构密切相关，可进一步研究和开发更多的异黄酮类化合物，从中寻找有效的先导化合物和活性基团。本专利技术从传统药食同源植物木瓜中分离得到一种具有良好抗氧化活性的异黄酮类化合物，该化合物及其在抑制香料氧化变质方面的应用尚未见到相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的异黄酮类化合物。本专利技术的另一个目的是提供一种制备所述异黄酮类化合物的方法。本专利技术的目的还在于提供所述的异黄酮类化合物在抑制香料氧化变质中的应用。本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现。除非另有说明，本专利技术所采用的百分数均为质量百分数。一种从木瓜中提取分离得到的异黄酮类化合物，其分子式为C18H16O5，具有下述结构式：该化合物为黄色胶状物，命名为：6,4′-二羟基-7-(3-羟丙基)-异黄酮，英文名：6,4′-dihydroxy-7-(3-hydroxypropyl)-isoflavone。一种制备所述异黄酮类化合物的方法，以木瓜为原料，经浸膏提取、硅胶柱层析、高效液相色谱分离得到，具体包括以下步骤：(1)浸膏提取：将木瓜粉碎到20～40目，用有机溶剂超声提取2～5次，每次30～60分钟，合并提取液、过滤，减压浓缩提取液，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏；所述的有机溶剂为70％～100％的丙酮、90％～100％的乙醇或90％～100％的甲醇；(2)硅胶柱层析：浸膏上硅胶柱层析，装柱硅胶160～200目，硅胶用量为浸膏重量2～10倍量；以氯仿-丙酮溶液进行梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；氯仿-丙酮溶液的体积配比分别为9:1、8:2、7:3、6:4、1:1和0:1；(3)高效液相色谱分离：将柱层析洗脱液6:4的部分经高效液相色谱分离纯化，收集31.2min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的异黄酮类化合物。步骤(2)中，浸膏在上硅胶柱层析前，先用重量比1.5～3倍量的丙酮或甲醇溶解，然后用浸膏重量0.8～2.0倍的80～100目硅胶拌样。步骤(3)中，所述的高效液相色谱分离纯化是以50％的甲醇为流动相，流速20ml/min，以21.2×250mm，5μm的ZorbaxPrepHTGF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为335nm，每次进样150～300μL，收集31.2min的色谱峰，多次累加后蒸干。所制备的异黄酮类化合物的结构通过以下方法进行测定：该化合物为黄色胶状物，化合物的1H和13CNMR谱数据(如表1、图1和图2)显示其含有18个碳和16个氢，包括1个1,2,4,5-四取代的苯环(C-5～C-10，H-5、H-8)，1个1,4-二取代的苯环(C-1'～C-6'，H-3',5'和H-2',6')，1个α,β-不饱和羰基(C-2、C-3、C-4，H-2)，1个羟丙基(C-1”～C-3”，H2-1”～H2-3”)，以及两个酚羟基(δH10.72s和10.98s)。根据典型的两个苯环、α,β-不饱和羰基信号，可推测该化合物为异黄酮类化合物。根据H-2和C-3、C-4、C-9、C-1′，H-5和C-4、C-9、C-10，H-8和C-6、C-7、C-9、C-10，以及H-2′,6′和C-2的HMBC相关(如图3)可进一步确认化合物为异黄酮类结构。化合物的母体确定后，其余的取代基，羟丙基和酚羟基可视为异黄酮上的取代基。根据H2-1”(δH2.70)与C-6(δC150.0)、C-7(δC130.3)、C-8(δC116.9)，H2-2”(δH1.89)与C-7(δC130.3)，以及H-8(δH6.67)和C-1”(δC28.6)的HMBC相关，可证实羟丙基取代在C-7位。两个酚羟基取代在C-6和C-4'位可通过一个酚羟基氢(δH10.72)与C-5(δC114.2)、C-6(δC150.0)和C-7(δC130.3)；以及另一个酚羟基(δC10.98)与C-4'(δC157.5)和C-3',5'(δC116.0)的HMBC相关得到确认。另外典型的苯环上质子信号[H-5(δH7.08s)；H-8(δH6.67s)；H-2′,6′(δH7.64(d)8.8)，H-3′,5′(δH6.70(d)8.8)]也可证实本专利技术化合物的A环为6,7-位二取代，B环为4'-位单取代。至此，化合物的结构得到确定，命名为6,4′-二羟基-7-(3-羟丙基)-异黄酮。表-1化合物1的核磁共振数据(500/125MHz，溶剂为CDCl3)化合物的红外、紫外和质谱数据：UV(甲醇)，λmax(logε)335(3.34)、258(3.72)和210(4.18)nm；IR(溴化钾压片)：νmax3446、3057、2924、1652、1610、1555、1472、1434、1142和1059cm-1；1H和13CNMR数据(500和125MHz,(CDCl3)，见表-1；正离子模式ESIMSm/z335[M+Na]+；正离子模式HRESIMSm/z335.0898[M+Na]+(C18H16NaO5，计算值335.0895)。对所述的异黄酮类化合物进行抗氧化活性测试，抗氧化活性以清除DPPH自由基能力的大小表示；以50μg/mL为初筛浓度，测定其清除脂性自由基DPPH的活性。取一块costar96孔板，加入新鲜配制的DPPH乙醇溶液(6.5×105mol/L)190μL/孔，加入待测样品l0μL/孔，空白孔加l0μL生理盐水，充分混匀，用封板膜封板后室温下避光静置30分钟，于UV2401分光光度计上测定仪上测定各孔吸光度值，测定波长为517nm；样品对脂性自由基DPPH清除率按下式计算:DPPH清除率(％)＝(A空白-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从木瓜中提取分离得到的异黄酮类化合物，具有下述结构式：

【技术特征摘要】
1.一种从木瓜中提取分离得到的异黄酮类化合物，具有下述结构式：其分子式为C18H16O5，命名为：6,4′-二羟基-7-(3-羟丙基)-异黄酮，英文名：6,4′-dihydroxy-7-(3-hydroxypropyl)-isoflavone。2.一种制备权利要求1所述异黄酮类化合物的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)浸膏提取：将木瓜粉碎到20～40目，用有机溶剂超声提取2～5次，每次30～60分钟，合并提取液、过滤，减压浓缩提取液，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏；所述的有机溶剂为70％～100％的丙酮、90％～100％的乙醇或90％～100％的甲醇；(2)硅胶柱层析：浸膏上硅胶柱层析，装柱硅胶160～200目，用量为浸膏重量2～10倍量；以氯仿-丙酮溶液进行梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；氯仿-丙酮溶液的体积配比分别为9:1、8:2、7:3、6:4、1:1和0...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈章玉，向海英，凌军，高茜，张天栋，蒋次清，王晋，许永，孔维松，周敏，杨叶昆，李雪梅，胡秋芬，杨光宇，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：云南,53