一种直接产生妥布霉素的工程菌及其应用制造技术

本发明专利技术属于医药技术领域，涉及一种直接产生妥布霉素的工程菌及其应用，主要是对妥布霉素产生菌中氨甲酰转移酶基因实施了破坏，菌种不再产生氨甲酰妥布霉素，而是产生妥布霉素。本发明专利技术通过框架内删除失活的方法阻断黑暗链霉菌中ｔａｃＡ基因，包括构建ｔａｃＡ基因阻断质粒、阻断质粒ｐＳＰＵ３０３转化黑暗链霉菌Ｈ６、筛选双交换菌株与发酵产物检测、新组分鉴定。框架内删除失活的方法为ＰＣＲ分别获得ｔａｃＡ基因上下游分子量不低于５００ｂｐ两个片段，将两者同时连接到ｐＩＪ２９２５中，再往片段的一端连入在黑暗链霉菌中能表达的抗生素抗性基因如红霉素抗性基因ｅｒｍＥ，利用ＢｇｌⅡ酶切将三个基因片段连到穿梭载体ｐＨＺ１３２中。本发明专利技术可以简化生产工艺、降低生产成本，便于进行产品的质量控制。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种直接产生妥布霉素的工程菌，其特征是：通过框架内删除失活的方法阻断黑暗链霉菌中ｔａｃＡ基因，主要包括以下步骤：　Ａ、ｔａｃＡ基因阻断质粒的构建；　Ｂ、阻断质粒转化黑暗链霉菌；　Ｃ、转化子的筛选；　Ｄ、新组分妥布霉素的鉴定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：夏焕章，隋鑫，余永红，侯曦凡，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：89[中国|沈阳]