本发明专利技术公开了一种检测成人早衰老综合症的基因诊断试剂盒，属于生物技术领域。一种诊断成人早衰老综合症的方法，包括：（１）采集待测个体的血液、体液或组织标本，提取ＤＮＡ；（２）以该ＤＮＡ为模板，以针对ＷＲＮ基因所述突变位点设计的ＰＣＲ引物进行ＰＣＲ反应，得到ＰＣＲ反应产物；（３）将得到的ＰＣＲ产物进行测序分析，将所得标本序列与正常基因序列进行比较，确认是否有突变；（４）根据以上结果判断待测个体是否为ＷＲＮ基因突变导致的成人早衰老综合症。本发明专利技术的优点是：首次提供了在中国人群中存在ＷＲＮ基因的一种突变，并且说明了该突变基因与ＷＳ症的相关。本发明专利技术检测方法简单、成本低，检测结果直接、可靠，适用于对Ｗｅｒｎｅｒ综合症ＷＲＮ基因２８０６ｉｎｓＡ突变的大规模的筛查和诊断。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测成人早衰老综合症的基因诊断试剂盒，更具体地说是一种利 用WRN基因2806insA突变检测的试剂盒，该试剂盒及方法可用于该疾病的辅助诊断和 新药丌发，属于生物
技术介绍
沐erner纟宗合症(沐erner syndrome, WS)，又禾尔成人早老症(Adult progeria), 成人早衰老综合症(Adult premature aging syndrome)，是一种罕见的常染色体隐性 遗传性疾病。WS的临床表现主要发生在结缔组织，内分泌系统，免疫系统，神经系统 等。包括身材矮小，早生华发，皮肤纤维化、硬皮样改变，白内障，皮下组织钙化， 糖尿病，甲状腺功能低下，高脂血症，系统性红斑狼疮，痴呆，精神分裂症等。ws患 者在童年发育基本正常，到18岁后开始出现各种症状，由于皮下脂肪菲薄，以及皮肤 纤维化，形成了特殊的面部特征，包括假性突眼，喙状鼻，口周放射状沟纹，牙齿突 出，下颌后縮，被称为"鸟样面容"。WS患者可伴发各种肿瘤，包括软组织肉瘤，骨 肉瘤，黑素瘤，甲状腺癌，脑(脊)膜瘤等。由于WS患者早期出现多系统老化表现，其 寿命大大縮短，平均寿命仅47岁。WS发病机制的研究对阐明人类衰老的发生机制以及老龄化相关疾病具有重要的 借鉴作用，因此WS被称为"人类老化的天然基因模型"。1992年GOTO等将WRN基因 (WRN)定位于8pll. 1-21. 1， WRN全长5. 2kb，包含35个外显子，编码1432个氨基酸。 WRN蛋白是RecQ家族成员DNA解螺旋酶，它包含了 7个解螺旋酶的基序，其中2个是 ATP结合蛋白。DNA解螺旋酶的重要作用是在DNA复制过程中形成解链复合物，参与 DNA解链和DM损伤修复。结构分析显示WRN蛋白包括蛋白中部的RecQ型解螺旋结构 域和N端的核酸酶结构域。WRN蛋白既有3' -5'解螺旋酶活性，又有核酸外切酶活性。 在DNA代谢过程中产生的各种DNA结构均是WRN蛋白的底物。WRN蛋白C端1369-1402个氨基酸残基具有核酸定位作用。另外，在RecQ解螺旋 酶结构域中949-1092个氨基酸残基也具有核酸定位作用。WRN蛋白主要定位在细胞核 仁中，当DNA损伤时WRN蛋白在细胞核DNA损伤部位聚集。在WRN蛋白C端有两个结构域RecQ解螺旋酶保守结构域(helicase conserved region ， RQC)和解螺旋酶， 核糖核酸酶，C端保守结构(helicase， RNaseD， C-terminal conserved Region, HRDC)。 研究证实WRN蛋白通过这两个结构域与底物DNA或蛋白相互作用。在WS患者中均发现 WRN基因突变，到2006年共发现50个突变点，这些突变包括错义突变、框移突变、 无义突变等，分布于各个外显子。WRN基因具有明显的异质性，不同种族突变形式完 全不同。目前对于中国人群中Werner综合症的报道均为个案报道，也缺少基因诊断的 研究，对于中国人群WRN基因突变热点研究尚属空白。经过现有国内外文献检索，未见有Werner综合症WRN基因2806insA突变的相关 报道，中国人群中WRN基因的发现，不仅会促进该病发病机理等基础研究的发展，还 将大大促进Werner综合症的基因诊断和治疗的开展。通过产前筛查及新生儿WRN基因 突变筛查，可以降低Werner综合症患儿的出生率，指导携带致病基因的患者生活行为， 预防疾病发生，大大缓解社会压力。另外WRN基因研究对长寿与衰老的研究都会起到 重要作用。体外检测Werner综合症相关基因WRN的2806insA突变的试剂盒对于这些 学科研究与发展都是不可或缺的。
技术实现思路
本专利技术要解决的第一个技术问题是，提供一种诊断成人早衰老综合症(Werner综 合征)的方法，通过检测疑似患者的待测样本是否存在具有本专利技术所述的2806msA 突变而确认患者是否Werner综合征，为临床诊断和治疗提供参考。本专利技术要解决的第二个技术问题是，提供一种成人早衰老综合症(Werner综合征) 2806insA突变的试剂盒。本专利技术要解决的第三个技术问题是，提供成人早衰老综合症(Werner综合征) 2806insA突变在诊断Werner综合征相关疾病中的应用。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案一种诊断成人早衰老综合症的方法，包括如下步骤(1) 采集待测个体的血液、体液或组织标本，提取DNA;(2) 以该DNA为模板，以针对WRN基因所述突变位点设计的PCR引物进行PCR 反应，得到PCR反应产物；(3) 将得到的PCR产物进行测序分析，将所得标本序列与正常基因序列进行比较， 确认是否有突变；(4)根据以上结果判断待测个体是否为WRN基因突变导致的Werner综合症。 在本专利技术中，可采用本领域的检测点突变的常规方法来检测WRN基因的突变位点， 如PCR测序法。在本专利技术中使用的PCR引物可以依据已知的核苷酸序列，利用Pr imer Premier 5.() 进行设计，通常为15-30个碱基，GC含量为45-50%左右，在适当的温度下与木端特异 性结合。在本专利技术中，WRN基因的序列参考Genbank GeneID: NM—000553。所述针对WRN基因所述突变位点设计的PCR引物为WRN2806-F: 5' -CCCACGGAGGGTTTCTATCT-3' (SEQ ID No. 1)WRN2806-R: 5' -GAACCATTGGCAGTGCTGTC-3' (SEQ ID No.2) 一种检测成人早衰老综合症2806insA突变的试剂盒，试剂盒的成分和含量如下， 于一20。C保存20ul 10X PCR缓冲液(Phamiacia)，4ul 10mM dNTP混合液(Pharmacia)，2ul (5unit/ul) Taq DNA聚合酶(Takara)，各10ul (10pmol/ul) Fl (SEQ ID NO. 1)和Rl (SEQ ID NO. 2)引物， 1. 5ml纯7K。例如，本专利技术的一个实施方案中提供一个检测WRN基因突变的试剂盒，本容器内装 有用以检测WRN基因2806突变的成分，与之同时提供可以是经政府药物管理机构审核 的、有关药品或生物制品的制造、使用及销售信息。例如，采用PCR扩增后，直接检 测样品中WRN基因突变位点的试剂盒，可含有扩增引物、dNTP、用于PCR反应的DNA 聚合酶及其缓冲液、测序反应所需试剂等的一种或多种。本领域技术人员已知，以上 组分仅是示意性的，例如，所述引物可以采用上述的一对WRN2806-F和WRN2806-R引 物，所述的用于PCR反应的DNA聚合酶是能够用于PCR扩增的酶。本专利技术通过神经外科门诊收集脑膜瘤患者，在患者及家属自愿的前提下，签署知 情同意书后，留取5-10ml血样，建立住院病历资料库，详细记录患者病情、家系中发 病情况以及联系方式。然后应用酚氯仿抽提方法提取基因组DNA，定量后入库，-20°C 保存，每份DNA均准确对应登记的患者临床资料。根据Primer Premier 5. 0进行设计 引物，包含WRN基因2806位点及两侧序列，进行PCR扩增。对PCR产物进行直接测序 测序引本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种诊断成人早衰老综合症的方法，包括如下步骤： （１）采集待测个体的血液、体液或组织标本，提取ＤＮＡ； （２）以该ＤＮＡ为模板，以针对ＷＲＮ基因所述突变位点设计的ＰＣＲ引物进行ＰＣＲ反应，得到ＰＣＲ反应产物； （３）将得到 的ＰＣＲ产物进行测序分析，将所得标本序列与正常基因序列进行比较，确认是否有突变； （４）根据以上结果判断待测个体是否为ＷＲＮ基因突变导致的成人早衰老综合症。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郝淑煜，张力伟，张俊廷，吴震，王忠诚，
申请(专利权)人：北京市神经外科研究所，首都医科大学附属北京天坛医院，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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