本发明专利技术涉及“一种转ｓｃｋ／ｃｒｙｌＡｃ双价抗虫基因水稻品系科丰８号外源插入片段旁侧序列及应用”，属生物技术领域。５’端旁侧序列如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１所示，３’端旁侧序列如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ２所示。利用该旁侧序列设计特异性引物用于目的ＤＮＡ扩增，能建立灵敏、特异性的水稻品系科丰８号的品系特异性定性、定量ＰＣＲ检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是一种生物
的基因序列。具体的说，涉及一种转基因水稻品系科 丰8号的外源插入片段的旁侧序列。
技术介绍
水稻是我国最重要的粮食作物之一，随着转基因技术在水稻中的广泛研究和应用，己经有 多个转基因水稻品系进行了环境释放，申请商业化种植。对转基因植物进行品系特异性的检 测是对转基因植物进行监督管理，保障其健康发展的重要技术基础。而转基因植物的外源插 入片段的旁侧序列是转基因植物品系最重要的分子特征之一，因此，外源插入片段的旁侧序 列是建立转基因植物品系特异性检测方法的重要技术资料。目前己经有部分专利和文献报道了转基因植物外源插入载体旁侧序列，例如张大兵等人于2006年利用TAIL-PCR方法分析了玉米品系MON863的外源插入片段的旁侧序列，建立了转 基因MON863玉米的品系特异性检测方法，谢家建等人于2007年利用TAIL-PCR、 genome walking和LD-PCR等方法获得了转基因水稻克螟稻、Bt油优63和科丰6号的外源插入片段的旁 侧序列，并建立了品系特异性的检测方法。然而，在对现有的专利和文献的分析中发现，还 没有任何关于转基因水稻品系科丰8号的外源插入片段的旁侧序列的文章和专利报道。
技术实现思路
针对上述领域中的空白，提供了一种转基因水稻品系科丰8号的外源插入片段的旁侧序列。进一步，本专利技术还提供该转基因品系特异性的PCR检测方法。一种转基因水稻品系科丰8号的外源插入片段的旁侧序列，所述旁侧序列为5'端旁侧序 列，其特征在于5'端旁侧序列如SEQIDN01所示。一种转基因水稻品系科丰8号的外源插入片段的旁侧序列，所述旁侧序列为3'端旁侧序 列，其特征在于3'端旁侧序列如SEQIDN02所示。5'端旁侧序列的制备方法，其特征在于提取转基因水稻品系科丰8号植物基因组DNA，通 过TAIL-PCR扩增得到。3'端旁侧序列的制备方法，其特征在于提取转基因水稻品系科丰8号植物基因组DNA，通 过PCR扩增得到。转基因水稻品系科丰8号的外源插入片段的旁侧序列的定性PCR检测方法，其特征在于 所述PCR反应中的两条引物组合为5'端旁侧序列的特异性引物 一条引物为依据SEQIDNOl 中1-1110位序列设计的正向引物，另一条引物为依据SEQIDN01的1111-1747位序列设计的反向引物。所述正向引物为K8P1: 5，-ATATTCTGAAGTGGCCTGTT-3，， 所述反向弓I物为K8P2: 5 ，-TAATAGCGAAGAGGCCCGCA画3'。转基因水稻品系科丰8号的外源插入片段的旁侧序列的定性PCR检测方法，其特征在于 所述PCR反应中的两条引物组合为3'端旁侧序列的特异性引物 一条引物依据SEQIDN02 中l-583位序列设计的正向引物，另一条引物依据SEQIDNO2的584-650位序列设计的反向引物。所述正向序列为K8P3: 5'-TGCAAGTCCAGGGATGAAGA-3'， 所述反向序列为G3-PI: 5，-TTTATTTGTATAGTGGCGACC-3，。转基因水稻品系科丰8号的外源插入片段的旁侧序列定性PCR检测方法，所述PCR反应中 同时含有下列引物，正向引物为K8P1 5，-ATATTCTGAAGTGGCCTGTT-3，， 反向引物为K8P2: 5'-TAATAGCGAAGAGGCCCGCA-3'; 正向序歹U为K8P3: 5'-TGCAAGTCCAGGGATGAAGA-3，， 反向序列为G3-P1: 5'-TTTATTTGTATAGTGGCGACC陽3'。根据彭海英(彭海英.农杆菌介导的无选择标记转双价抗虫基因籼稻的获得.华中农业大 学硕士学位论文.2003)报道的用于转化的载体pCDMARUBAC-Hyg的结构(见图l)，用于 转化的目的基因(c^L4c基因和SCX基因)和选择标记基因(*堪因)位于两个独立的T-DNA 区域，其结构见图l。其中一个T-DNA由选择标记基因/7/^基因表达盒组成；另一个T-DNA由 oyL4c基因表达盒和SCK基因表达盒组成。本专利技术釆用常规方法，提取植物基因组DNA，利用TAIL-PCR分离法得到5'端旁侧序列 1755 bp，其核苷酸序列如SEQIDN01所示。通过分析，该5'端旁侧序列包括水稻基因组序 歹ij，位于水稻ll号染色体(GenBank登记号AP008217)的13191855- 13192963位，其核苷酸 序列与SEQ ID NO.l中从l-1110位的核苷酸序列完全相同；转化载体pCDMARUBAC-Hyg部分 序列，其核苷酸序列与SEQIDN0.1中1111-1747位的核苷酸序列完全相同；利用PCR扩增得到3'端旁侧序列650 bp，其核苷酸序列如SEQ ID N02所示。通过分析， 该3，端旁侧序列包括转化载体pCUBAC-HYG部分序列，其核苷酸序列与SEQ ID N0.2中的 1-583位的核苷酸序列完全相同；水稻基因组序列，位于水稻ll号染色体(GenBank登记号 AP008217)的13192994-13193060位，其核苷酸序列与SEQ ID NO.2中从584-650位的核苷酸序列完全相同。转基因水稻品系科丰8号的外源插入片段的旁侧序列的定性PCR检测方法，以5'端旁侧序 列和/或3'端旁侧序列作为目的DNA扩增片段。根据5'端旁侧序列设计特异性引物，其正向引 物可根据1-1110位的核苷酸序列设计，即是按照水稻基因组序列设计，位于水稻ll号染色体 (GenBank登记号:AP008217)的13191855- 13192963位，反向引物可根据1111-1747位的核 苷酸序列设计，即是按照转化载体pCDMARUBAC-Hyg部分序列设计，本专利技术设计的正向 引物为K8P1: 5，-ATATTCTGAAGTGGCCTGTT-3，，反向引物为K8P2: 5'-TAATAGCGAAGAGGCCCGCA-3'。根据3'端旁侧序列设计特异性引物，其正向引物可根据l-583位的核苷酸序列设计，即是 按照转化载体pCDMARUBAC-Hyg部分序列设计，反向引物可根据584-650位的核苷酸序列设 计，即是按照水稻基因组序列，位于水稻ll号染色体(GenBank登记号AP008217)的 13192994-13193060位，本专利技术设计的正向序列为K8P3: 5，-TGCAAGTCCAGGGATGAAGA-3，，反向序列为G3-Ph 5'-TTTATTTGTATAGTGGCGACC-3，。本专利技术首次克隆了转基因水稻品系科丰8号的外源插入片段的旁侧序列，并且明确了转基 因水稻品系科丰8号的外源插入片段的旁侧序列可以用作目的DNA扩增片段，建立灵敏、特 异性的转基因水稻品系科丰8号的品系特异性定性、定量PCR检测。本专利技术所克隆、分离的外 源插入片段的旁侧序列可以进一步用于建立转基因品系特异性PCR检测方法。附图说明图1 pCDMARUBAC-Hyg的T-DNA结构示意图， 图2科丰8号5 '端边界TAIL-PCR扩增图谱，M: DNA Marker DL2000,大小依次为2000 bp, 1000 bp, 750 bp, 500 bp, 250 bp, 100 bp本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种转基因水稻品系科丰８号的外源插入片段的旁侧序列，所述旁侧序列为５’端旁侧序列，其特征在于：５’端旁侧序列如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谢家建，王奕海，王锡锋，彭于发，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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