检查或测量细胞相关性分子总量的方法和装置制造方法及图纸

一种检查或测定来自实验对象的样品中细胞相关性分子总量的方法，包括如下步骤： （ａ）将来自实验对象的选择量的液体生物学样品点样到滤纸收集装置上； （ｂ）将滤纸收集装置与选择的稀释剂和溶胞试剂在选定的温度下接触给定的时间以产生可溶的样品； （ｃ）回收选定量的所说的可溶样品； （ｄ）在允许发生特异性结合的条件下将所说的可溶样品与至少一种细胞相关性分子特异性的结合配偶体接触；和 （ｅ）检查或测定样品成份与所说的至少一种结合配偶体发生的特异性结合的量，其中，检查或特异性结合的量显示了样品中细胞相关性分子的存在或含量。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为1992年10月30日的序号为968，793的部分继续。存在大量的细胞相关性分子，包括细胞表面抗原，胞内细胞因子，微生物抗原，药物试剂及其代谢物，和核酸。其中许多细胞相关性抗原涉及对免疫功能较重要的各种细胞对细胞的相互作用和通信。还有一些其它的分子是免疫机能障碍和其它疾病症状的重要标记物。特定分子的检查在对正常及反常情况的分析中可能是有用的。细胞因子细胞因子是一组较大的各种各样的生物活性蛋白质和多肽，一般具有相当低的分子量调节众多的细胞活性。例如，细胞因子调节B淋巴细胞的免疫球蛋白产量和各种细胞类型的生物合成活性。白细胞介素—2(IL—2)(最初发现为一种T细胞生长因子)和其它免疫学活性细胞因子与T细胞功能和各种造血细胞类型的生长及分化相联系。细胞因子一般以非构成方式产生，通常需要可能通过一种细胞表面受体对生产细胞的活化或刺激。尽管许多较好特征化的细胞因子由免疫系统的细胞产生，细胞因子也由范围较宽的各种细胞类型产生。典型地，一种给定的细胞类型产生一定数量的不同细胞因子。细胞因子影响大范围的各种免疫和炎症反应。其作用以复杂的相互作用网络来进行，其中一种细胞因子的释放可能导致一系列的多种生理学反应，有些还归功于其它细胞因子的诱导。使用体外培养系统对细胞因子的生产和作用进行了大量的研究。事实上，大多数细胞因子在血流中不可检测，即使在免疫应答期间也一样。因为在免疫应答中细胞因子的活性表现出所设计的在短范围和短时间间隔内作用，它们在非常低的浓度下一般显示活性。大多数细胞因子研究根据在各种生物学测定中对细胞因子生物学活性的测量进行。在免疫试验，如酶联免疫吸附试验(ELISA)中测量了血液中的细胞因子水平。然而，当对血清中来源于细胞的细胞因子进行检查时，这方面的研究受到一些局限，因为它们的浓度较低且在体内的半衰期极短。用单克隆抗体以ELISA对血清细胞因子的检测性受到一些因素的影响，如1)体内局部产生的细胞因子迅速被靶细胞受体吸收并可能不会到达血浆；2)细胞因子的半衰期短使取样时间变得很重要；和3)细胞因子蛋白质在样品贮存期间通常不稳定。一般来说，对存在于血清中的分子的免疫试验对于检测不能稳定贮存的蛋白质没有用处。由于所有上述原因，需要改进检查和测定血样中细胞因子的方法。微生物抗原大多数成功增殖的微生物中一些在进入身体部位的上皮细胞内或在其表面繁殖，导致在上皮内传播感染，接着排出到外表面。例如，通常限定于上皮表面的病毒感染包括流感，副流感，鼻病毒，冠形病毒和乳头瘤。在本领域需要一种简单的，直接的和敏感的方法，通过检查或测定在上皮细胞，组织或液体样品中与病毒相关的分子或抗原的总量来检测侵入上皮中的微生物的存在。一些较重要的病毒穿过上皮表面后一般形成全身性感染。这些包括细胞内的微生物。对于传播到全身的专性细胞内微生物，它们必须先进入血液或淋巴。这意味着它们必须作为一种自由生物体进入上皮下的淋巴腔或血管中，或先进入可动细胞(如白细胞)并由它载入血液或淋巴。感染白细胞的生物体的例子包括麻疹和小痘病毒。这些生物在细胞内增殖而能避开细胞内的防御机制，如溶酶体降解。如果能对含有该生物的体液或含该生物的宿主细胞以极微量的处理和加工样品进行简单直接和敏感的试验来检查和定量各种病原性微生物将有极大的益处。本专利技术试图提供这种试验方法。核酸细胞中DNA(脱氧核糖核酸)或RNA(核糖核酸)的总量是某些细胞相关性分子存在的有用标志。而且，DNA或RNA的检测对于鉴定恶性或恶性前细胞的存在可能是有用的。正常细胞仅含有单拷贝的细胞DNA而恶性细胞常是多倍体。通常用DNA结合染料以流式细胞光度术分析总细胞DNA来测定多倍体。本专利技术允许缺乏流式细胞光度计的实验室以直接试验检查多倍体或测量细胞内的DNA或RNA总量，因此，提供了一种在细胞样品中检查各种成分，和甚至肿瘤细胞的方法。细胞表面抗原大量分子，包括蛋白质、糖蛋白、糖脂，寡聚糖苷，和类似的物质在细胞膜表面表达。在细胞表面，或在细胞内分室里还能检测到的是由细胞内寄生物(如病毒)产生的分子。细胞表面分子也存在于细胞质中。常规流式细胞光度术试验检测或计数在其表面表达一种给定分子的细胞，这由观察或测量抗体与细胞上的该分子抗原决定基的结合来实现。熟知的具临床意义的细胞表面分子包括T细胞受体分子。许多这类分子以它们与特定单克隆抗体的反应来定义。特别地，表达CD4和CD8分子的T细胞之鉴别和计数已具有重大的临床实用性。事实上，追踪CD4＋细胞的循环水平是评介获得性免疫缺陷综合症(AIDS)进展的关键前兆指示剂。T细胞的两组主要的分子称为CD4和CD8。以其调节功能，分别为辅助剂/诱导剂和抑制剂/细胞毒素来区别。CD4分子是一种大约为55千道尔顿的糖蛋白单体，存在于细胞外，横跨膜和细胞质区域。CD4分子能发挥传导细胞内信号和调节T细胞活化的功能，T细胞的活化导致B细胞信号的产生和经细胞因子的释放诱导CDT细胞产生细胞毒性。另外，CD4可以作为附着分子帮助MHCII级分子或存在于细胞中的抗原与T细胞受体锚着。因此，CD4分子用作辅助T淋巴细胞的表型标记。一般来说，以细胞表面标记物对人类B和T淋巴细胞群的鉴定可得到正常及病理学状态下的免疫状态情况。例如，在大于90％的血液B淋巴细胞中发现细胞表面抗原CD19，CD20和CD21，而CD2和CD3几乎在全部正常外周血T淋巴细胞中表达。用于细胞介导免疫的T淋巴细胞依赖于其表型，对MHC的受体特异性和细胞功能可进一步分化成两类细胞群。一般来说，CD4＋CD8－辅助T淋巴细胞包含大约65％的外周T细胞并在与MHCII级分子相联系的抗原活化下能分泌细胞因子。另一类细胞群，即CD4－CD8＋细胞毒性淋巴细胞(大约35％的外周T细胞)在由MHC I级提供的抗原活化后能溶融靶细胞。经过对这些各种细胞表面标记物使用单克隆抗体试剂并结合流式细胞光度术方法可监测外周血淋巴细胞群中与各种自身免疫和免疫缺陷疾病，白血病和淋巴瘤，以及移植排异相联系的成分变化。在AIDS病例中，已发现CD4分子是人免疫缺陷病毒(HIV)的细胞表面受体并显示出可监测CD4 T淋巴细胞的减少，它是AIDS发展的特征。测定淋巴细胞群的早期方法，如以噬斑和细胞介导功能的分析具有高度技术依赖性并且不具有细胞谱系特异性。利用单克性抗体对细胞表面标记物的有效性，以流式细胞光度术对细胞表面CD4的测量扩展了以免疫监测对淋巴细胞群鉴定的研究。然而，这一方法需要使用复杂的程序，昂贵的仪器和很高的劳动强度。TRAXTMCD4是一种酶免疫试验，用它可以全血溶胞产物中鉴定总CD4蛋白质。使用这种基于酶免疫试验(EIA)和是到的结果与以流式细胞光度术测定的CD4T淋巴细胞计数值相比具有大于88％的相关性。干燥血迹(DBS)样品收集介质被证实为对流行病学的研究是一种有用的方法。按常规收集新生儿脚后跟穿刺血样并显示出对PKU和甲状腺机能减退，镰状细胞性贫血和其它血红蛋白病，以及HIV的检测是有用的。在发展中国家，成人手指穿刺DBSS提供了一种给公众取样并向试验实验室运输稳定样品的方法。然而，这一技术至今来未被运用到对包含在细胞内或在细胞表面的细胞相关性分子的鉴定技术中。直到现在，干燥的血液收集方法尚未用于对血液中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：乔治·H·帕森，约翰·A·玛格丽特，鲁格·E·阿瑟，
申请(专利权)人：因诺詹妮蒂克斯公司，
类型：发明
国别省市：