一种新的多肽——人dUTP焦磷酸酶13和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人ｄＵＴＰ焦磷酸酶１３，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人ｄＵＴＰ焦磷酸酶１３的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽－－人dUTP焦磷酸酶13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。在生物体的DNA合成过程中，尿嘧啶(dUTP)很可能被DNA聚合酶当作dTTP被掺入到DNA链中，造成错误掺入，从而导致修复损伤、DNA的破碎和细胞凋亡等很多结果。在生物合成嘧啶过程中产生的dUTP是dUTP焦磷酸酶的底物，dUTP焦磷酸酶的作用是催化水解dUTP，使其成为dUMP和PPi，从而控制dUTP在细胞内的水平。(J Mol Biol(1999)288,275-287)当胞内的dUTP水平持续提高时，一连串的过程最终会导致损伤修复位点交迭、不可逆的DNA破碎、细胞凋亡等结果。因此，通过dUTP焦磷酸酶来控制dUTP的胞内水平对生物体来讲是不可缺少的。根据光亲和标记和定点诱变的结果，已经发现dUTP焦磷酸酶有一个beta-发卡结构域(beta-hairpin motif)，以及一些有特定功能的氨基酸残基，这些结构域目前研究得不是很清楚，但它们被推测与dUTP焦磷酸酶的活性、dUTP焦磷酸酶与dUTP的结合等等有关。研究的结果证明，dUTP焦磷酸酶的活性和与dUTP结合的作用在很大程度上都与beta-hairpin motif的芳香族侧链结构有关。(JMol Biol(1999)288,275-287)根据研究，叶酸盐激动剂/拮抗剂和胸苷酸合成酶抑制剂的抗肿瘤作用都与dUTP的错误掺入有关。而dUTP的水平是由dUTP焦磷酸酶来调控的，因此，dUTP焦磷酸酶的活性是化学治疗和抗反向病毒治疗的关键。(J Mol Biol(1999)288,275-287)研究还发现，dUTP焦磷酸酶在肺癌、结肠癌等病人的组织内表达量特别低，因此，可以利用这些疾病对dUTP焦磷酸酶抑制剂的极度敏感而使其得以治疗。特别要提及的是，人内生反向病毒(HERV)编码的一种dUTP焦磷酸酶，已被推测为HIV感染的协助成分，因此，它也是抑制HIV感染的有效靶蛋白。(J MolBiol(1999)288,275-287)通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株以及前列腺组织中，本专利技术的多肽的表达谱与人dUTP焦磷酸酶26的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人dUTP焦磷酸酶13。由于如上所述人dUTP焦磷酸酶13蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人dUTP焦磷酸酶13蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人dUTP焦磷酸酶13蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽－－人dUTP焦磷酸酶13以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人dUTP焦磷酸酶13的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人dUTP焦磷酸酶13的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人dUTP焦磷酸酶13的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽－－人dUTP焦磷酸酶13的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽－－人dUTP焦磷酸酶13的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人dUTP焦磷酸酶13异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中125-472位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1017位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人dUTP焦磷酸酶13蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人dUTP焦磷酸酶13蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人dUTP焦磷酸酶13表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与人dUTP焦磷酸酶13结合时，一种可引起该蛋白质改变从而调节该蛋白质活性的分子。激动剂可以包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合人dUTP焦磷酸酶13的分子。“拮抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人ｄＵＴＰ焦磷酸酶１３，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]