一种新的多肽——人RNA解螺旋酶12和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人ＲＮＡ解旋酶１２，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免性疫疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人ＲＮＡ解旋酶１２的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽--人RNA解旋酶12，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。在细胞的众多活动中，RNA结构的调控如前体RNA的剪接、剪接体的装配、蛋白翻译等都是必需的。这些过程通常由各种不同的RNA解螺旋酶来调节完成。不同来源的RNA解螺旋酶构成了一很大的蛋白家族，在很多RNA起重要作用的生物系统中均可检测到该酶的存在。它们广泛地分布于从原核生物(包括病毒)到低等及高等生物的各组织器官中，参与细胞核及线粒体的分裂、RNA的编辑、rRNA的加工、转录起始、，细胞核mRNA的转运及mRNA的降解等过程。RNA解螺旋酶被认为是细胞发育及分化过程中的重要因子，其中的一些还在病毒单链RNA的转录及复制过程中起作用。其在生物体内为癌症、神经系统疾病及免疫系统疾病的诊断、预防及治疗提供了有效的手段。RNA解螺旋酶根据其结构上的特征分为不同的亚家族，亚家族Ⅰ和亚家族Ⅱ。所有的解螺旋酶均含有两个Walker型NTP结合结构域---A结构域(或叫ATP酶A结构域)和B结构域(或称ATP酶B结构域)。亚家族Ⅰ中的成员含有保守的ATP酶A结构域GXXXXGKT。后发现，有一些RNA解螺旋酶的ATP酶结构域A在一些氨基酸位点上有突变，其ATP酶A结构域的保守序列为AXXGXGKT，因而将这些蛋白分为一类，即亚家族Ⅱ。在亚家族Ⅱ中，有部分蛋白在ATP酶结构域B中含有保守的DEAD盒，后发现该亚家族中的成员按其DEAD盒的不同又可分为三种不同的亚类，即DEAD盒蛋白、DEAH盒蛋白及DEXH盒蛋白。1995年，Zhang S.等人从牛内克隆得到了NDHⅡ蛋白，该蛋白为含DEAD盒的RNA解螺旋酶家族的成员。在其结构域Ⅱ中含有DEIH基序，该蛋白与人解螺旋酶A及果蝇的Mle蛋白亦有较高的同源性。这三者均被认为在细胞核DNA及RNA的代谢过程中起重要作用。RNA解螺旋酶A在生物体内即具有RNA螺旋酶活性又具有DNA螺旋酶活性。因而，该酶在RNA的转录调节过程中起着重要的生物学功能。由上可知，含DEAD盒的RNA解螺旋酶蛋白家族的成员在RNA的转录调节过程中起着重要的生物学功能，该类蛋白的表达异常将引发一些因转录调节异常而引起的代谢紊乱症、各种免疫系统疾病及一些相关组织的恶性疾病。通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本专利技术的多肽的表达谱与人RNA解旋酶95的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人RNA解旋酶12。由于如上所述人RNA解旋酶12蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人RNA解旋酶12蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人RNA解旋酶12蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽--人RNA解旋酶12以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人RNA解旋酶12的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人RNA解旋酶12的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人RNA解旋酶12的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽--人RNA解旋酶12的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽--人RNA解旋酶12的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人RNA解旋酶12异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中17-349位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-4101位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人RNA解旋酶12蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人RNA解旋酶12蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人RNA解旋酶12表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人ＲＮＡ解旋酶１２，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]