一种新的多肽--花生四烯酸环氧酶42.46和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－花生四烯酸环氧酶４２．４６，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如类固醇、脂肪酸代谢紊乱性疾病、血管平滑肌功能异常相关疾病、心律失常等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的花生四烯酸环氧酶４２．４６的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——花生四烯酸环氧酶42.46，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。P450在NADPH依赖性的花生四烯酸环氧化中具重要作用。P450花生四烯酸环氧酶是一种对人类心脏中的内源性花生四烯酸起环氧化作用的酶，它催化的反应具异构选择性，它属于CYP2基因家族，在肝脏、肾脏、肺及垂体等组织中均有活性。它催化的产物为EET，该催化反应需P450的介导，EET在调节膜的离子流量、促进肽激素释放及在血管平滑肌收缩等方面具重要功能，说明环氧化作用有重要的生理功能。存在于肝脏、肾脏、肺及血浆中的EET具手性，说明P450在花生四烯酸的生物激活方面有重要作用。P450起源的花生四烯酸的代谢产物和高血压的病理生理相关，EET还对心脏血管具有一定功效，如它会导致肾脏动脉血管收缩，肠及冠状动脉舒张，从而抑制血小板集合，此外它还会加剧心脏局部缺血。1996年Moomaw CR等人克隆出一0.9kb长、与鼠CYP2J1同源的SW2-14的cDNA，它是CYP2基因家族的新成员，其长度为1876kb，在6号到1511号核苷酸之间有一个开放阅读框，以ATG为起始密码子，TAA为终止密码子，并含有一5′端的短的非编码区，以及3′端具polyA的364个核苷酸组成的非编码区，它编码512个氨基酸组成的、分子量为57653Dal的蛋白质，该蛋白有一个血红素结合区(FSIGKRACLGEOLA)，其448位是不变的Cys，它被称为人CYP2J2。该蛋白在心脏中高度表达，而在肝脏、肠、肾脏中含量低，而大脑、肺中不含有。CY2J2催化区异构及立体异构的花生四烯酸反应，它是心脏中主要的花生四烯酸环氧酶，心脏的花生四烯酸代谢除了环加氧酶、脂肪氧合酶催化外，P450单氧酶也是主要酶之一。P450单氧酶在药物、致癌物等外源性复合物的代谢中具重要功能，它也能被内源性的底物如类固醇、脂肪酸等激活。P450单氧酶、P450花生四烯酸环氧酶等酶体系可能在脊椎动物心脏的生理、病理中有重要作用。本专利技术的新的多肽与已知的人细胞色素P450花生四烯酸环氧酶组成成分在蛋白水平上具45％的同源性和63％的相似性，并与之具有相似的结构特征，由此认为其是一种新的人细胞色素P450花生四烯酸环氧酶组成成分，命名为多肽命名，并与已知蛋白具有相似的生物学功能，它与高血压、平滑肌收缩、冠状动脉舒张等密切相关，可能在维持心脏动态平衡方面也有作用，改变其浓度会引起心脏功能紊乱。此外，它在上述相关疾病的诊断、治疗中亦有一定作用。由于如上所述花生四烯酸环氧酶42.46蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的花生四烯酸环氧酶42.46蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新花生四烯酸环氧酶42.46蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——花生四烯酸环氧酶42.46以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码花生四烯酸环氧酶42.46的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码花生四烯酸环氧酶42.46的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产花生四烯酸环氧酶42.46的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——花生四烯酸环氧酶42.46的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——花生四烯酸环氧酶42.46的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与花生四烯酸环氧酶42.46异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中1009-2169位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2316位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制花生四烯酸环氧酶42.46蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与花生四烯酸环氧酶42.46蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于花生四烯酸环氧酶42.46表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与花生四烯酸环氧酶42.46结合时，一种可引起该蛋白质改本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－花生四烯酸环氧酶４２．４６，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]