一种检测多种维生素制剂中维生素B12有关物质的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测多种维生素制剂中维生素B12有关物质的方法，所述方法包括如下步骤，色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂；以磷酸氢二钠溶液流动相A、甲醇为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长：300～400nm；柱温：20～50℃；流速：0.5～2.0mL/min；进样量：300～700μl；运行时间：100～200分钟。样品溶液制备：采用萃取法制备供试品溶液，其浓度可以为0.5～100μg/ml，另取供试品溶液，稀释50倍后作为对照溶液。测定：将上述溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。本发明专利技术简单高效、专属性强、操作方便，可快速高效的检测出多种维生素制剂中维生素B12的有关物质，有效控制了多种维生素复方制剂的质量。

A method for the detection of vitamin B12 related substances in multivitamin preparations

The invention discloses a method for detecting related substances of vitamin B12 in multivitamin preparations, the method comprises the following steps: eighteen, chromatographic conditions of alkyl silane bonded silica as filler of chromatographic column; the solution of sodium hydrogen phosphate two A, mobile phase methanol as mobile phase B, gradient elution; detection wavelength: 300 ~ 400nm; column temperature: 20~50 C; flow rate: 0.5 ~ 2.0mL/min; sample size: 300~700 L; run time: 100~200 minutes. Preparation of sample solution: the sample solution was prepared by extraction method, and its concentration could be 0.5 to 100 g/ml, and then the sample solution was diluted for 50 times as a control solution. Determination: the above solution was injected into the high performance liquid chromatograph, and the chromatograms were recorded and analyzed. The invention is simple, efficient, specific and easy to operate. It can detect the related substances of vitamin B12 in various vitamin preparations quickly and efficiently, and effectively control the quality of various vitamin compound preparations.

【技术实现步骤摘要】
一种检测多种维生素制剂中维生素B12有关物质的方法
本专利技术涉及药物分析领域中一种检测多种维生素制剂中维生素B2有关物质的方法。
技术介绍
维生素B12(VitaminB12)又称钴胺素或氰钴素，它是一种含3价钴的多环系化合物，4个还原的吡咯环连在一起变成为1个咕啉大环(与卟啉相似)，是维生素B12分子的核心，含这种环的化合物都被称为类咕啉，也是唯一含金属元素的维生素。维生素B12为浅红色的针状结晶，易溶于水和乙醇，在pH值4.5～5.0弱酸条件下最稳定，强酸(pH<2)或碱性溶液中分解，遇热可有一定程度破坏，但短时间的高温消毒损失较小，遇强光或紫外线易被破坏。自然界中的维生素B12都是微生物合成的，高等动植物不能制造维生素B12。维生素B12的主要生理功能是参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血；防止大脑神经受到破坏。鉴于维生素B12的重要作用，含维生素B12的制剂的质量至关重要，经查阅国内外药典及文献，CP2015、EP8.0及BP2013中维生素B12原料标准只对其总杂进行了控制，均未收载维生素B12制剂中有关物质。而多种维生素组成的复方胶囊制剂，成份复杂，目前尚未有多种维生素制剂中关于维生素B12有关物质测定的报道，本专利技术对维生素B12的杂质进行了全方位的研究，对多种维生素制剂中维生素B12的单杂和总杂分别进行了控制，填补了多种维生素组成的复方制剂中维生素B12有关物质检测方法的空白，更加严格控制了产品质量，保证用药安全。本方法专属性、重现性良好，能够快速有效的分离测定出多种维生素制剂中维生素B12的有关物质，可有效控制多种维生素制剂的质量和疗效。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种简便易行、灵敏度高、重现性好的多种维生素制剂中维生素B12有关物质的检测方法。所述方法包括：将含维生素B12的多种维生素制剂经过前处理配制成检测溶液，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱，采用磷酸氢二钠溶液流动相A、甲醇为流动相B，记录色谱图。优选的，取本品内容物适量，加三氯甲烷5～50ml振摇使分散，加水萃取3次，合并层溶液，再用适量三氯甲烷清洗，加水稀释至每毫升溶液中约含维生素B12为10～100μg的溶液，离心，上清液滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取供试品溶液，稀释50倍后作为对照溶液。优选的，所述供试品溶液制备中的萃取剂为水；对照品溶液制备中的稀释剂为水。优选的，所述流动相为磷酸氢二钠溶液(流动相A)、甲醇(流动相B)。优选的，所述柱温为20～50℃。优选的，所述流动相的流速为0.5～2.0mL/min。优选的，所述色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶。优选的，所述检测波长为300～400nm。本专利技术的要点在于我们采用HPLC法高效快速测定多种维生素制剂中维生素B12的有关物质。本方法专属性强，重现性好、灵敏度高，且检测成本低、可广泛地应用于药物分析领域中，从而更好地确保含维生素B12的多种维生素制剂的质量及有效性。附图说明图1：实施例1中多种维生素制剂中维生素B12有关物质测定的阴性样品图谱图2：实施例1中多种维生素制剂中维生素B12有关物质测定的对照溶液图谱图3：实施例1中多种维生素制剂中维生素B12有关物质测定的供试品图谱图4：实施例2中多种维生素制剂中维生素B12有关物质测定的系统适用性图谱图5：实施例3中多种维生素制剂中维生素B12有关物质测定图谱图6：实施例4中多种维生素制剂中维生素B12有关物质测定图谱具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术的技术方案进行详尽地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例11、色谱条件仪器：高效液相色谱仪；色谱柱：AQ-C18柱(型号：Ultimate，250×4.6mm，5μm)；流动相A：磷酸氢二钠溶液、流动相B：甲醇；检测波长：361nm；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；运行时间：约160分钟；进样量：500μl按下表进行梯度洗脱：2、样品制备(1)流动相的制备流动相A：配制0.025mol/L的磷酸氢二钠溶液(用磷酸调节pH为3.5)；流动相B：甲醇。(2)供试品溶液制备避光操作。取本品内容物适量(约相当于维生素B1245μg)，精密称定，置分液漏斗中，加三氯甲烷15ml振摇使分散，用水萃取3次，第一次15ml，以后每次5ml，合并水层溶液，再用10ml三氯甲烷清洗一次，水层溶液置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，离心(3000转/分钟)10分钟，上清液滤过，取续滤液作为供试品溶液。(3)阴性样品溶液制备取阴性样品适量，同供试品溶液方法制备。(4)对照溶液制备精密量取供试品溶液2ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。(5)实验结果精密量取供试品溶液、阴性样品、对照溶液各500μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，图谱见说明书附图1、2、3。实施例2溶剂：水。供试品溶液：同实施例1中“供试品溶液制备”方法制备。阴性样品溶液：同实施例1中“供试品溶液制备”方法制备。原料溶液：取维生素B12原料适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含维生素B121.8μg的溶液，摇匀，滤过，即得。精密量取上述溶液各500μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。图谱见说明书附图4。结果显示：阴性样品和溶剂对维生素B12及其杂质峰没有干扰，拖尾因子、理论板数符合规定，分离良好，表明系统适用性试验结果良好。实施例3仪器：高效液相色谱仪；色谱柱：AQ-C18柱(型号：Ultimate，250×4.6mm，5μm)；流动相A：磷酸氢二钠溶液、流动相B：甲醇；检测波长：355nm；柱温：35℃；流速：1.2ml/min；运行时间：约160分钟；进样量：500μl按下表进行梯度洗脱：时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)085153085153184161008416101406011085151608515供试品溶液制备方法照实施例1中“供试品溶液制备”的方法进行，测定图谱见说明书附图的图5。实施例4仪器：高效液相色谱仪；色谱柱：AQ-C18柱(型号：Ultimate，250×4.6mm，5μm)；流动相A：磷酸氢二钠溶液、流动相B：甲醇；检测波长：365nm；柱温：25℃；流速：0.8ml/min；运行时间：约160分钟；进样量：500μl按下表进行梯度洗脱：供试品溶液制备方法照实施例1中“供试品溶液制备”的方法进行，测定图谱见说明书附图的图6。实施例5未破坏：取本品内容物适量(约相当于维生素B1245μg)，精密称定，置分液漏斗中，加三氯甲烷15ml振摇使分散，然后加水振摇，用水提取3次，第一次15ml，以后每次5ml，合并水层溶液，用10ml三氯甲烷清洗一次，水层置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，离心(3000转/分钟)10分钟，上清液滤过，取续滤液，作为供试品溶液，即得。阴性样品、辅料同法制备。表——维生素B12样品专属性试验过程原料贮备液的配制：取维生素B12原料适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含维生素B1218μg的溶液，摇匀，即得。表——维生素B1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测多种维生素制剂中维生素B12有关物质的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：色谱条件：以AQ‑C18为色谱柱；以0.020～0.026mol/L磷酸氢二钠溶液(磷酸调pH3.5)为流动相A，以甲醇为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长：300～400nm；柱温：20～50℃；流速：0.5～2.0mL/min；进样量：300～700μl，运行时间100～200分钟。样品溶液的配制：取本品内容物适量，加有机溶剂5～50ml振摇使分散，萃取剂萃取3次，合并水层溶液，再用适量有机溶剂清洗，加水稀释至每毫升溶液中约含维生素B12为0.5～100μg的溶液，离心，上清液滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取供试品溶液，稀释后作为对照溶液。测定：将供试品溶液和对照溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图测定。

【技术特征摘要】
1.一种检测多种维生素制剂中维生素B12有关物质的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：色谱条件：以AQ-C18为色谱柱；以0.020～0.026mol/L磷酸氢二钠溶液(磷酸调pH3.5)为流动相A，以甲醇为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长：300～400nm；柱温：20～50℃；流速：0.5～2.0mL/min；进样量：300～700μl，运行时间100～200分钟。样品溶液的配制：取本品内容物适量，加有机溶剂5～50ml振摇使分散，萃取剂萃取3次，合并水层溶液，再用适量有机溶剂清洗，加水稀释至每毫升溶液中约含维生素B12为0.5～100μg的溶液，离心，上清液滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取供试品溶液，稀释后作为对照溶液。测定：将供试品溶液和对...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵爱霞，解洪福，王晓伟，
申请(专利权)人：济南维瑞医药科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37