一类茶树微管蛋白特异表达序列标签及其生物芯片制造技术

一类分离出的茶树微管蛋白特异表达序列标签的序列，其特征在于：表达序列标签具有ＳＥＱ　　ＩＤ　　Ｎｏ．１～ＳＥＱ　　ＩＤ　　Ｎｏ．３所示的序列；所示３条序列中的一条或数条的组合；每条序列的互补序列或同源序列；每条序列中８～１００个连续核苷酸为探针的序列或其互补序列。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，尤其涉及一类茶树微管蛋白特异表达序列标签及其生物芯片。微管蛋白是真核细胞的一种重要蛋白质，是细胞骨架的主要组成部分，在植物生长、细胞的形态发生、在细胞质的组成中起重要作用，还具有大量的运动功能，包括小泡运输、染色体运动、细胞极性决定，同时也在信号转导和一些除草剂在植物细胞中的定位起作用。
技术介绍
生物体基因组中可转录表达的序列(即基因)仅占总序列的2％左右，对这部分序列进行测定，将直接导致新基因的发现，并获取基因组中与产业化关系最为密切的信息。20世纪80年代，高通量的自动测序的出现，使从质粒互补脱氧核糖核酸(Complementary DNA，简称cDNA，下同)文库随机选取许多cDNA克隆和测定来自非载体两端的几百个碱基(Base Pair，简称bp，下同)的脱氧核糖核酸(简称DNA，下同)序列成为可能。这些短的DNA序列叫作“表达序列标签”(Expressed Sequence Tags，简称ESTs)。表达序列标签的概念最早是由Adams等在1991年提出来的(Science，252(5013)1651-1656)。随后Venter等(1991)(Science，252(5013)1651-1656)创立了大规模表达序列标签技术，其基本特征就是从以质粒为载体，构建完成的目的组织cDNA文库中，随机选择许多cDNA克隆，利用质粒上携带的通用引物对cDNA两端进行一轮脱氧核糖核酸序列测定，所获得的来自3′端或5′端的几百个碱基的非载体短脱氧核糖核酸序列。1992年Sikela和Matsubara(Sikela，et al.Nucleic Acids Research 19，1837-1843；Matsubara，et al.Nature Genetics，2，173-179)针对获得大量信使核糖核酸(mRNA，下同)序列的迫切需要，提出大规模cDNA测序的研究战略。简而言之，表达序列标签是来自表达基因片段3′端或5′端的短脱氧核糖核酸序列(通常为300-500bp)，代表一个特定组织或发育阶段的表达基因部分转录片段。表达序列标签技术对于基因组研究缺乏的物种，如茶树，具有特别重要的意义和价值。根据表达标签序列提供的序列信息设计合成基因特异引物(Gene specific primer，GSP)在使用Oligo(dT)对mRNA进行反转录的同时加上锚定引物(Anchored primer)，然后在总RNA中，采用cDNA末端快速扩增(Rapid amplification cDNA ends)技术，获得目的基因的全长序列。也可以用该标签序列提供的信息设计引物，合成探针对cDNA文库进行筛选，挑取最长的阳性克No.1～SEQ ID No.3所示的序列；所示的序列中的一条或数条的组合；每条序列的互补序列或同源序列；每条序列中的8～100个连续核苷酸序列或其互补序列作为基因表达分析检测的探针。8.根据权利要求7所述的一种茶树微管蛋白基因表达的分析检测，其特征在于所说的茶树微管蛋白基因表达的分析检测方法，它的步骤为1)靶基因组织总RNA或mRNA的提取；2)甲醛凝胶变性电泳分离RNA；3)将变性电泳后的RNA转移至尼龙膜或硝酸纤维素膜；4)利用SEQ ID No.1～SEQ ID No.3所示的序列、同源序列、互补序列、8-100个核苷酸序列为探针，采用同位素法制备探针；5)探针与靶基因杂交、放射自显影，通过定性、定量比较杂交图谱，可以明确基因是否表达、表达的活性是上调还是下调。9.一种茶树微管蛋白基因的克隆，其特征在于利用表达序列标签具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.3所示的序列、所示的序列中的一条或数条的组合、每条序列的互补序列或同源序列、每条序列中的30～100个连续核苷酸为探针的序列或其互补序列来合成PCR扩增的基因特异引物、扩增微管蛋白基因全长的5’或3’引物。10.根据权利要求9所述的一种茶树微管蛋白基因的克隆，其特征在于所说的茶树微管蛋白基因的克隆方法，它的步骤为1)总RNA的提取和mRNA的分离；2)PCR法合成5’或3’cDNA；3)利用表达序列标签具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.3所示的序列、同源序列、互补序列或30～100个连续核苷酸来合成基因特异引物，PCR快速扩增末端cDNA；4)Southern杂交或克隆测序鉴定PCR产物的特性；5)当PCR产物被部分或全部测序所鉴定后，以5′cDNA为模板，用表达序列标签5’或3’设计的引物，采用长距离PCR扩增获得基因全长。量代谢、胞间和胞内信号传导、免疫反应的产生、细胞迁移的基因组分子图谱等。表达序列标签的生物芯片用于生物功能的研究和检测平台。生物包括动物、植物以及它们的器官、植物的种子、动植物细胞和它们的产物；所说的生物功能的研究包括基因药物、疫苗、植物的抗逆性、动植物育种和植物新品种的产生、动植物生长和发育的机理和药物的毒理学；生物功能的检测包括转基因植物的安全性检测、食物成分的功能性评估、病原体的检测和诊断、生物物种的鉴定，包括动植物和微生物。抗逆性包括抗干旱、抗病害、抗虫害、抗低温和抗盐碱的特性。通过对茶树微管蛋白表达序列标签及其构成的生物芯片进行基因表达分析，有助于发现并克隆基因家族新成员、基因定位克隆、作为序列标签位点(Sequence-Tagged Sites，简称STSs)进行染色体的基因定位和基因图谱制作、遗传突变位点的鉴定、分析基因在不同组织中的表达特异性和建立DNA物理图谱和对细胞和有机体的整体研究等。正因为表达序列标签具有如此的优越性，因此表达序列标签测序已经成为许多基因组研究机构的工作重点。
技术实现思路
本专利技术一个目的是提供一类茶树微管蛋白特异表达序列标签及其生物芯片。本专利技术另一个目的是提供一种茶树微管蛋白基因表达的分析检测。本专利技术另一个目的是提供一种茶树微管蛋白基因的克隆。一类分离出的茶树微管蛋白特异表达序列标签的序列表达序列标签具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.3所示的序列；所示3条序列中的一条或数条的组合；每条序列的互补序列或同源序列；每条序列中8～100个连续核苷酸为探针的序列或其互补序列。它的制备方法为1)茶树总核糖核酸(RNA)提取；2)信使核糖核酸(mRNA)分离与纯化；3)采用聚合酶链反应(PCR)法合成互补脱氧核糖核酸(cDNA)第一链和第二链；4)cDNA酶切、纯化，并与载体连接；5)产生噬菌体文库与质粒cDNA文库转化；6)重组质粒的培养和提取；7)表达序列标签序列的测定；8)剔除载体序列、冗余序列，互联网数据库进行检索、分类，获得SEQ ID No.1～SEQ IDNo.3表达序列标签序列。一种由权利要求1所述表达序列标签所组成的生物芯片在载体上结合有SEQ ID No.1～SEQ ID No.3所示的序列；同源序列或其互补序列的核酸分子；所说的核酸分子是脱氧核糖核酸；核糖核酸和多聚寡核苷酸。所说的芯片制备方法为1)对SEQ ID No.1～SEQ ID No.3表达序列标签进行重新PCR扩增；2)PCR产物纯化处理后用于芯片制作；3)芯片由芯片点样仪点制。所说的载体为固相载体或液相载体；固相载体为玻片、硅片本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈亮，徐幼萍，赵丽萍，高其康，
申请(专利权)人：中国农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：