从番茄酱中提取用于转基因成分检测的DNA的方法技术

本发明专利技术的内容是从番茄酱中提取ＤＮＡ，用于转基因成分的检测。与常规方法相比，本方法的特点是：在ＤＮＡ提取过程中增加了样品的预处理过程，从而使番茄酱沉淀物的ｐＨ值能满足后续提取过程的要求；通过增加三氯甲烷＋异戊醇抽提的次数和溴代十六烷基三甲胺沉淀的时间，有效地去除蛋白质和多糖等杂质；将所提取的ＤＮＡ溶解在３０μＬ体积的去离子水中，取１５μＬ用作一次ＰＣＲ反应，以增加反应体系中ＤＮＡ模板的浓度。此方法快速、简便、特异性强，效率高，适合番茄酱等深度加工食品中转基因成分的定性检测。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
从番茄酱中提取用于转基因成分检测的ＤＮＡ的方法，它由下述步骤组成：（１）将番茄酱离心，沉淀，取２－４ｇ沉淀，用１－３倍番茄酱体积的ｐＨ＝８．０的０．１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ的溶液洗涤３－５次；（２）将步骤（１）获得的 沉淀２－４ｇ，加入１０－１５ｍＬ经６５℃预热的溴代十六烷基三甲胺提取缓冲液，混匀，６５℃水浴１－１．５小时，期间每隔１０分钟轻轻颠倒混匀一次；（３）取出静置冷却至２０－２５℃，于１２０００转／分钟，离心１２分钟，取上清；（４ ）加入与步骤（３）所得到的上清液等体积的体积比为２４∶１的三氯甲烷∶异戊醇，缓慢颠倒摇匀５分钟，１００００转／分钟，离心１０分钟，取上清，再加入等体积的体积比为２４∶１的三氯甲烷∶异戊醇抽提一次，取上清；（５）加入２倍体积的溴代十六 烷基三甲胺沉淀液，摇匀，２０－２５℃静置５０－９０分钟，１２０００转／分钟，离心１０分钟，弃上清；（６）沉淀加入１．２ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ溶液１ｍＬ，溶解沉淀，２０－２５℃静置５分钟，加入等体积的体积比为２４∶１的三氯甲烷∶异戊醇 ，颠倒摇匀１分钟，１２０００转／分钟，离心１０分钟，取上清；（７）加入所取上清液１／１０体积的３ｍｏｌ／Ｌ乙酸钠和等体积的４℃预冷异丙醇，缓慢混匀，４℃静置过夜，１４０００转／分钟，离心１５分钟，弃上清；（８）用４℃预冷４０ ０μＬ体积百分比为７０％的乙醇洗涤沉淀，除去残留的乙醇，干燥沉淀，得到ＤＮＡ沉淀；（９）加入２５－３５μＬ经灭菌的去离子水，溶解从番茄酱中提取的ＤＮＡ沉淀。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：金红，赵昕，王永，程奕，郑贵忠，
申请(专利权)人：天津市农业科学院中心实验室，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]