一种植物病毒检测基因芯片制造技术

一种基因芯片的用途，其特征在于将基因芯片用于同时检测２～１２２种植物病毒。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物病毒检测基因芯片，更具体地说涉及一种利用基因芯片检测样品中是否含有植物病毒的方法、用于PCR的新的核酸引物以及用于检测PCR产物的探针。
技术介绍
植物病毒是一种普遍存在的病害因素，植物病毒侵染给农业带来严重的经济损失同时也是农业可持续发展的瓶颈因素之一。目前，全球每年由植物病毒造成的农作物直接损失为200多亿美元，其中对中国造成高达几百亿人民币的损失，这还不包括地方特有的经济作物、野生和半野生资源型植物，以及为了控制病毒病所做出的努力和代价，也不包括植物病毒引起作物品质下降造成的间接损失。我国的作物种植业、园艺业、药材生产行业也受到植物病毒的严重影响，例如苜蓿花叶病毒(AlMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、马铃薯Y病毒(PVY)、PVA(马铃薯A病毒)、马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯帚顶病毒(PMTV)、马铃薯卷叶病毒(PLRV)、马铃薯V病毒(PVV)、马铃薯M病毒(PVM)和马铃薯纺锥块茎类病毒(PSTVD)以及香蕉束顶病毒(BBTV)、百合无症病毒(LSV)、南瓜花叶病毒(SqMV)、柑橘裂皮类病毒(CEVD)、苹果茎沟病毒(ASGV)、桃X植原体(PXP)、PVS(马铃薯S病毒)、百合斑驳病毒(LMoV)、芋花叶病毒(DsMV)、小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)、西瓜花叶病毒(WMV)、香石竹环斑病毒(CRSV)、椰子死亡类病毒(CCCVd)、李坏死环斑病毒(PNRSV)、南方菜豆花叶病毒(SBMV)、烟草环斑病毒(TRSV)，造成巨大直接经济损失和行业信誉下降。由于缺少可行的快速检测方法，对植物病毒病害控制束手无策；另外在引进国外种子苗木时，只能引进来自非疫区的，从而影响了优质种苗的进口；同时，由于海关检疫，国家口岸检疫缺少必要的技术保障，长期以来，我国在一类、二类外检病毒对象的关键技术上依赖于国外技术标准和检测材料，限制了我国农产品的出口，制约了我国农业的发展。目前，对于植物病毒控制还未能找到“特效药”。因植物本身没有免疫系统，在植物病毒控制方面基本上不能采用动物病毒相同的诱导免疫和预防接种保护的方法，对于植物病毒的有效控制只能够依赖于防范于未然的检验检疫方法。因此，建立有效地控制植物病毒的手段是当代农业生产的关键措施，其不仅是我国重要的经济作物例如马铃薯和其它农作物高产优质的重要环节，也是维护国家生物安全和可持续农业生产的必要保障。迄今为止，病毒的检测技术已经历了传统生物学、免疫化学和核酸分子生物学检测三个阶段。目前用于植物病毒检测的方法主要有生物学方法、血清学方法和分子生物学方法等几类。1)生物学方法 包括目测法和指示植物鉴别法等。该方法是一种传统的病毒检测方法，该方法工作量大，持续时间长，灵敏度和准确度都较差，难以检测大量样本。2)血清学方法 包括酶联免疫吸附法(ELISA)等多种方法。该方法是目前应用最广的植物病毒检测方法，它能同时处理大量的样品，有很高的灵敏度和特异性。但是，抗体制备难度大，操作要求极高；尤其是不能同时检测单个样品中的多种病毒。3)分子生物学方法 包括PCR(RT-PCR)法和核酸杂交检测法等，具有极高的灵敏度。然而，PCR扩增容易出现非特异性扩增条带和假阳性，特异性偏低，可靠性较差。核酸杂交检测特异性强，但膜杂交一次处理样品数量较少，手工杂交需要较长的样品处理时间。目前该方法只在研究条件下应用，难以在生产阶段推广。可见，各种现有植物病毒检测方法都存在缺陷，很难做到既简便快速，又灵敏准确，并且成本低廉地测定大量样本，更不可能做到对同一种样本中的多种病毒同时进行检测，无法满足实际需要，生产上实质上不能对许多危害性严重的植物病毒进行检测。国际病毒分类与命名委员会(ICTV)迄今确定了900多种植物病毒，一种植物往往遭受数种和数十种病毒的侵染，面对数量如此庞大的植物病毒，人们不得不探索一些高通量的检测方法。基因芯片具有高通量的特性，正好符合这一需要。基因芯片技术被誉为是具有划时代意义的“革命性技术”。作为一种检测手段，其具有灵敏度高、特异性强和高通量等特性。基因芯片用于检测已有不少理论和应用成果，但主要集中在人类疾病诊断等方面，将基因芯片用于植物病毒检测还未见报道。本专利技术专利技术人认为在解决大量样品检测能力的基础上保持分子检测方法的高灵敏度和高特异性特征将是植物病毒检测领域的重大突破。经过辛苦的科学研究，最终本专利技术专利技术人开创性地将基因芯片用于植物病毒的检测，根据植物病毒的特性作出不同现有技术的独特设计，在世界范围内率先将基因芯片的高通量处理能力和技术特点应用到植物病毒检测，并完成了可以快速、高效、高通量地用于检测植物病毒的基因芯片，有效地解决了常规检测方法不能有效解决的类病毒检测问题，成功地弥补了现有检测方法的缺陷。
技术实现思路
要解决的问题本专利技术的目的之一是将基因芯片用于植物病毒检测领域，提供一种能够同时检测多种RNA植物病毒和类病毒的高通量检测基因芯片。本专利技术的另一个目的是提供用于本专利技术的植物病毒检测基因芯片的特异性探针。本专利技术的再一个目的是提供用于本专利技术的检测方法的PCR扩增引物。本专利技术的还一个目的是提供利用本专利技术基因芯片检测待测样品中植物病毒的方法。技术方案本专利技术提供了一种基因芯片的用途，其特征在于将基因芯片用于同时检测至少2种植物病毒，优选地检测2～122种植物病毒，最优选地检测7-26种病毒。本专利技术的基因芯片优选地可以用于以下122种病毒的检测苜蓿花叶病毒(Alfalfa mosaic virus，AlMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaic virus，CMV)、马铃薯Y病毒(Potato Y virus，PVY)、马铃薯A病毒(potato A virus，PVA)、马铃薯X病毒(Potato X virus，PVX)、马铃薯帚顶病毒(Potato mop-top virus，PMTV)、马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus，PLRV)、马铃薯V病毒(Potato V virus，PVV)、马铃薯M病毒(Potato M virus，PVM)、马铃薯纺锥块茎类病毒(Potatospindle tuber viroid，PSTVd)、香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus，BBTV)、百合无症病毒(Lily symptomless virus，LSV)、南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus，SqMV)、柑橘裂皮类病毒(Citrus exocortisviroid，CEVd)、苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus，ASGV)、桃潜隐花叶类病毒(Peach latent mosaic viroid，PLMVd)、马铃薯S病毒(Potato A virus，PVS)、百合斑驳病毒(Lily mottle virus，LiMoV)、芋花叶病毒(Dasheen masaic virus，DsMV)、小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus，ZYMV)、西瓜花叶病毒(Watermelonmosaic virus，WMV)、香石竹环斑病毒(Camation ring spot virus，CRSV)、椰子死本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈集双，杜志游，郎秋蕾，王冲，陈洁云，刘文洪，谷庆琪，
申请(专利权)人：北京金长河科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：