判别探针固定基体变化的方法、探针固定基体和检测装置制造方法及图纸

本发明专利技术通过搭载对引起固相探针阵列等中的探针劣化的因子的有无或引起保护体变化的因子的有无进行判别的元件，读出该元件的变化，可以判断探针劣化的程度或保护体变化的程度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及到对固定了可与靶物质特异结合的探针的基体中的探针的劣化的程度、包括对探针等进行保护的保护体的变化在内的探针固定基体变化的程度进行判别的方法，含有对探针劣化、包括对探针等进行保护的保护体的变化在内的探针固定基体的变化进行判定有用的元件的探针固定基体、以及用于对探针劣化、包括对探针等进行保护的保护体的变化在内的探针固定基体的变化进行判定的系统等。
技术介绍
作为探针固定基体的一个例子，可举DNA芯片。所谓DNA芯片是在固相表面使作为探针对基因的表达、变异、多型等进行同时解析非常有用的许多DNA片段或寡核苷酸整齐排列的高密度阵列。例如报道的用光刻蚀法制作的固相寡核苷酸阵列(参照例如美国专利第5688642号说明书)，以及使用喷墨法的固相DNA探针阵列的制作方法(参照例如国际公开第95/25116号公报)。而靶物质的检测处理工序一般都是为了使用荧光物质等标记的靶物质与固相探针阵列的探针结合，进行杂交。杂交是通过使固相探针阵列与溶解了通常靶物质的溶液接触或浸渍，通过加热处理进行的反应，该浓度和温度等由于探针与靶物质的组合不同而不同。再使用荧光检测仪等装置观察探针与靶物质是否结合。
技术实现思路
一般来说，DNA等具有被紫外线或热等分解的性质，如果在长时间的来自日光等紫外线照射或高温下保管，探针劣化，最终失去与靶核酸杂交的功能。而且由于被固定在制作的探针阵列的探针量极微量，对探针量或活性进行非破坏性测定有时是困难的。因此，本专利技术提供能够容易判断由于紫外线或高温等各种各样环境造成的探针功能消失的方法。另外，在基体上有时还设置了以保护这些探针等为目的的保护体。然而，该保护体也有可能在上述的要因下发生变化，所以也提供容易判断该变化的方法。即，本专利技术作为在基体上固定了可与靶物质特异结合的探针的固定基体，其特征是还设置了对成为上述探针固定基体变化要因的环境变化进行检测的元件。另外，还涉及到由探针固定基体具有的元件对探针固定基体有无变化或变化程度进行判别的方法。另外还涉及到一种系统，其特征在于具有以下装置由探针固定基体具有的元件取得环境变化的量的取得装置，和根据通过该取得手段取得的环境变化判断探针固定基体有无变化的判断装置。根据本专利技术，通过再设置对使基体上固定了探针的探针固定基体发生变化的环境变化进行检测的元件，可以通过简便的方法对探针固定基体的变化、即对探针的劣化、保护探针或/和基体的保护体等有无变化或其变化程度或变化的可能性进行判别，使得在制造时、流通时、保管时的品质管理或探针功能的确认变得容易。附图的简单说明附图说明图1是表示UV照射时间和UV标记的G色辉度的图。图2是表示UV标记的G色辉度和荧光强度的关系的图。图3是表示温度和加热累计标记的R色辉度的关系的图。具体实施例方式在本专利技术中包括对关于固定了可与靶物质特异结合的探针的探针固定基体的性能有无什么变化和其变化程度进行判别的方法以及能够实施这样判断的方法的探针固定基体、以及利用这些方法对探针固定基体的变化状况进行计算的系统。所谓探针固定基体的变化包括例如探针的劣化或对探针等进行保护的保护体的变化等。用于固定探针的基体只要是对固定探针、使用得到的探针固定基体检测或分离靶物质的操作没有妨碍的，并没有特别限定，例如玻璃、树脂、金属、中空纤维等，如果举一个DNA芯片的例子的话，考虑到靶物质的检测和通用性，优选玻璃基板或塑料基板，特别优选不含有碱性成分等的无碱玻璃基板或石英基板。至于将探针固定在基体上的方法已知有各种各样的方法。详细讲，有通过在基体上合成探针将探针固定在基体上的方法，以及通过点或印等将预先准备的探针负载到基体上的固定方法。作为在基体上进行探针合成的固定方法，已知例如美国专利第51438545号公报记载的那样，通过活化剂将保护基从在基体上选择的区域除去，通过反复操作使具有可除去保护基的单体与上述区域结合，在基体上合成具有各种序列的聚合物的方法。而作为通过将预先准备的探针负载到基体上进行固定的方法，已知有例如特开平8-23975号公报记载的那样，通过使基体和由具有可搭载到该基体上的碳化二亚胺基的高分子化合物构成的固定用的材料与具有与碳化二亚胺基反应性的生物学上的活性物质接触进行固定的方法。另外就象特开平8-334509号公报记载的那样，已知在具有生物学活性的物质的检测中，使用在具有碳化二亚胺化合物上借助于碳化二亚胺基进行固定化的探针进行检测的方法。另外，在特开2001-178442号公报中报道了在液相中通过使在末端含有巯基的DNA片段、含有与巯基反应可形成共价键的反应性置换基的链状分子其一端被固定在表面的固相载体接触，在DNA片段和链状分子之间形成共价键使得DNA片段固定在固相载体表面的固定方法，作为含有与巯基反应可形成共价键的反应性置换基，具体来说如含有从马来酰亚胺基、α，β-不饱和羰基、α-卤代羰基、卤化烷基、氮丙啶基以及二硫化物基选择出来的基团的置换基。探针的固定方法已知仅上述那样的DNA片断的固定方法就有很多，在本专利技术中对探针的种类和其固定方法并没有特别限定。探针固定基体的探针虽然因其种类不同而有差异，但一般来说受到温度或紫外线、氧等影响，作为探针的功能就可能丧失。以下将该现象称为劣化。对该劣化的程度进行判别或计测的简便方法到目前为止还没有。因此，本专利技术通过将检测这些劣化的要因的元件搭载到基体上，在使用这些探针固定基体前对成为该劣化要因的因子会达到什么样的程度进行判断，测定探针劣化的程度。作为探针劣化的因子如受到紫外线的照射或结露、温度变化、氧化以及pH变化等，但并不限定于这些。所谓检测劣化要因的元件，例如当要因为紫外线时，就象特开2001-281052号公报中公开的那样，将伴随着加热引起色变化而可复原到氧化型的2聚合醌化合物作为通过紫外线的照射脱色为还原基的紫外线检测材料配合在聚烯烃系树脂的材料、以及就象特公平3-19536公开的那样，作为以低聚合度的聚氯乙烯和有色染料或无色染料作为必需成分的溶液状组成物，由于紫外线照射可引起上述有色染料或无色染料明显的色彩变化及色浓度变化为特征的紫外线检测材料、市售的紫外线检测材料(如商品名“紫外线标记”、日油技研工业株式会社生产)等。另外由于探针的种类不同，紫外线影响的程度也不同，所以要对元件形成材料的灵敏度进行调整，最好选择对使用的探针最适合的材料，本专利技术对这些材料灵敏度或紫外线检测材料的种类并没有限定。对于温度变化的情况，优选受到温度的影响色彩或色浓度变化的温度表示材料。作为具体使用的材料如通过非结晶-结晶或相分离-非相分离的リタイラブリ系的电子供给性呈色性化合物(例如，无色金胺类、二芳基苯并呋喃酮类聚芳基原醇类、酰基金胺类、罗丹明B内酰胺类、二氢吲哚类、螺吡喃类、荧烷类、花青苷色素类、结晶紫等电子供给性有机物等)、电子受体性化合物(例如酚类、酚金属盐类、羧酸金属盐类、磺酸、磺酸盐、磷酸盐、磷酸金属盐类、酸性磷酸酯、酸性磷酸酯金属盐类、亚磷酸盐、亚磷酸类、亚磷酸金属盐类等氧化物等)那样的化合物。另外更具体的就象特开平11-140339号公报公开的那样，在支持体上设置含有无色或淡色的碱性染料和呈色剂以及含有热可融性物质的层的不可逆型示温材料中，以作为碱性染料用3-(1-n-辛基-2-甲基吲哚本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种探针固定基体，是在基体上固定了可与靶物质特异结合的探针的固定基体，其特征是还设置了对成为上述探针固定基体变化要因的环境变化进行检测的元件。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：石桥亨，
申请(专利权)人：佳能株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]