肠出血性大肠杆菌的志贺菌毒素家族基因的检测试剂制造技术

本发明专利技术提供了优选用于肠出血性大肠杆菌（ＥＨＥＣ）的２型志贺菌毒素家族基因（ｓｔｘ）的快速和特异性基因检测试剂的寡核苷酸的组合。更具体地，本发明专利技术提供了用于检测ＥＨＥＣ的ｓｔｘ２　　ＲＮＡ的方法，所述方法通过使用具有与ＥＨＥＣ的ｓｔｘ２基因特异的碱基序列同源或互补的并且位于基因型之间无变化的位点之间的序列引物以及结合ｓｔｘ２　　ＲＮＡ的特定位点的寡核苷酸而仅特异扩增ｓｔｘ２　　ＲＮＡ。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
用于检测样品中存在的肠出血性大肠杆菌的２型志贺菌毒素家族基因（ｓｔｘ２）的检测试剂，该试剂用于使用ＲＮＡ扩增过程的检测方法，所述检测方法包括步骤：使用来自ｓｔｘ２的ＲＮＡ的特定序列作为模板，以及具有与所述特定序列同源的序列的第一引物，和具有与所述特定序列互补的序列的第二引物，用ＲＮＡ依赖的ＤＮＡ聚合酶产物ｃＤＮＡ，从而形成双链ＲＮＡ－ＤＮＡ，其中第一引物或者第二引物具有这样的序列，其中ＲＮＡ聚合酶的启动子序列已经被添加到该引物的５’末端；通过核糖核酸酶Ｈ降解所述双链ＲＮＡ－ＤＮＡ的ＲＮＡ部分，从而产生单链ＤＮＡ；和使用所述单链ＤＮＡ作为模板用ＤＮＡ依赖的ＤＮＡ聚合酶产生具有所述启动子的双链ＤＮＡ，其中所述启动子能够转录为由所述ＲＮＡ特定序列组成的ＲＮＡ，或转录为与所述ＲＮＡ特定序列互补的序列；其中，双链ＤＮＡ在ＲＮＡ聚合酶存在下产生ＲＮＡ转录产物，所述ＲＮＡ转录产物作为随后用ＲＮＡ依赖的ＤＮＡ聚合酶进行ｃＤＮＡ合成的模板；该试剂包含第一引物和第二引物，其中第一引物为由ＳＥＱ．ＩＤＮｏ．１所示序列的至少１０个相邻碱基组成的寡核苷酸，或者为这样的寡核苷酸，其中由ＳＥＱ．ＩＤＮｏ．１所示序列的至少１０个相邻碱基组成的寡核苷酸中的一个或多个核苷酸被缺失、替换或者添加并且能够特异结合与该特定序列互补的序列；第二引物为由ＳＥＱ．ＩＤＮｏ．２所示序列的至少１０个相邻碱基组成的寡核苷酸，或者为这样的寡核苷酸，其中由ＳＥＱ．ＩＤＮｏ．２所示序列的至少１０个相邻碱基组成的寡核苷酸中的一个或多个核苷酸被缺失、替换或者添加并且能够特异结合所述特定序列。...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：益田昇佳，保川清，堀江隆一，
申请(专利权)人：东曹株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]