一种肠出血性大肠杆菌快速检测方法技术

本发明专利技术公开了一种肠出血性大肠杆菌快速检测方法，该方法包括以下步骤：免疫抗原的制备，免疫小鼠，抗体的纯化，胶体金试纸条的制备。本发明专利技术提供了一种简单快捷的肠出血性大肠杆菌检测方法，旨在制备出高灵敏度肠出血性大肠杆菌胶体金试纸条，直接检测样品中的肠出血性大肠杆菌，解决了长期存在的肠出血性大肠杆菌检测周期长，检测操作复杂的难题；此外，本发明专利技术采用的免疫胶体金层析分析法，纳米胶体金技术结合免疫原理，检测方法操作简单、方便快捷、准确灵敏，适合现场的快速检测，利于检测部门的监控。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物检测领域，尤其涉及一种肠出血性大肠杆菌快速检测方法。
技术介绍
大肠杆菌是一种革兰氏阴性短杆菌，长约2*10-3cm，宽约0.5*10-3cm，体积约为0.6-0.7*10-6cm周身鞭毛大约每个菌细胞有4一6根鞭毛能运动无芽孢。大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、钱盐、葡萄糖的普通培养基上生长大肠杆菌的卫生标准大肠杆菌大量存在于人及其他恒温动物体内的肠道内，常随人及动物粪便一块排出，广泛传播于自然环境中，对水源造成污染。若在水和食品中检出，可认为是被粪便污染的指标。大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久，这些特性使他们可以作为一个理想的生物测试环境样品的粪便污染指示物，因此，大肠杆菌的检测已成为环境微生物学中重要的检测项目之一。目前，世界各国及国际组织都将大肠菌群数作为重要环境卫生学指标，并对其提出了严格的限制。世界卫生组织《饮用水本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肠出血性大肠杆菌快速检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：免疫抗原的制备；免疫小鼠；抗体的纯化；胶体金试纸条的制备。

【技术特征摘要】
1.一种肠出血性大肠杆菌快速检测方法，其特征在于，该方法包括以下步
骤：
免疫抗原的制备；免疫小鼠；抗体的纯化；胶体金试纸条的制备。
2.如权利要求1所述的肠出血性大肠杆菌快速检测方法，其特征在于，免
疫抗原的制备是将二代肠出血性大肠杆菌菌株制备成菌悬液。
3.如权利要求1所述的肠出血性大肠杆菌快速检测方法，其特征在于，免
疫小鼠的方法为：选用6-8周的BalB/c小鼠，初次免疫菌悬液与弗氏完全佐剂
混合，乳化完全，皮下多点注射，1ml/每只，每隔两周，用相同剂量的菌悬液
与弗氏不完全佐剂进行加强免疫，共加强免疫两次，最后一次免疫后8-10天小
鼠尾部取血，通过间接ELISA测抗体血清效价，则进行小鼠眼部取血。
4.如权利要求1所述的肠出血性大肠杆菌快速检测方法，其特征在于，抗
体纯化的方法为：将血清置于Protein G亲和层析柱(KPL)柱吸附琼脂的表面，
用10倍柱体积1×Washing/Binding Buffer洗吸附柱，用4倍柱体积的1×Elution 
Buffer洗脱，得到肠出血性大肠杆菌特异性抗体。
5.如权利要求4所述的肠出血性大肠杆菌快速检测方法，其特征在于，
1×Washing/Binding Buffer为0.1M磷酸钠缓冲液，0.15MNaCl，pH7.4洗吸附柱；
1×Elution Buffer为0.2M甘氨酸，pH2.5。
6.如权利要求1所述的肠出血性大肠杆菌快速检测方法，其特征在于，胶
体金试纸条制备的具体步骤为：
步骤一，胶体金的制备：利用冷凝回流装置将50mL质量分数为0.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴胜，涂维国，庞东，
申请(专利权)人：北京东方冷翠国际技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11