本发明专利技术公开了一类在人类肝脏中表达的相关基因序列，它包括：ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４７所示的序列；ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４７所示的序列中每条序列的互补序列；与ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４７所示的序列中每条序列有至少７０％同源性的序列；上述三种序列中一条或数条的组合。利用本发明专利技术的人类肝脏相关基因，可为研究肝脏疾病的致病机理以及开发治疗肝脏疾病的药物发挥重要作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一类在人类肝脏中表达的相关基因。
技术介绍
肝脏是人体的第一大器官，是物质代谢、能量转换及供应的“枢纽”，是机体内多种重要信息调控分子的“集散地”，是机体内再生能力最强的器官，在人类生命活动中占有重要地位。肝脏的主要功能是进行糖的分解、贮存糖原；参与蛋白质、脂肪、维生素、激素的代谢；解毒；分泌胆汁；吞噬、防御机能；制造凝血因子；调节血容量及水电解质平衡；产生热量等。在胚胎时期肝脏还有造血功能。肝脏是淋巴细胞以外最常见的病原体持续感染的场所，肝脏疾病又分为肝炎、肝硬化、脂肪肝、肝癌等。现代医学实验证明，肝病病毒侵入人体后，并不直接引起肝细胞的损害，只是在肝细胞内吸收营养赖以生存，并在肝细胞内复制、繁殖。其复制病毒的“零部件”如表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)释放在肝细胞膜上，引起人体免疫系统对这些抗原物质产生免疫反应，这种反应造成肝细胞的损伤、坏死。免疫反应的强弱决定于肝脏受损程度及临床症状轻重。这场由病毒引发的、免疫系统对肝细胞的战争，使大约25％的患者的肝脏成为战火连绵的战场，肝脏的损伤由此加重。肝病的危害绝不仅仅限于肝脏本身，它还可以引起其它多种疾病。常见的有(1)糖尿病；(2)胰腺炎；(3)胆道感染；(4)功能性肾衰竭；(5)胆汗性肾病；(6)肾小球肾炎；(7)肾小管酸中毒；(8)溶血性贫血；(9)再生障碍性贫血；(10)心肌炎和心包炎；(11)结节性动脉炎；(12)消化性溃疡；(13)自发性腹膜炎；(14)性激素代谢紊乱；(15)甲状腺功能改变；(16)肝性骨病，等等。肝病不仅对患者的身体甚至生命造成危害，而且对患者心理上的打击也是十分沉重的。无论是肝病患者还是病毒携带者，在生活、社交、求职、升学等方面都会受到严重影响。肝脏疾病相关基因在以肝炎、肝癌为代表的重大肝病的控制、诊断、防治与新药研制领域起着重要的作用。在本专利技术之前，还没有出现涉及本专利技术的一类人类肝脏相关基因的公开报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一类在人类肝脏中表达的相关基因。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现在本专利技术的一个方面，提供了一类在人类肝脏中表达的相关基因，其包括(a)SEQ ID No.1～SEQ ID No.47所示的序列；(b)SEQ ID No.1～SEQ ID No.47所示的序列中每条序列的互补序列；(c)与SEQ ID No.1～SEQ ID No.47所示的序列中每条序列有至少70％同源性的序列；(d)上述(a)～(c)中一条或数条的组合。较佳地，所述序列包括具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.47所示的序列。本专利技术还提供了一种探针分子，所述的探针分子含有上述序列中约8-100个连续的核苷酸。由本专利技术的一类在人类肝脏中表达的相关基因，可为研究肝脏疾病的致病机理以及开发治疗肝脏疾病的药物发挥重要作用。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不是限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New YorkCold Spring HarborLaboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1人肝脏组织的mRNA的分离组织分离(Tissue isolation)肝脏来源于5个成年男性，在肝脏切除手术后，将肝脏组织立即置于液氮中冷冻保存。mRNA的分离(mRNA isolation)取出肝脏组织，用研钵研碎，加入盛有裂解液的50ml管，充分振荡后，再移入玻璃匀浆器内，匀浆后移至50ml新管，抽提总RNA(TRIzol Reagents，Gibco，NY，USA)。用甲醛变性胶电泳鉴定总RNA质量。用带Oligod(T)的纤维素柱分离总RNA中的mRNA，定量。实施例2cDNA文库的构建(Constuction of cDNA library)以mRNA为模板，合成双链cDNA。补平末端后，加含EcoRI切点的接头。磷酸化EcoRI末端后，用XhoI限制性内切酶消化1.5小时，再进行片断分离。过柱筛选长度＞500bp的片段，用酚-氯仿抽提，乙醇沉淀，无菌水溶解，连接至Uni-ZAP XR载体(Strategene，CA9203，USA)，以ZAP-cDNA Gigapack III Gold Cloning Kit(Strategene，CA9203，USA)进行包装，宿主菌使用XL 1 Blue MRF’(Strategene，CA9203，USA)细菌。涂板并测定滴度。实施例3测序及数据库建立(Seqencing and Database Constructing)挑选文库中有外源片段插入的克隆，扩增后抽提质粒(Qiagen Germany)，用T3和T7作为3’和5’端的通用引物，采用终止物荧光标记(Big-Dye，Perkin-Elmer，USA)的方法，在ABI 377测序仪(Perkin-Elmer，USA)上进行EST大规模测序。测序结果用FACTURA软件去除载体序列，传输到SUN Ultra 450 Server上进行下一步的处理。所有的序列信息再用GCG软件包(Wisconsin group，USA)中的BLAST和FASTA软件搜索已有的数据库(Genebank+EMBL)，将无同源性或同源性低于95％的序列视为新基因建立数据库。实施例4基因的全长克隆(Cloning of Full-length cDNA)在得到的新基因片段序列信息基础上，进行cDNA全长克隆，分两阶段进行(1)“电子克隆”(Electronic Cloning)以新基因片段序列作为探针搜寻dbEST数据库，将重叠序列＞50bp，同源性在98％以上的表达序列标签(Expressed Sequence Tag，简称“EST”)序列认为同一序列(Consensus Sequence)，取出并用AUTOASSEMBLER软件进行连接，部分EST可以延伸探针序列。再用STRIDER软件分析被延伸的序列是否具有完整的开放阅读框架(OpenReading Frame，ORF)，用BLAST搜寻Genbank或SwissProt以确定该序列的核苷酸和氨基酸水平上是否与其他物种有同源性，以帮助判别所得到的基因全长完整性如何。通过电子克隆的方法，通常可获取人肝脏相关基因的全长序列。(2)cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends，RACE)如果通过“电子克隆”方法仍未得到完整的cDNA全长，则在已有序列5’或3’端设计引物，在人类肝脏Marathon-Ready cDNA文库(Clontech Lab，Inc，USA)中进行长距离PCR反应。然后对PCR产物克隆、测序。用AUTOASSEMBLER及STRIDER软件分析被延长的序列有无完整的ORF，如无，重复上述过程直至获得全长。(3)RT-PCR对于5’和3’端的已知的序列，如果中间有一段间隙(gap)无法从已有的公共数据库或自身数据库获得，可考虑采用RT-PCR的方法。在序列5’端设计引物本文档来自技高网...
【技术保护点】
一类在人类肝脏中表达的相关基因，其特征在于，它包括：（ａ）ＳＥＱＩＤＮｏ．１～ＳＥＱＩＤＮｏ．４７所示的序列；（ｂ）ＳＥＱＩＤＮｏ．１～ＳＥＱＩＤＮｏ．４７所示的序列中每条序列的互补序列； （ｃ）与ＳＥＱＩＤＮｏ．１～ＳＥＱＩＤＮｏ．４７所示的序列中每条序列有至少７０％同源性的序列；（ｄ）上述（ａ）～（ｃ）中一条或数条的组合。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄健，韩泽广，
申请(专利权)人：上海人类基因组研究中心，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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