本发明专利技术提供了诊断人类肝脏疾病例如非酒精性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、鉴定受试人处于不良药物反应风险和确定对受试人合适的治疗性药物剂量的方法。标记是来自人受试人血浆样品或尿液样品中的对乙酰氨基酚（ＡＰＡＰ）－葡糖苷酸的增加的水平。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】葡糖苷酸化的对乙酰氨基酚作为肝脏疾病的标志相关申请本申请要求2008年10月1日提交的美国临时专利申请序列号61/194，835的优先权， 其通过引用整体并入本文。政府权益声明本专利技术是政府支持进行的，其获美国国立卫生研究院R01DK068039的资助。政府在专利技术中享有一定的权利。
技术介绍
对乙酰氨基酚(APAP)是最常用的非阿片类镇痛药，与大多数其他类似产品相比是标准的退热及镇痛剂。APAP代谢(绝大部分发生在肝脏中)是良好确定的(图1)。至少给予剂量的1/2与葡糖醛酸(GLUC)结合，1/3与硫酸盐(SULF)结合，主要经由CYP2E1的CYP-450 依赖混合功能氧化酶途径代谢大约5-9%。这引起毒性反应性中间代谢物(NAPQI)的形成， 其进一步与谷胱甘肽结合，形成无毒的半胱氨酸和巯基尿酸结合物。对乙酰氨基酚的推荐剂量的不足5%未改变地由肾脏排出。对乙酰氨基酚经历从体内一级清除(first-order elimination)，且具有短的血浆半衰期(2. 0-2. 4小时)。APAP提供了在药物代谢物从肝脏排出中外排转运体发挥完整功能的很好的实例。 为了从肝脏排出，所有APAP代谢物都需要外排转运(efflux transport)，并且各个都可以在胆汁和尿中检测。体内处置研究与体外功能转运研究显示，ABC转运体ABCC2、ABCC3、 ABCC4和ABCG2各个具有转运多种非偶联或偶联的药物包括APAP代谢物的能力。ABCC2和 ABCG2定位于肝细胞小管(顶)膜，从其中它们将它们的转运底物排出至胆小管中。因此， 在健康肝脏中，APAP的硫酸盐、葡糖醛酸和谷胱甘肽结合物的胆汁排出主要是由ABCC2介导，然而，ABCG2看起来也参与了 APAP-SULF结合物的排出。ABCC3和ABCC4表达在肝细胞和胆管细胞的窦状小管(基底外侧)膜上，从其中ABCC3和ABCC4将它们的底物排出到血液中。APAP-GLUC代谢物由肝细胞通过窦状小管排出主要由ABCC3介导，但ABCC4看起来介导 APAP-SULF代谢物的排出。最近的研究显示ABCC3和ABCC4在APAP-SULF的排出中具有等同的作用。最近研究(Drug. Metabolism and Disposition, 35:1970-1978 (2007))已显示在由甲硫氨酸胆碱缺乏饮食(MCD)饲养大鼠8周引起的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠模型中，肝外排转运体ABCC3和ABCC4的蛋白表达升高。对这些MCD大鼠的大剂量APAP给予(1 mmol/kg )(相当于150磅的人IOg剂量，250磅的人17g剂量)相对于对照产生APAP-GLUC 由胆汁排出向血浆排出的转换。然而，考虑到人没有甲硫氨酸胆碱缺乏，以及给予大鼠模型的大剂量APAP，已推测MCD大鼠对于人NASH或人肝脏药物代谢研究不是一个好的模型。通常接受的是没有动物模型可以精确地概括人NASH。众多的生化差异使得任何直接对比都潜在地充满假象。例如，MCD模型缺乏胰岛素抵抗，其是NASH中常见的组成(Rinella ME和 Green RM, J Hepatol. 2004 Jan ； 40 (1) 47-51.)。而且，脂肪变性在人中发生在典型的西方高脂肪饮食中，导致通过肝脏的脂肪净通量增加，而MCD模型是通过脂代谢的生化损伤引起脂肪变性和脂肪性肝炎。因此，直接将MCD模型和人进行对比是不合适的。这尤其考虑到MCD饮食，因为这种非自然饮食对其变量的影响相对于肝脏损伤对其变量的影响是不能描绘的。
技术实现思路
第一方面，本专利技术提供了一种诊断人类肝脏疾病的方法，其包括(a)对受试人施用对乙酰氨基酚(APAP)后，测定获自受试人的血浆样品和/或尿液样品中对乙酰氨基酚(APAP)-葡糖苷酸的量，其中受试人处于肝脏疾病的风险。(b)将血浆样品和尿液样品之一或二者中的APAP-葡糖苷酸的量与对照比较；和 (c)如果血浆样品或尿液样品之一或二者中的APAP-葡糖苷酸的量相对于对照升高，则鉴定受试人患有肝脏疾病。第二方面，本专利技术提供了鉴定受试人处于药物不良反应的风险的方法，其包括(a)对受试人施用对乙酰氨基酚(APAP)后，测定获自受试人的血浆样品和/或尿液样品中对乙酰氨基酚(APAP)的量，其中受试人需要治疗性药物的治疗；(b)将血浆样品和尿液样品之一或二者中的APAP-葡糖苷酸的量与对照比较；和(c)如果血浆样品或尿液样品之一或二者中的APAP-葡糖苷酸的量相对于对照升高，则鉴定受试人处于药物不良反应的风险。第三方面，本专利技术提供了确定受试人治疗性药物的合适剂量的方法，其包括(a)对受试人施用对乙酰氨基酚(APAP)后，测定获自受试人的血浆样品和/或尿液样品中对乙酰氨基酚(APAP)的量，其中受试人需要治疗性药物的治疗；(b)将血浆样品和尿液样品之一或二者中的APAP-葡糖苷酸的量与对照比较；和(c)如果血浆样品或尿液样品之一或二者中的APAP-葡糖苷酸的量相对于对照升高，则确定受试人应该接受非标准剂量的药物。第四方面，本专利技术提供了机器可读存储介质，其包含一组指令，用于使代谢物测量装置执行第一、第二、第三实施方式的方法的任何实施方式的测量、比较和鉴定步骤。在本文中提供了本专利技术这些方面各个的实施方式。附图说明图1是显示了对乙酰氨基酚代谢的流程图。图2提供了显示患有NAFLD的人中肝脏ABCC3和ABCC4表达的放射自显影图。图3A - B (A)显示ABCC2蛋白定位在健康正常患者肝中的小管膜非常褶皱的边缘(A)，但在NASH肝中，ABCC2明显地嵌入(blurred into)远离小管的膜泡中(B)。图4显示了 4h血浆中APAP及其主要代谢物的浓度。图5是显示了正常健康志愿者、脂肪变性患者和脂肪性肝炎患者尿液中APAP及代谢物的浓度的图。图6 A-C是对于NASH (A)、肝部炎症(B)、肝纤维变性(C)的血浆APAP_Gluc分析的图。具体实施方式所有引用的参考都通过引用的方式整体并入于本文。在此申请中，除非另有说明，利用的技术可以在几本熟知的参考书的任何中找到，例如-Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Sambrook 等人，1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press), Gene Expression Technology (Methods in Enzymology, Vol. 185, edited by D. Goeddel, 1991. Academic Press, San Diego, CA) ,“Guide to Protein Purification，， in Methods in Enzymology (M. P. Deutshcer, ed. , (1990) Academic Press, Inc.) ,PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis^A 1990. Academic Press, San Diego, CA), Culture of Animal Cells: A Manual of本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种诊断人类肝脏疾病的方法，其包括：（ａ） 对受试人施用对乙酰氨基酚（ＡＰＡＰ）后，测定获自所述受试人的血浆样品和／或尿液样品中对乙酰氨基酚（ＡＰＡＰ）－葡糖苷酸的量，其中所述受试人处于肝脏疾病的风险；（ｂ） 将所述血浆样品和所述尿液样品之一或二者中的ＡＰＡＰ－葡糖苷酸的量与对照比较；和（ｃ） 如果所述血浆样品或所述尿液样品之一或二者中的ＡＰＡＰ－葡糖苷酸的量相对于对照升高，则鉴定受试人患有肝脏疾病。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：N彻林顿，
申请(专利权)人：亚利桑那大学评议会，
类型：发明
国别省市：US
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