雪莲多倍体的诱导方法技术

本发明专利技术涉及一种雪莲多倍体的诱导方法，该方法是针对雪莲特殊的生理特性，通过雪莲种子萌发产生无菌苗，然后将切除根叶后保留下来的无菌苗茎干部分接种于添加有二甲基亚砜和秋水仙素的出芽诱导培养基上进行诱导后，再转移到不含二甲基亚砜和秋水仙素的出芽诱导培养基上进行诱导出芽，经过秋水仙素处理的无菌苗抽出新芽，植株外观与对照苗差异显著，然后对无菌苗的茎尖生长点做染色体检测以确定染色体的倍性，从而得到了雪莲多倍体植株。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种雪莲多倍体的诱导方法，其特征在于该方法按下列步骤进行：ａ、将雪莲种子先用７５％乙醇表面消毒２０ｓｅｃ－５０ｓｅｃ，然后用０．１％ＨｇＣｌ↓［２］溶液消毒７ｍｉｎ－１５ｍｉｎ，接着用１５％Ｈ↓［２］Ｏ↓［２］溶液消毒１５ｍｉｎ－５０ｍｉｎ，将消毒后的种子用灭菌水漂洗４－７次，再播种于ＭＳ培养基上，每瓶ＭＳ培养基播种１０－１５粒种子，７－１０天后雪莲种子萌发产生无菌苗；ｂ、选择生长３０ｄ－５０ｄ的无菌苗，将其根部、叶片完全切除，仅保留茎干部分；ｃ、将切割后保留下来的无菌苗茎干部分接种于添加有二甲基亚砜２％－５％，秋水仙素浓度为１００－５００ｍｇ.Ｌ↑［－１］的出芽诱导培养基上，诱导２ｄ～４ｄ，出芽诱导培养基配方为ＭＳ＋６－ＢＡ０．１－０．９ｍｇ.Ｌ↑［－１］＋ＴＤＺ０．３－１．１ｍｇ.Ｌ↑［－１］；ｄ、无菌苗茎干诱导２ｄ－４ｄ后，转移到不含秋水仙素与二甲基亚砜的出芽诱导培养基ＭＳ＋６－ＢＡ０．１－０．９ｍｇ.Ｌ↑［－１］＋ＴＤＺ０．３－１．１ｍｇ.Ｌ↑［－１］上诱导出芽，２０天后，经过秋水仙素处理后的无菌苗茎干部分抽出新生芽，植株外观与对照苗差异显著，然后对新生芽的茎尖生长点做染色体检测以确定染色体的倍性；ｅ、染色体的检测：切取新生芽茎尖生长点，先置蒸馏水中于０－４℃冰箱处理１２ｈｒ－２４ｈｒ，然后转移到０．００２ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］８－羟基喹啉溶液处理６ｈｒ－１２ｈｒ，接着用卡诺氏固定液为乙醇∶冰乙酸＝３∶１室温下固定１２－２４ｈｒ，用蒸馏水漂洗后，在５８℃１ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］ＨＣＬ溶液中解离处理１０ｍｉｎ－１５ｍｉｎ，再用４５％乙酸软化５ｍｉｎ－１５ｍｉｎ，之后再用蒸馏水洗净，将其置于改良苯酚品红溶液中染色１０ｍｉｎ－３０ｍｉｎ，压片，最后在显微镜下镜检观察即可。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张蜀敏，王晓军，郝秀英，徐琴，
申请(专利权)人：中国科学院新疆理化技术研究所，
类型：发明
国别省市：65[中国|新疆]