一种检测无细胞基质中保留的生物活性因子的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测无细胞基质中保留的生物活性因子的方法，通过细胞生物学的方法，以检测无细胞基质中保留的黏附因子、生长因子和趋化因子。将无细胞基质匀浆处理，吸取上清液包被培养板，进行种子细胞的黏附实验，以检测无细胞基质中保留的黏附因子；制备无细胞基质的条件培养基，观察种子细胞在此条件培养基中的生长速率，增殖、迁移活性和刮伤愈合的潜能，来检测无细胞基质中保留的生长因子和趋化因子。本发明专利技术着眼于无细胞基质中保留的生物活性因子的细胞生物学效应，检测技术简单，方便，成本较低，可进一步推广应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物材料的检测方法，具体地说是涉及。
技术介绍
目前，无细胞基质是研究和应用较多的生物材料，已经显示出巨大的临床应用前景，如小肠粘膜下层(SIS)，膀胱无细胞基质(BAM)。研究者用尿素，盐酸胍等将SIS和BAM中的总蛋白抽提出来，利用分子生物学技术，如免疫印记(WB)、免疫组化(IHC)对生长因子进行定性检测，酶联免疫吸附测定(ELISA)对生长因子进行定量检测，还将抽提物用于细胞增殖实验以观察其生物学活性。结果表明，SIS中存在有VEGF，bFGF以及TGF-β等生长因子；猪膀胱细胞外基质含有BMP4，PDGF-BB，KGF，TGFβ1，IGF，bFGF，EGF和TGFα等生长因子；细胞增殖实验也证实，SIS和BAM的抽提物能促进细胞的增殖(Hodde等，Endothelium.2001；8(1)11-24.Voytik-Harbin等，J Cell Biochem.1997；67(4)478-91.McDevitt等，J Biomed Mater Res A.2003；67(2)637-40.Chun等，Biomaterials.2007；28(2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测无细胞基质中保留的生物活性因子的方法，其特征在于所述的生物活性因子包括黏附因子、生长因子和趋化因子，该检测方法的步骤如下：　ａ）种子细胞的分离和培养；　ｂ）将无菌的无细胞基质浸入缓冲液中，匀浆，离心，吸取无细胞基质匀浆上清液，保存备用；　ｃ）用上述的无细胞基质匀浆上清液包被培养板，进行种子细胞的细胞黏附实验，以检测无细胞基质中保留的生物活性因子中的黏附因子；　ｄ）分别配制种子细胞的基础培养基和全培养基，将其各等分为两份，其中一份浸入无菌的无细胞基质，振荡孵育后得到条件基础培养基和条件全培养基，另一份不浸入无菌的无细胞基质，也同时进行振荡孵育，得到对照基础培养基和对照全培养基；　ｅ）用上...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨斌，孙则禹，戴玉田，
申请(专利权)人：南京大学医学院附属鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]