一种肺癌诊断的标志物及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医学检测技术领域，涉及一种肺癌诊断的标志物及其应用，本发明专利技术公开了一种肺癌诊断标志物，所述肺癌诊断标志物为UHRF1基因。该生物标志物具有很高的应用价值，检测方法简单，操作简单方便，为肺癌诊断试剂的研究提供了新的方向，为临床制药提供理论基础。

A marker for diagnosis of lung cancer and its application

The invention belongs to the field of biomedicine detection technology, and relates to a biomarker for lung cancer diagnosis and its application. The invention discloses a diagnostic marker for lung cancer, and the diagnostic marker for lung cancer is the UHRF1 gene. The biomarker has high application value, simple detection method and simple operation. It provides a new direction for the research of lung cancer diagnostic reagents, and provides a theoretical basis for clinical pharmacy.

【技术实现步骤摘要】
一种肺癌诊断的标志物及其应用
本专利技术属于生物医学检测
，涉及一种肺癌诊断的标志物及其应用，具体涉及一种肺癌诊断的标志物UHRF1基因及其应用。
技术介绍
流行病学指出肺癌是发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤之一，世界上因肿瘤致死的原因当中，肺癌位列第一位。非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer，NSCLC)约占已确诊的原发性肺癌总体的85％，小细胞肺癌(SCLC)约占肺癌的20％-25％。近年来，科研工作者越来越重视肿瘤分子生物学的研究，发现了很多肿瘤标志物可提示肿瘤的来源和组织学类型。肿瘤标志物检测在肺癌的筛查、诊断、疗效检测和预后判断等方面有着重要的临床价值。UHRF1基因编码的蛋白为RING指型E3泛素连接酶亚科的成员，该蛋白与特定的DNA序列结合，募集组蛋白脱乙酰酶以调控基因表达。UHRF1基因在细胞周期的G1期达到最高，并在细胞周期的G2期和M期继续表达。它在G1/S转换中和p53依赖性DNA损伤检查点中起作用，被认为是表观遗传信息整合的中枢蛋白质。UHRF1基因在多种癌症中上调，因此被认为是治疗靶标。CN10588660A公开了一种基因标志物，该基因标记物是UHRF1，UHRF1可用于判断受试者是否具有患子宫内膜癌的风险或者判断受试者是否患有子宫内膜癌。CN102305747A公开了一种用于检测乳腺癌状态的生物标记物试剂，所述生物标记物试剂为人UHRF1基因，该生物标记物试剂UHRF1基因与乳腺癌的远处转移能力密切相关，可以利用UHRF1基因作为预测乳腺癌远处转移能力的生物标志物。但上述专利都没有公开UHRF1基因与肺癌相关。目前市场上肺癌的基因检测产品涉及较多的是EGFR、KRAS、BRAF、ALK、MET等基因，基本上不包含UHRF1基因，也没有任何的现有技术公开UHRF1基因与肺癌相关。肺癌的发生发展与基因变异密切相关，因此，迫切需要寻找准确性高且特异性强的肺癌诊断标志物。
技术实现思路
本专利技术为了克服上述方法的缺陷，提供一种肺癌诊断的标志物及其应用，所述UHRF1基因是一种敏感性和特异性均很高的肺癌肿瘤标志物，能较好地对肿瘤做出诊断和鉴别，做到早发现、早治疗及延长患者的无进展生存期。为达到此专利技术的目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供一种肺癌诊断标志物，所述肺癌诊断标志物为UHRF1基因。本专利技术中，专利技术人采用免疫组织化学的方法分析378名中国肺癌患者获得的手术标本，意外发现，UHRF1基因在肿瘤细胞核中特异性染色，而在其他细胞中不染色，因此，UHRF1基因表达可用于肺癌的病理诊断。第二方面，本专利技术提供如第一方面所述的肺癌诊断标志物用于制备筛选肺癌的诊断和/或治疗药物中的应用。第三方面，本专利技术提供如第一方面所述的肺癌诊断标志物用于制备肺癌的检测试剂中的应用。根据本专利技术，所述检测试剂还包括用于免疫组化法和/或PCR法检测生物标志物UHRF1基因的相关试剂。第四方面，本专利技术提供一种肺癌诊断用试剂盒，所述试剂盒包括一种或多种特异性检测UHRF1基因表达水平的引物和/或探针。根据本专利技术，所述试剂盒包括利用实时定量PCR法检测UHRF1基因的引物，所述引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1-2所示：上游引物(SEQIDNO.1):5'-CCAGCAGAGCAGCCTCATC-3'；下游引物(SEQIDNO.2):5'-TCCTTGAGTGACGCCAGGA-3'.根据本专利技术，所述试剂盒还包括GAPDH内参基因引物，所述GAPDH内参基因引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3-4所示：上游引物(SEQIDNO.3):5'-CAGGAGGCATTGCTGATGAT-3'；下游引物(SEQIDNO.4):5'-GAAGGCTGGGGCTCATTT-3'.优选地，所述试剂盒还包括缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶。第五方面，本专利技术提供一种如第四方面所述的试剂盒用于制备肺癌诊断试剂的应用。第六方面，本专利技术提供一种UHRF1基因的检测方法，所述检测方法包括使用如第四方面所述的试剂盒。根据本专利技术，包括如下步骤：(1)采集待检样本，进行免疫组化检测和/或使用如权利要求5或6所述试剂盒中的引物进行qRT-PCR扩增；(2)分析UHRF1基因的表达情况。根据本专利技术，步骤(1)所述qRT-PCR扩增的反应条件为：(a)48-52℃1-3min、93-98℃8-12min，1-2循环；(b)92-98℃10-30s、58-62℃1-3min，25-35个循环；(c)4℃保存。优选地，步骤(1)所述qRT-PCR扩增的反应条件为：(a)50℃2min、95℃10min，1循环；(b)95℃15s、60℃1min，30个循环；(c)4℃保存。在本专利技术一个具体实施例中，所述PCR扩增的具体反应步骤如下：具体反应体系如下；设置一组以水为样本的阴性对照。反应条件如下：作为优选技术方案，所述UHRF1基因的检测方法，包括如下步骤：(1)免疫组化检测：提取样本组织，石蜡包埋并切片，采用UHRF1抗体，进行免疫组化实验；(2)分析UHRF1基因的表达情况。作为优选技术方案，所述UHRF1基因的检测方法，包括如下步骤：(1)qRT-PCR扩增：提取样本组织，提取RNA，使用如第四方面所述试剂盒的引物进行qRT-PCR扩增反应：(a)50℃2min、95℃10min，1循环；(b)95℃15s、60℃1min，30个循环；(c)4℃保存；(2)分析UHRF1基因的表达情况。对于本领域技术人员来说，即使不明了本专利技术的检测原理，同样能够实施、再现本专利技术，即本专利技术的检测原理是否清楚明了，都不影响本专利技术的实施和再现。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：(1)本专利技术通过调查分析肺癌患者的手术标本，发现UHRF1基因是肺癌诊断的新型标志物，并且采用免疫组化和PCR的方法检测UHRF1基因的表达，准确性高，特异性好，假阳性假阴性率低，操作简单方便，仪器设备要求低，适应性广；(2)本专利技术检测试剂盒可用于UHRF1基因检测，对肺癌情况进行预测，提早发现存在的风险，尽早为治疗和防治做出准备；(3)本专利技术所提供的用于检测UHRF1基因的检测试剂盒及其检测方法，具有很高的应用价值，操作简单方便，为肺癌诊断试剂的研究提供了新的方向，为临床制药提供理论基础。附图说明图1为免疫组化检测UHRF1基因在肺癌中的表达，其中，图(A)为正常肺组织，图(B)为非小细胞肺癌(女，大细胞癌，T2N0M0)，图(C)为非小细胞肺癌(女，腺鳞癌，T2N1M0)，图(D)为非小细胞肺癌(男，腺鳞癌，T2N1M0)，图(E)为小细胞肺癌，无分期，图(F)为小细胞肺癌(男，鳞癌，T2N0M0)，图(G)为非小细胞肺癌(男，鳞癌，T2N0M0)，图(H)为非小细胞肺癌(男，鳞癌，T2N0M0)，图(I)为非小细胞肺癌(男，鳞癌，T2N0M0)，图(J)为非小细胞肺癌(男，鳞癌，T2N1M0)，图(K)为非小细胞肺癌(男，鳞癌，T3N0M0)，图(L)为非小细胞肺癌(男，鳞癌，T3N0M0)；图2为免疫组化检测UHRF1在非小细胞肺癌中的表达，其中，图(A)为正常肺组织，图(B)为非小细胞肺癌(女，腺癌，T2N0M0)，图(C)为非小细胞肺癌(女本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肺癌诊断标志物，其特征在于，所述肺癌诊断标志物为UHRF1基因。

【技术特征摘要】
1.一种肺癌诊断标志物，其特征在于，所述肺癌诊断标志物为UHRF1基因。2.根据权利要求1所述的肺癌诊断标志物用于制备筛选肺癌的诊断和/或治疗药物中的应用。3.根据权利要求1所述的肺癌诊断标志物用于制备肺癌的检测试剂中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测试剂还包括用于免疫组化法和/或PCR法检测生物标志物UHRF1基因的相关试剂。5.一种肺癌诊断用试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括一种或多种特异性检测UHRF1基因表达水平的引物和/或探针。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括利用实时定量PCR法检测UHRF1基因的引物；优选地，所述引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1-2所示；优选地，所述试剂盒还包括GAPDH内参基因引物；优选地，所述GAPDH内参基因引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3-4所示；优选地，所述试剂盒还包括缓冲液、dNTPs和...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘鹏飞，张文盼，王菁蕊，
申请(专利权)人：天津脉络医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12