一种高度氧化的新化合物及其医药用途制造技术

本发明专利技术公开了一种高度氧化的新化合物及其医药用途，提供了该化合物结构，含其的药物组合物及其制备方法和应用，是一种结构新颖、高度氧化的新化合物，可以从车前的干燥全草中提取、分离纯化得到。体外试验证明该化合物能对抗Aβ25‑35诱导的PC12神经细胞凋亡，可以用来开发成保护神经的药物。

A new compound of high oxidation and its use in medicine

The invention discloses a new compound, a highly oxidizing and medicine use, provides the structure of the compound, pharmaceutical composition containing the same and preparation method and application thereof, new compounds are novel structure, high oxidation, extraction, separation and purification can be obtained from the front of the whole dry grass. In vitro experiments showed that the compounds can antagonize the A beta 25 35 PC12 induced apoptosis of nerve cells, the drug can be used to develop neural protection.

【技术实现步骤摘要】
一种高度氧化的新化合物及其医药用途
本专利技术属于药物
，具体涉及从车前草中分离得到的一种高度氧化的新化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
技术介绍
车前草为车前科Plantaginaceae植物车前PlantagoasiaticaL.或平车前PlantagodepressaWilld.的干燥全草，是《中国药典》(2010年版)收载的常用中药。目前，已发现的车前科有3属，约200种，分布遍及全世界。我国仅产车前属Plantago，约13种。除车前与平车前外，国内外研究较多车前草还有大车前PlantagomajorL.。车前草性味甘寒，具有利水、清热、明目、祛痰的功效。主治淋病、尿血、小便不通、黄疽、水肿、热痢、泄泻、目赤肿痛、喉痛等。《草性论》载“治尿血，能补五脏，明目，利小晒干的车前草便，通五淋”。《本草逢原》载“若虚滑精气不固者禁用”。性味和功用甘，寒，归手太阳，阳明经。利水，清热，明目，祛痰，用于小便不通，淋浊，带下，尿血，黄疸，水肿，热痢泄泻，鼻衄，目赤肿痛，喉痛，咳嗽，皮肤溃疡。讫今为止，已从前述3种车前草中分离和鉴定出超过60种化合物，按其主要结构类型可分为环烯醚萜类、黄酮类、苯乙基苷类、酚酸类和脂肪酸类等成分。环烯醚萜类有利尿，抑菌，抗四氧化碳引起的肝中毒，利胆作用；黄酮类可作用于呼吸中枢，缓解呼吸运动而镇咳，兴奋分泌神经使气管及支气管分泌增加而祛痰；苯乙基苷类有消炎、抑菌、抑制Camp磷酸二酯酶和醛糖还原酶的活性；酚酸类具有杀菌、升白、利胆、抑制血小板聚集等功能。现代药理学研究表明，车前草具有多种药理活性，用途广泛，可以用于治疗慢性支气管炎、急性黄疸型肝炎、痛风性关节炎、高血压、细菌性痢疾、隐匿性肾炎、青光眼和痛风等。PC12细胞株源于大鼠嗜铬细胞瘤，具有神经元的特征，因此作为神经元的模型用于研究神经元细胞的死亡方式及机制的研究。多项研究已经表明，Aβ对PC12细胞的细胞毒性作用是由于氧应激、线粒体功能异常等引致细胞凋亡。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从车前干燥全草中分离得到的一种高度氧化的新化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，所述的化合物(Ⅰ)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)车前草粉碎，用80％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，依次用20％乙醇和80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，减压浓缩得80％乙醇洗脱物浸膏；(c)步骤(b)中80％乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为90:1、60:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65％的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-11个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(Ⅰ)。进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物(Ⅰ)和药学上可接受的载体。所述的化合物(Ⅰ)在制备保护神经的药物中的应用。所述的药物组合物在制备保护神经的药物中的应用。本专利技术化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有治疗有效量的本专利技术化合物(Ⅰ)，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本专利技术的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本专利技术药物可通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。说明书附图图1为化合物(Ⅰ)结构式；图2为化合物(Ⅰ)二维ROESY谱；图3为MTT代谢率检测Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用；图4为Aβ25-35对PC12细胞LDH释放率的影响；图5为Aβ25-35和/或化合物(Ⅰ)对PC12细胞LDH释放率的影响。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容，但并不以此限定本专利技术保护范围。尽管参照较佳实施例对本专利技术作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本专利技术的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的实质和范围。主要材料、试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。Aβ25-35购于美国sigma公司。MTT(四唑氮蓝)购于美国Amresco公司。LDH测定试剂盒购于南京建成生物有限公司。吖啶橙(AO)购于美国sigma公司。溴化乙啶(EB)购于美国sigma公司。RNase酶购于美国sigma公司。蛋白酶K购于美国sigmaAnnexin公司。Ⅴ-FITC细胞凋亡检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司。D-MEM/F12培养基干粉购于美国GibcoL公司。马血清购于美国hycLon公司。胎牛血清购于杭州四季青生物工程有限公司。多聚赖氨酸(PLL)购于美国sigma公司。仪器类型：低温高速离心机，美国Heraeus；二氧化碳培养箱，美国SHELL/JB；超净工作台，苏州净化设备厂；雷勃MK3酶标仪，芬兰Thermolabsystems；荧光显微镜，德国Leica；流式细胞仪EpicsXL，美国CouLter公司；电泳系统，北京六一仪器厂；雷勃MK3酶标仪，芬兰Thermolabsystems；荧光显微镜，德国Leica；流式细胞仪EpicsXL，美国CouLter公司；电泳系统，北京六一仪器厂。实施例1：化合物(Ⅰ)分离制备及结构确证(a)车前的干燥全草(8kg)粉碎，用80％乙醇热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味(6L)，依次用石油醚(6L×3次)、乙酸乙酯(6L×3次)和水饱和的正丁醇(6L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(333g)和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，依次用20％乙醇(8L)和80％(12L)乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，减压浓缩得80％乙醇洗脱物浸膏(152g)；(c)步骤(b)中80％乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为90:1(7个柱体积)、60:1(7个柱体积)、30:1(8个柱体积)、15:1(7个柱体积)和1:1(5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；(d)步骤(c)中组分4(38g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1(10个柱体积)、12:1(8个柱体积)和5:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2(11g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65％的甲醇水溶液等度洗脱，收集8本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，

【技术特征摘要】
1.具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，。2.权利要求1所述的化合物(Ⅰ)的制备方法，其特征在于包含以下操作步骤：(a)车前草粉碎，用80％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，依次用20％乙醇和80％乙醇洗脱，收集80％乙醇洗脱液，减压浓缩得80％乙醇洗脱物浸膏；(c)步骤(b)中80％乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为90:1、60:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；(d)步骤(...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟雪萍，
申请(专利权)人：成都宝科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51