鉴别H5N6亚型AIV神经氨酸酶NA基因亚分支的RT‑PCR引物及其检测方法技术

本发明专利技术涉及一种鉴别H5N6亚型AIV神经氨酸酶NA基因亚分支的RT‑PCR引物及其检测方法和应用，所述引物的序列为：上游引物N6LF：5’‑AATCCAAATCAAAAGATAACATGC‑3’；上游引物N6SF：5’‑AAATAATCACCCTCAGAATAATTT‑3’；下游引物N6R：5’‑TGGATCRCAGGACARGTAAGGTTC‑3’，利用该引物建立RT‑PCR检测方法，根据琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物有1条带还是2条带，特异性地对不缺失型神经氨酸酶N6基因以及缺失型神经氨酸酶N6基因进行鉴别诊断；本发明专利技术鉴定方法简单、方便高效、准确率较高，可应用于N6基因型的鉴别。

RT PCR primers to distinguish H5N6 subtypes of NA gene AIV neuraminidase and detection method of sub branch

The invention relates to a method for identification of H5N6 subtype AIV neuraminidase NA gene sub branch RT PCR primer and detection method and application, the sequence of primers for N6LF:5 AATCCAAATCAAAAGATAACATGC 'primer 3' N6SF:5 'AAATAATCACCCTCAGAATAATTT; upstream primer; primer N6R:5 3' 3 ',' by TGGATCRCAGGACARGTAAGGTTC the primer method for detecting RT PCR, according to the product of PCR was observed by agarose gel electrophoresis and 1 bands and 2 bands, specifically for the differential diagnosis of non deletion type neuraminidase N6 gene and deletion type neuraminidase enzyme N6 gene; the identification method is simple and convenient, efficient accurate identification can be used in the N6 genotype.

【技术实现步骤摘要】
鉴别H5N6亚型AIV神经氨酸酶NA基因亚分支的RT-PCR引物及其检测方法
本专利技术属于动物传染病学领域，具体涉及一种鉴别H5N6亚型AIV神经氨酸酶NA基因亚分支的RT-PCR引物及其检测方法和应用。
技术介绍
禽流感(avianinfluenza，AI)是由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的主要侵害家禽及野鸟的一种急性、高度接触性传染病，可引起禽类出现大量死亡、产蛋量下降、严重的呼吸道系统综合症或隐性感染等多种病型。目前禽流感遍布世界各地，给各国养禽业造成巨大的经济损失。A型流感病毒不仅对养禽业造成严重危害，而且具有重要的公共卫生学意义，某些亚型的禽流感病毒可以引起人的感染，但通常这种感染不会在人与人之间引起连续传播。禽流感病毒(avianinfluenzavirus，AIV)基因组为单股负链分节段的RNA，其基因组分为8个片段，分别为PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS。依照流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)结构及特性的不同，可将A型流感病毒分为若干亚型，迄今共发现18种HA亚型(H1～H18)和11种NA亚型(N1～N11)。H5N6亚型AIV是近本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴别H5N6亚型AIV神经氨酸酶NA基因亚分支的RT‑PCR引物，其特征在于：所述引物的序列如下：上游引物N6LF：5’‑AATCCAAATCAAAAGATAACATGC‑3’；上游引物N6SF：5’‑AAATAATCACCCTCAGAATAATTT‑3’；下游引物N6R：5’‑TGGATCRCAGGACARGTAAGGTTC‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种鉴别H5N6亚型AIV神经氨酸酶NA基因亚分支的RT-PCR引物，其特征在于：所述引物的序列如下：上游引物N6LF：5’-AATCCAAATCAAAAGATAACATGC-3’；上游引物N6SF：5’-AAATAATCACCCTCAGAATAATTT-3’；下游引物N6R：5’-TGGATCRCAGGACARGTAAGGTTC-3’。2.利用权利要求1所述的引物鉴别H5N6亚型AIV神经氨酸酶NA基因亚分支的RT-PCR检测方法，其特征在于：利用上游引物N6LF：5’-AATCCAAATCAAAAGATAACATGC-3’、上游引物N6SF：5’-AAATAATCACCCTCAGAATAATTT-3’以及下游引物N6R：5’-TGGATCRCAGGACARGTAAGGTTC-3’建立RT-PCR检测方法；所述引物对不缺失型神经氨酸酶N6基因以及缺失型神经氨酸酶N6基因均可扩增，根据琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物有1条带还是2条带，特异性地对不缺失型神经氨酸酶N6基因以及缺失型神经氨酸酶N6基因进行鉴别诊断。3.根据权利要求2所述的鉴别H5N6亚型AIV神经氨酸酶NA基因亚分支的RT-PCR检测方法，其特征在于：它包括以下步骤：(1)核酸的提取：提取病毒样本的RNA；(2)RT-PCR扩增反应：利用上游引物N6LF：5’-AATCCAAATCAAAAGATAACATGC-3’、上游引物N6S...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈翠腾，万春和，黄瑜，朱春华，陈珍，刘斌琼，
申请(专利权)人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35