癌基因治疗药物制造技术

本发明专利技术的癌基因治疗药物是配合了为诱导生物体的ＣＴＬ反应而给予的免疫处理用病毒和给予前用溶瘤病毒感染并使该病毒作用于生物体肿瘤细胞的载体细胞的药物。载体细胞可以使用例如Ａ５４９细胞。另外，免疫处理用病毒可以使用例如经紫外线照射灭活的非增殖型腺病毒，溶瘤病毒可以使用例如含有肿瘤特异性启动子的增殖型腺病毒。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及癌基因治疗药物、以及使用该治疗药的癌基因治疗方法。
技术介绍
近年来，关于癌治疗，基因治疗引人注目，到目前为止提出了各种各样的基因治疗法，并进行了临床试验。其中，对于使用载体细胞的基因治疗，由Freeman等人进行了临床试验。该基因治疗使用通过逆转录病毒导入了HSV-tk基因的卵巢癌细胞PA-1作为载体细胞，进行了用于卵巢癌治疗、以及恶性间皮瘤治疗目的的临床试验(参照下面的非专利文献1、2)。另外，Culver等人使用小鼠NIH-3T3细胞作为载体细胞，对脑肿瘤进行了临床试验(参照下面的非专利文献3)。然而，如果考虑到对人适用的癌治疗，作为载体细胞要求使用来自人的细胞。还有Coukos等人进行了使用卵巢癌细胞PA-1作为载体细胞的基因治疗(参照下面非专利文献4)。该基因治疗构建了在肿瘤细胞中进行特异增殖的溶瘤病毒(oncolytic virus)，使该病毒感染载体细胞(产毒细胞)，然后将该载体细胞给予到肿瘤部位。作为溶瘤病毒使用单纯疱疹病毒1型(HSV-1)，对于裸鼠的卵巢癌腹腔内播散性转移模型，进行给予到腹腔内的动物实验(参照下面的专利文献1、2)。然而，上述的卵巢癌细胞PA-1虽然是增殖能力高、操作容易的细胞，但细胞质小、容易破坏。因此，即使通过逆转录病毒导入HSV-tk基因，HSV-tk基因在肿瘤部位的表达少，所以在Freeman等人的临床试验中，对卵巢癌和恶性间皮瘤没有获得充分的抗肿瘤效果。在使用溶瘤病毒HSV-1的癌基因治疗中，作为载体细胞使用PA-1时，与单独溶瘤病毒HSV-1疗法相比也没有获得明显的抗肿瘤效果。利用病毒进行癌基因治疗的问题在于由于血中的中和抗体的原因而不能多次给予病毒。可以认为使用PA-1时，由于细胞脆弱，病毒产生量也少，因此在通过细胞间相互作用(cell to cellinteraction)感染靶肿瘤细胞之前，细胞被破坏掉，进而病毒直接被中和抗体灭活，不能获得抗肿瘤效果。另外在细胞性免疫基因治疗的临床试验中，作为载体细胞有时使用患者自身的癌细胞或成纤维细胞(fibroblast)，这种情况下，由于直至获得稳定的细胞系需要时间，手术困难，以及基因导入因个体不同而存在差异，不稳定，所以很难获得稳定的效果。非专利文献1Human Gene Therapy，6，927-939，1995非专利文献2Human Gene Therapy，9，2641-2649，1998非专利文献3Science，256，1550-1552，1992非专利文献4Clinical Cancer Research，5，1523-1537，1999专利文献1国际公开第99/45783号论文专利文献2国际公开第01/23004号论文
技术实现思路
专利技术要解决的课题本专利技术正是要解决这样的以往问题而进行的，所以本专利技术的目的在于挑选出在使用溶瘤病毒的癌基因治疗中能够获得强力抗肿瘤效果的新的载体细胞，以及确立使用所得到的载体细胞等而可获得显著抗肿瘤效果的新的癌基因治疗法以及提供在该治疗法使用的新的癌基因治疗药物。用于解决课题的手段本专利技术者鉴于上述课题进行了不断研究，结果发现(1)通过使用特定的细胞株作为载体细胞，与以往的载体细胞相比，可获得强力的抗肿瘤效果，以及(2)预先给予病毒实施免疫处理后，通过给予感染了溶瘤病毒的载体细胞，诱导.引起生物体的CTL反应，可在体内(in vivo)获得显著的抗肿瘤效果等，至此完成本专利技术。即，本专利技术的癌基因治疗药物(换言之，癌治疗用药剂试剂盒)配合了为诱导生物体对载体细胞的给予所产生的C TL反应而给予的免疫处理用病毒，和用于在给予前用溶瘤病毒感染并使该病毒作用于生物体的肿瘤细胞的载体细胞。本专利技术的免疫处理用病毒和溶瘤病毒最好是从腺病毒、疱疹病毒、HIV病毒等慢病毒、逆转录病毒、呼肠病毒、水泡性口炎病毒(VSV)、或其它的溶瘤病毒中选择。其中由于使用腺病毒可获得如下面所述那样的良好结果，所以特别理想。另外，本专利技术的溶瘤病毒最好是根据治疗对象癌的种类等而含有1A1.3B启动子(IAI.3B启动子)、中期因子启动子、β-HCG启动子、SCCA1启动子、cox-2启动子、PSA启动子、或其它肿瘤特异性启动子。而在本专利技术中溶瘤病毒只要是感染靶肿瘤细胞能够增殖的就可以，例如腺病毒，在其范畴内包括野生型腺病毒。其它溶瘤病毒，如ONYX公司的E1B基因缺失型的溶瘤腺病毒、或UAB大学的E1A基因部分缺损型的Ad5-Δ24腺病毒等不含有肿瘤特异性启动子的也可以。作为本专利技术的免疫处理用病毒最好使用非增殖型的病毒和/或用紫外线等灭活的病毒。通过用紫外线等灭活，可以将从免疫处理用病毒的给予至载体细胞给予的期间缩短。本专利技术的载体细胞最好从A549细胞、293细胞、SW 626细胞、HT-3细胞(HT-III细胞)、或其它的来自人的癌细胞或正常细胞中选择，此外也可以使用Crucell公司的PER.C6细胞等市售的细胞系。上述A549细胞、293细胞、SW 626细胞和HT-3细胞由于可以获得如下所述那样的良好的结果，所以作为载体细胞更理想，另外如下面所述那样，在这些细胞中A549细胞的使用特别理想。本专利技术的癌基因治疗药物(癌治疗用药剂试剂盒)可认为是配合了免疫处理用病毒和载体细胞的药物，或在其中再添加溶瘤病毒而配合了3者的试剂盒的构成，还可含有下面的(1)～(4)物质中1或2种以上物质。(1)端胶原(atelocollagen)(2)在给予前，使载体细胞感染的GM-CSF(granulocyte-macrophage colony stimulating factor粒细胞·巨噬细胞集落刺激因子)表达载体(3)铁剂(4)卟啉化合物(例如，5-氨基酮戊酸(5-aminolevulinicacidALA))另外，在给予免疫处理用病毒的同时、或在给予前后，最好是给予用于肿瘤免疫的来自患者肿瘤细胞或认为对与它类似的抗原进行提示的一般可获得的放射线照射的肿瘤细胞，本专利技术的癌基因治疗药物也可以含有用于肿瘤免疫的这些进行了放射线照射的肿瘤细胞。本专利技术的癌基因治疗方法的特征是为了诱导生物体对载体细胞的给予所产生的CTL反应而对人给予免疫处理用病毒，经过规定期间后，至少给予人一次用溶瘤病毒感染并用于使该病毒作用于肿瘤细胞的载体细胞。在本专利技术的癌基因治疗方法中，最好是将从给予免疫处理用病毒至给予载体细胞的期间大致定在2周～13周(更优选3周以上4周或其以下)。另外最好是(1)免疫处理用病毒的给予量为对于对该病毒呈抗体阴性的患者定在大约105病毒粒子～1011病毒粒子，而另一方面对于对该病毒呈抗体阳性的患者定在大约102病毒粒子～107病毒粒子，(2)通过载体细胞1次给予溶瘤病毒的给予量大约定在109病毒粒子～1014病毒粒子，(3)溶瘤病毒对载体细胞的感染量大约定在0.1病毒粒子/细胞(viral particle/cell以下称为“vp/cell”)～2000vp/cell(优选5vp/cell～500vp/cell)。另外在本专利技术的癌基因治疗方法中，最好是采用下述(1)～(5)的方法。(1)通过肿瘤内给予方式给予载体细胞。(2)与载体细胞一起给予端胶原。(3)给予用溶瘤病毒和GM-CSF表达载体感本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种癌基因治疗药物，该癌基因治疗药物配合：为了诱导生物体对载体细胞的给予所产生的ＣＴＬ反应而给予的免疫处理用病毒，和在给予之前以溶瘤病毒感染、并用于使该病毒作用于生物体肿瘤细胞的载体细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：滨田雄行，后藤章畅，白川利朗，
申请(专利权)人：财团法人新产业创造研究机构，
类型：发明
国别省市：JP[日本]