一种检测普氏立克次体的RPA方法、其专用引物和探针及用途技术

本发明专利技术提供了用于检测普氏立克次体的RPA检测方法，其专用引物、探针及其在普氏立克次体检测中的用途。所述检测方法、其专用引物和探针及基于普氏立克次体特异性保守序列设计的，具有SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的寡核苷酸序列。本发明专利技术首次将新型恒温扩增技术RPA应用于普氏立克次体的检测中，该方法模拟体内DNA复制的酶反应过程，依赖特定的酶和蛋白组合，包括重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶，对DNA模板进行扩增，可在37℃的恒温下实现特定核酸序列的扩增，扩增产物可通过侧向层析核酸试检测纸条实现可视化判别。本发明专利技术建立的检测方法灵敏度可达10拷贝数/μL，特异性高，对硬件设备的要求很低，且可在30min内完成检测，无需对样品进行复杂处理、适合现场检测，适于推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种检测普氏立克次体的RPA方法、其专用引物和探针及用途
本专利技术属于生物
，涉及普氏立克次体的分子生物学，涉及一种检测普氏立克次体的方法及其用途，特别涉及一种利用重组酶聚合酶恒温扩增技术（RPA技术）快速检测普氏立克次体的方法、其专用引物和探针及其用途。
技术介绍
普氏立克次体（Rickettsiaprowazekii）俗称流行性斑疹伤寒，为专性细胞内寄生的革兰氏阴性菌，对外界环境抵抗力强、存活时间长，人类和动物普遍易感，且可通过气溶胶广泛传播，是高致死性、已生物战剂化的病原体之一。流行性斑疹伤寒为虱传播，临床症状较重，主要表现为高热、头痛、皮疹，甚者神经症状显著，可出现听觉障碍、神志昏迷直至死亡。临床表现当人受到感染后，经10-14天的潜伏期，骤然发病，有剧烈头痛、周身痛和高热，4-7天后出现皮疹，严重的为出血性皮疹。有的还伴有神经系统、心血管系统等症状和其他实质器官损害。流行性斑疹伤寒，在人口密集和昆虫繁盛的环境内比较严重。当流行时，病人平均死亡率20%，严重时可达70%。病原体借人虱在人群中传染，所以灭虱是预防流行性斑疹伤寒的重要措施。对立氏立克次体的检测方法主要包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测普氏立克次体的RPA专用引物，是根据普氏立克次体特异性保守序列设计的，所述普氏立克次体特异性保守序列具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列SEQ ID NO.1：AAACAGGAAATTAATTCTATTAATAGTTTAGATTCAGCAGTTCTTGTAGAATCACAACAGTTTAAAAAAACTAAAAGTCTAGAAGATATAGAAGATGGATCTTTATCATCACAATTAAAGCAAACTAAATATAAATCGGTGTTATCACCTTCTTCTTATGTTAACGACATGTTTAGTAATGAGCATCATCAAAACTCTAGCATTGAACTAC...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测普氏立克次体的RPA专用引物，是根据普氏立克次体特异性保守序列设计的，所述普氏立克次体特异性保守序列具有SEQIDNO.1所示的核苷酸序列SEQIDNO.1：AAACAGGAAATTAATTCTATTAATAGTTTAGATTCAGCAGTTCTTGTAGAATCACAACAGTTTAAAAAAACTAAAAGTCTAGAAGATATAGAAGATGGATCTTTATCATCACAATTAAAGCAAACTAAATATAAATCGGTGTTATCACCTTCTTCTTATGTTAACGACATGTTTAGTAATGAGCATCATCAAAACTCTAGCATTGAACTACCAAAGTTGTTGCATAGTTCATTGAGTGATACGAACAGTTCGCTTAATGATTGTATAAATCAACTACGATGTGCAAATACATCAGATGTATATAATTTATCATATACACTTTCAAATAAAACAAAGCAATTAAGTATTGATGAACTCAAAAATACATTAGAACAAATGCAAACTTCTCCTAATATAAATATAGTATTGCCTATGCTAATTAGAGTACAACAAGATTATGTAAATGAGGTTGCTGAAATATACCAGCAGACTATAGAACAAAGAAAGCAAAACCCAAGTGAGCAGGCAAAAAATCAAGAAGAGGTAGTAGCAGCTTACTTTACTCAAGAATACGATAAACTA。2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于：所述引物中的正向引物具有SEQIDNO.2所示的寡核苷酸序列，反向引物具有SEQIDNO.3所示的寡核苷酸序列，且5’端标记生物素（Biotin）SEQIDNO.2：5’TTAATAGTTTAGATTCAGCAGTTCTTGTAG3’SEQIDNO.3：5’GTTCGT...

【专利技术属性】
技术研发人员：李越希，齐永，邵银秀，尹琼，王长军，李素芹，陈红霞，饶继先，李佳萌，胡志斌，陈乐如，郭峻，杨彬彬，
申请(专利权)人：李佳萌，
类型：发明
国别省市：江苏,32