检测O‑乙酰葡萄糖胺转移酶的纳米传感器及其检测方法技术

本发明专利技术属于生物分析检测技术领域，公开了一种基于单个量子点检测O‑乙酰葡萄糖胺转移酶的纳米传感器及其检测方法。本发明专利技术纳米传感器包括：花菁5/生物素修饰的肽链；非放射性尿苷‑乙酰葡萄糖胺和被链霉亲和素包被的量子点；所述花菁5/生物素修饰的肽链为：Biotin‑Ser‑Thr‑Pro‑Val‑Ser‑Arg‑Ala‑Asn‑‑Met‑Lys‑Cy5；本发明专利技术纳米传感器检测方法非常简单，不需要进行酶纯化，不需要放射性同位素标记的糖供体、特异性抗体和荧光UDP‑GlcNAc类似物的合成，并且检测限可降低至3.47×10

【技术实现步骤摘要】
检测O-乙酰葡萄糖胺转移酶的纳米传感器及其检测方法
本专利技术属于生物分析检测
，具体涉及一种基于单个量子点检测O-乙酰葡萄糖胺转移酶的纳米传感器及其检测方法。
技术介绍
蛋白糖基化是一种普遍存在的翻译后修饰，其中蛋白是由一个氧连接的N-乙酰葡糖胺(O-GlcNAc)单体修饰在丝氨酸或苏氨酸残基，被称为氧连接型乙酰葡萄糖胺糖基化。O-GlcNAc在多种细胞过程中起着重要作用，包括信号传导，基因表达，蛋白质降解，新陈代谢，生物周期节律，和神经退行性疾病。人类氧连接乙酰葡萄糖胺转移酶(OGT)是一种细胞内源酶，催化从尿苷-乙酰葡萄糖胺(UDP-GlcNAc)的GlcNAc单体转移到蛋白质的丝氨酸或苏氨酸残基形成的GlcNAc-β-丝氨酸/苏氨酸，而OGT活性的失调与多种疾病相关，如癌症，糖尿病，阿尔兹海默症。因此，OGT可能成为疾病治疗的潜在治疗靶标。目前，检测OGT活性普遍通过监测放射性标记的糖基从糖供体(例如，UDP-[3H]-GlcNAc)转移到蛋白底物(例如，Nup62)来测量。但放射性标记的方法涉及昂贵的标记试剂和繁琐的分离程序。为了克服这些限制，多种非放射性方法已经被开本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测O‑乙酰葡萄糖胺转移酶的纳米传感器，其特征在于，所述纳米传感器包括：花菁5/生物素修饰的肽链；非放射性尿苷‑乙酰葡萄糖胺，蛋白酶K和被链霉亲和素包被的量子点。

【技术特征摘要】
1.一种检测O-乙酰葡萄糖胺转移酶的纳米传感器，其特征在于，所述纳米传感器包括：花菁5/生物素修饰的肽链；非放射性尿苷-乙酰葡萄糖胺，蛋白酶K和被链霉亲和素包被的量子点。2.根据权利要求1所述检测O-乙酰葡萄糖胺转移酶的纳米传感器，其特征在于，所述花菁5/生物素修饰的肽链为：Biotin-Ser-Thr-Pro-Val-Ser-Arg-Ala-Asn-Met-Lys-Cy5。3.根据权利要求书1或2所述纳米传感器的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.由糖供体尿苷-乙酰葡萄糖胺的糖基将花菁5/生物素修饰的肽糖基化；S2.蛋白酶K区分糖基化和非糖基化肽；S3.糖基化的肽通过链霉亲和素和生物素的相互作用自组装到量子点表面形成量子点-肽-花菁5的纳米结构和后续的荧光共振能量转移信号的测量。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S1的操作步骤为：含有2-3微摩尔每升的花菁5/生物素修饰的肽，90-100微摩尔每升的尿苷-乙酰葡萄糖胺，0.01-0.1单位的碱性磷酸酶，待测的OGT和10×反应缓冲液，组成总体积为20微升的反应溶液中在37℃下温育1个小时；所述反应缓冲液由500毫摩尔每升三羟甲基氨基甲烷，200毫摩尔每升的氯化钙，0.5％吐温-20和0.5％NP-40组成，pH值为7.8。5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S1的具体操作步骤为：含有2.4微摩尔每升...

【专利技术属性】
技术研发人员：张春阳，胡娟，李玥颖，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：山东,37