减毒的人-牛嵌合副流感病毒(PIV)疫苗制造技术

嵌合的人－牛副流感病毒（ＰＩＶ）在人和其它哺乳动物中有感染性且是减毒的，可以单独或组合形式用于疫苗制剂，诱导抗－ＰＩＶ的免疫应答。也提供了分离的多核苷酸分子和载体，其包含一个嵌合的ＰＩＶ基因组或反基因组，该嵌合ＰＩＶ基因组或反基因组包括与不同ＰＩＶ的一个或多个异源基因或基因组区段组合或整合的部分或全部的人或牛“背景”基因组或反基因组。本发明专利技术嵌合的人－牛ＰＩＶ包括部分或完全的“背景”基因组或反基因组，其来自或其构建自人或牛ＰＩＶ病毒与不同ＰＩＶ病毒的一个或多个异源基因或基因组区段组合，以形成人－牛嵌合ＰＩＶ基因组或反基因组。本发明专利技术的某些方面，嵌合ＰＩＶ含有组合了牛ＰＩＶ的一个或多个异源基因或基因组区段的部分或完整的人ＰＩＶ背景基因组或反基因组，产生的嵌合病毒在宿主范围限制上是减毒的。另一些实施方案，人－牛嵌合ＰＩＶ含有组合了来自人ＰＩＶ的一个或多个异源基因或基因组区段的部分或完整的牛ＰＩＶ背景基因组或反基因组，所述来自人ＰＩＶ的一个或多个异源基因或基因组区段编码人ＰＩＶ的免疫原蛋白、蛋白结构域或表位，如：ＰＩＶ ＨＮ和／或Ｆ糖蛋白的编码基因或基因组区段。本发明专利技术人－牛嵌合ＰＩＶ也可用作发展抗其它病原疫苗的载体。还提供了本发明专利技术人－牛嵌合ＰＩＶ中的多种额外的突变和核苷酸的修饰，以获得期望的表型和结构效果。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
相关申请的相互参考本专利技术要求由Bailly等于1999年7月9日申请的美国临时专利申请60/143,134的优先权。
技术介绍
人副流感病毒类型3(HPIV3)是幼儿和1岁以下儿童严重下呼吸道感染的一般诱因。它是仅次于呼吸道合胞病毒(RSV)的、导致该年龄段儿童因病毒性下呼吸道疾病入院的诱因(Collins等，B.N.FieldsVirology，p1205-1243，3rded.，vol.1.，Knipe等编辑，Lippincott-RavenPublishers，Philadelphia，1996；Crowe等，Vaccine 13415-421，1995；Marx等，J.Infect.Dis.1761423-1427，1997，在此引用作为参考)。该病毒的感染使3岁以下儿童发生显著病症。HPIV1和HPIV2喉气管支气管炎(哮吼)的主要病因，也能引起严重肺炎和细支气管炎(Collins等，1996，同上)。在为期20年的长期性研究中，发现HPIV1、HPIV2和HPIV3分别占因呼吸道疾病入院总数的6.0、3.2和11.5％，三者的总和占入院总数的18％，因此，需要有效的疫苗。(Murphy等，Virus Res.111-15，1988)。也发现副流感病毒占儿童中耳炎患者中病毒诱发的中耳积液的诱因的很大比例(Heikkinen等，N.Engl.J.Med.340260-264，1999，在此引入作为参考)。因此，需要发展一种抗这些病毒的疫苗，以预防严重的下呼吸道疾病和伴随HPIV感染的中耳炎。HPIV1、HPIV2和HPIV3是不同的血清型，不诱导显著的交叉保护性免疫。PIV的主要保护性抗原是介导病毒附着、穿透和释放的血凝素(HN)和融合(F)糖蛋白。抗再次感染的保护主要由病毒中和抗体介导。尽管对发展抗HPIV的有效疫苗疗法进行了大量的努力，仍然没有获得预防HPIV相关疾病的被认可的疫苗制剂。目前最有前景的是活的减毒疫苗病毒，因其用于非人灵长类动物中时，即使在被动转移抗体存在时(一种实验，模拟具有由母体获得的抗体的幼儿的状况)也有效(Crowe等，1995，同上；Durbin等，J.Infect.Dis.1791345-1351，1999a；分别在此引入作为参考)。两个活的减毒PIV3候选疫苗，野生型PIV3 JS株的温度敏感性(ts)衍生物(命名为PIV3 cp45)和一个牛PIV3(BPIV3)株，正在进行临床检测(Karron等，Pediatr.Infect.Dis.J.15650-654，1996；Karron等，1995a，同上；Karron等，1995b，同上；分别在此引入作为参考)。BPIV3候选疫苗是在幼儿和儿童中减毒的、遗传上稳定，并具有免疫原性的。第二个PIV3候选疫苗(JS cp45)是HPIV3 JS野生型(wt)株的冷适应突变体(Karron等，1995b，同上；和Belshe等，J.Med.Virol.10235-242，1982a；分别在此引入作为参考)。这种活的、冷传代(cp)的PIV3候选疫苗具有温度敏感(ts)、冷适应(ca)、和减毒(att)的表型，在体内实验病毒复制后是稳定的。cp45病毒在实验动物中可保护个体免受人PIV3的攻击，并且在血清反应阴性的幼儿和儿童中是减毒、遗传上稳定，并具有免疫原性的(Belshe等，1982a，同上；Belshe等，Infect.Immun.37160-165，1982b；Clements等，J.Clin.Micrbiol.291175-1182，1991；Crookshanks等，J.Med.Virol.13242-249，1984；Hall等，Virus Res.22175-184，1992；Karron等，1995b，同上；分别在此引入作为参考)。由于这些PIV3候选疫苗是生物学来源的，没有可靠的方法调节其减毒水平，而这正是广泛临床应用所需的。近来，重组DNA技术促进PIV3候选疫苗的发展，使从cDNA得到感染性负链RNA病毒成为可能(综述参见Conzelmann，J.Gen.Virol.77381-389，1996；Palese等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.9311354-11358，1996；分别在此引入作为参考)。文中报道了在必需病毒蛋白存在时，从cDNA编码的反基因组RNA中拯救的一些重组病毒，这些病毒包括感染性呼吸道合胞病毒(RSV)、狂犬病病毒(RaV)、猿猴病毒5(SV5)、牛瘟病毒、新城疫病毒(NDV)、水泡性口膜炎病毒(VSV)、麻疹病毒(MeV)、腮腺炎病毒(MuV)、和仙台病毒(SeV)(参见，如，Garcin等，EMBO J.146087-6094，1995；Lawson等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.924477-4481，1995；Radecke等EMBO J.145773-5784，1995；Schnell等，EMBO J.134195-4203，1994；Whelan等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.928388-8392，1995；Hoffman等J.Virol.714272-4277，1997；Kato等Genes to Cells 1569-579，1996；Roberts等，Virology2471-6，1998；Baron等，J.Virol.711265-1271，1997；国际公开WO97/06270；Collins等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.9211563-11567，1995；1997年7月15日的US专利申请08/892,403(相应于公布的国际申请WO 98/02530和优先权US临时申请1997年5月23日的60/047,634，1997年5月9日的60/046,141，1996年7月15日的60/021,773)；1999年4月13日的美国专利申请09/291,894；1999年4月13日的美国临时专利申请60/129,006；1999年7月9日Bucholz等的美国临时专利申请60/143,097；Juhasz等，J.Virol.715814-5819，1997；He等，Virology237249-260，1997；Peters等，J.Virol.735001-5009，1999；Whitehead等，Virology 247232-239，1998a；Whitehead等，J.Virol.724467-4471，1998b；Jin等，Virology 251206-214，1998；Bucholz等，J.Virol.73251-259，1999；Whitehead等，J.Virol.733438-3442，1999；Clarke等，J.Virol.744831-4838，2000；为各种目的在此分别全文引用作为参考)。在特别与本专利技术有关的方面，近来发展了一种获得具有来自cDNA的wt表型的HPIV的方法，用于回收感染性的重组HPIV3 JS株(参见，如，Durbin等，Virology 235323-332，1997a；1998年5月22日的美国专利申请本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种经分离的感染性人－牛嵌合副流感病毒（ＰＩＶ），包含主要核壳（Ｎ）蛋白、核壳磷蛋白（Ｐ）、大的聚合酶蛋白（Ｌ）和组合了另一种ＰＩＶ的一个或更多异源基因或基因组区段以形成人－牛嵌合ＰＩＶ基因组或反基因组的人ＰＩＶ（ＨＰＩＶ）或牛ＰＩＶ（ＢＰＩＶ）的部分或完整的ＰＩＶ背景基因组或反基因组。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：亚历山大C施密特，马里奥H斯基亚道普洛斯，彼得L柯林斯，布赖恩R墨菲，简E贝利，安娜P德宾，
申请(专利权)人：美国政府健康及人类服务部，
类型：发明
国别省市：US[美国]