牛副流感病毒的合成基因的制备方法技术

技术编号:1736352 阅读:297 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
发明专利技术公开了构成一种用于产生病毒蛋白或其一部分的合成基因方法.该方法可用于负链RNA病毒基因组上组建基因,如流感病毒或副流感病毒基因于适当宿主上,用表达合成基因所制备的蛋白或其一部分,并用于疫苗或诊断目的.(*该技术在2005年保护过期,可自由使用*)

【技术实现步骤摘要】
本专利技术是有关生产抗牛Ⅲ类付流感病毒(PI-3)疫苗,这种病毒分类是付粘病毒,尤其是编码的PI-3蛋白的合成DNA基因可以以在此公开了的方法生产出来。这些基因可透过转录细胞来生产所选择的病毒蛋白,可应用于疫苗,诊断动物或其他的生物蛋白。合成基因本身将用作为一种诊断剂。牛Ⅲ号付流感病毒也称之为PI-3或载热病毒,是在牛的急性呼吸道病症的综合症开始出现时的主要因素在病理上和经济上是有相当影响。载热综合病症在PI-3病毒染下开始出现,通常在家畜运输或牧菌所引起的感染。例如巴斯德氏multocida莫类或巴斯德氏溶血菌类结果是产生载热综合症。由于体重减轻、昂贵治疗和延迟了供应市场所带来的每年经济损失估计在七千五百万美元。一种类似的病 毒所感染给羊,出现一种类似于载热综合症呼吸系统疾病。病毒疫苗包括活的减毒疫苗已成功使用了大约20年,例如由巴斯德氏multocida菌和巴德氏haemolytico菌中经化学变异菌种而获得的活的细菌疫苗已在美国4923545文件中(库塞拉)公开。予防付流感病毒的疫苗研究已是受到现行疫苗有限效力所限制,部份是由于来自存在的抗体或其它病毒疫苗抑制的影响。另外,采用活本文档来自技高网...

【技术保护点】
一个合成基因或DNA碎片特征在于:a)偏码牛Ⅲ类付流感病毒蛋白或其部分,及b)包括一双链DNA基因,该基因是病毒RNA基因编码在上述蛋白或其部分的一个复本。

【技术特征摘要】
1.一个合成基因或DNA碎片特征在于a)偏码牛Ⅲ类付流感病毒蛋白或其部分,及b)包括一双链DNA基因,该基因是病毒RNA基因编码在上述蛋白或其部分的一个复本。2.权项1合成基因,其编码牛Ⅲ类付流感病毒血细胞凝集素或其一部分。3.权项2合成基因的DNA系列,该系列开始具有一起始密码子,结束具有终端或停止密码子,并且该DNA系列包括图1所示的核苷酸系列或该系列部分。4.权项2合成基因的DNA系列,该系列编码一个具有图4示氨基酸系列一多肽或其一部分。5.权项1合成基因,其编码牛的Ⅲ类付流感结构融合蛋白或其的一部分。6.权项1双链DNA基因包括在一载体或质粒中。7.权项6的载体或质粒,在它们之中上述的DNA基因编码牛的Ⅲ类付流感血细胞凝集素,或其的一部分。8.权项6的载体或质粒,在它们之中上述的DNA基因编码牛的Ⅲ类付流感结构融合蛋白或其一部分。9.权项1的双链DNA基因包括在一宿主细胞中。10.权项9的宿主细胞,其中上述DNA基因编码牛的Ⅲ类付流感血细胞凝集素或其一部份。11.权项9宿主细胞,其中上述DNA基因编码牛的Ⅲ类付流感结构融合蛋白或其一部份。12.培养权项9上述的宿主细胞产生出合成的牛Ⅲ类付流感病毒蛋白或其一部分。13.权项12的蛋白或其一部份,其包括图4示氨基酸系列或其一部分。14.构成一种对于病毒载体蛋白的合成基因的方法,病毒载体蛋白被编码在位于未被分割的牛的类付流感病毒负链病基因组的基因的予期位置上。该方法包括有a)分离大量具有编码上述病毒蛋白基因的m RNA。b)用酶逆转录和低脱氧核苷酸初始分子由上述大量的m RNA构成双链的m RNA/c DNA杂化物。c)溶解或去掉上述杂化物的m RNA链。d)在步骤(c)之后由所保留下来的单链CDNA,用DNA多聚酶产生出基本上完整的双链CDNA分子,并e)使用单链特殊核酸酶修整上述基本完整的双链CDNA分子的单链端部位置。15.权项14方法,用其中上述合成基因插放到适宜的载体上,适合的宿主与重组载体一起被转录,并转录宿主克隆到所生成的包含上述病毒载体蛋白合成基因的库。16.权项14方法,其中在步骤(a)分离的大量m RNA经离心进一步分离多腺苷酸的m RNA。17.权项16方法,其中上述步骤(b)的少量的脱氧核苷酸聚合物分子是将杂化到聚腺苷酸的m RNA的diqo(dt)分子。18.权项14方法,其中,步骤(c)包含用碱基或核糖核酸溶解的m RNA链。19.权是项14方法,在此方法中步骤c包含用热变性作用由CDNA链分m RNA链。20.权项14方法,在此方法中,合成基因至少编码在上述病毒载体蛋白一个抗原部位上。21.权项14方法,在此方法中,上述病毒载体胥白是牛Ⅲ类付流感病毒的血细胞凝集素。22.权项21方法,此方...

【专利技术属性】
技术研发人员:约翰M赖斯
申请(专利权)人:WR格雷斯公司
类型:发明
国别省市:US[美国]

相关技术
    暂无相关专利
网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1
相关领域技术
  • 暂无相关专利