从金钱草中提取总黄酮的方法技术

本发明专利技术公开了从金钱草中提取总黄酮的方法，包括下述步骤:包括如下步骤：1)将金钱草清洗干净，晾干，用粉碎机粉碎，过筛；2)亚临界水萃取：将处理好的原料置于萃取釜中，加入相当于原料0.001重量份的羟乙基纤维素，将脱氧去离子水注入釜中，萃取温度150‑250℃，压力8‑10Mpa，萃取时间0.5‑1.0h，对金钱草进行萃取，萃取结束，泄压，萃取液流入收集罐中冷却至室温，得到萃取液；3)纯化：将步骤2)得到的萃取液浓缩，通过大孔树脂进行柱层析，50％v/v的乙醇洗脱，得到洗脱液，浓缩，干燥，得到成品。

Method for extracting total flavonoids from Herba Lysimachiae in

The invention discloses a method for extracting total flavonoids from chrysanthemum, which comprises the following steps: comprises the following steps: 1) will Jinqiancao clean, drying, crushing and sieving; 2) subcritical water extraction: the raw materials are placed in the extraction kettle handle, adding raw materials equivalent to 0.001 parts by weight of hydroxyethyl cellulose. The deoxidizing deionized water into the kettle, extraction temperature 150 250 DEG C, pressure 8 10Mpa, extraction time 0.5 1.0h, extraction of Jinqiancao after extraction, pressure relief, extraction liquid flows into the collecting tank is cooled to room temperature, get the extraction liquid; 3) purification: Step 2) extract to be concentrated and by column chromatography with macroporous resin 50%v/v, ethanol elution, obtained eluent, concentration, drying, finished.

【技术实现步骤摘要】
从金钱草中提取总黄酮的方法
本专利技术涉及生物
的提取方法，具体涉及从金钱草中提取总黄酮的方法。
技术介绍
金钱草，为报春花科植物过路黄(LysimachiachristinaeHance)的新鲜或干燥全草，主产于江苏、广东、四川、广西。此外，浙江、湖南、福建等地亦产。金钱草含有酚性成分、黄酮类、苷类、鞣质、挥发油、氨基酸、胆碱、甾醇、氯化钾、内酯类等成分。据文献报道，金钱草具排石的功效，主要用于治疗湿热黄疸、肝胆结石、尿路结石、细菌感染等疾病。现有技术对黄酮的提取，主要采用超声波法提取黄酮类物质，它的原理是超声的空化作用对细胞膜的破坏，有助于黄酮类化合物的释放与溶出，超声波使提取液不断震荡，促进溶质扩散，超声波产生的震荡作用还可促进细胞内物质的释放、扩散及溶解，有利于提高提取物的提取率。同时超声波的热效应使水温基本在57℃，对原料有水浴作用。因此，超声波法相对于加热提取，缩短了提取时间，提高了有效成分的提出率，原料的利用率。有大量文献报道了从葛根、水芹、苦荞麦、银杏叶等中提取黄酮类物质。现有的萃取方法，在挥发油方面的应用水蒸气蒸馏法和有机溶剂萃取法是目前应用最广泛的传统植物挥发油或有效成分的萃取方法，但操作时间长、能耗高、选择性差、有机溶剂易残留等缺陷使得这两种传统方法的工业化、规模化应用受到了很大限制。SFE技术以其无毒、残留量低、有效成分不易被破坏等优点备受称赞。但由于常用溶剂C02具有非极性和相对分子质量小的特点，使得对某些物质的溶解度较低、选择性不高而使提取效果并不理想，实际操作中往往要通过添加夹带剂来提高萃取率，萃取结束后，必须设法除去挥发油中的夹带剂，这势必导致工艺的复杂及易挥发成分的损失及氧化；另外由于水不溶于C02，因而超临界C02萃取过程常需将原料预先干燥，额外增加了成本，也使芳香性化合物油有所损失。此外，从植物中提取挥发油时，由于超临界C02不仅对挥发油而且对低极性的化合物如角质层中的蜡质、脂肪酸、有色物质及树脂也有相似的溶解性，提取过程中这些物质也会被提取出来，虽然采用复杂的体系也可以得到较纯的挥发油，但操作繁琐且对设备的要求也更为苛刻。水的临界压力及临界温度分别为22.1MPa和374℃，在f>374℃，p>22.1MPa条件下，水的介电常数为5-15。在比374.2℃和22.1MPa稍微低一些的低温压下成液体状态的水称为“亚临界水”。将水加热至沸点以上，临界点以下，并控制系统压力使水保持为液态，这种状态的水被称为亚临界水，在文献中也有称它为超热水和高温水。通常条件下，水是极性化合物。在505kPa压力下，随温度升高(50-300℃)，其介电常数由70减小至1，也就是说其性质由强极性渐变为非极性，可将溶质按极性由高到低萃取出来。在温度和压力都较高的条件下、水的极性降低，可以萃取非极性化合物；温度和压力都较低的条件下，水的极性提高，可以萃取极性化合物。在实际萃取过程中，由于压力对介电常数的影响不如温度的影响大，所以主要通过调节温度来控制水的介电常数。由于是不使用酸、碱和催化剂的水在高热高压下的处理技术，因此亚临界水的提取方法被称之为“绿色的处理法”。此外，提取可以在数秒钟到数分钟的短时间内完成，故而具有可以进行连续处理的优点。亚临界水萃取技术在天然产物领域的活性成分的提取上很有前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供从金钱草中提取总黄酮的方法，具有工艺简单，适合生产，时间短等优点。本专利技术通过以下技术方案实现。从金钱草中提取总黄酮的方法，具体包括如下步骤：1)将金钱草清洗干净，晾干，用粉碎机粉碎，过筛；2)亚临界水萃取：将处理好的原料置于萃取釜中，加入相当于原料0.001重量份的羟乙基纤维素，将脱氧去离子水注入釜中，萃取温度150-250℃，压力8-10Mpa，萃取时间0.5-1.0h，对金钱草进行萃取，萃取结束，泄压，萃取液流入收集罐中冷却至室温，得到萃取液；3)纯化：将步骤2)得到的萃取液浓缩，通过大孔树脂进行柱层析，50％(v/v)的乙醇洗脱，得到洗脱液，浓缩，干燥，得到成品。本专利技术步骤1)所述的过筛，优选过20-80目筛。步骤2)所述的将脱氧去离子水注入釜中，优选将脱氧去离子水以小于10mL/min的流速注入釜中，料液比为1:2-3。步骤3)所述的浓缩，优选温度控制≤50℃，真空控制在-0.08±0.01MPa，浓缩至0.95-1.05g/ml。步骤3)所述的大孔树脂，树脂型号优选D101、DM130和AB-8。步骤3)所述的通过大孔树脂进行柱层析，优选湿法装柱，上样浓度8.0mg/mL，上样量为3BV，洗脱时，先用水洗至流出液近无色，随后用6BV的50％(v/v)乙醇洗脱，收集洗脱液。与现有技术相比，本专利技术的优点：1、现有技术中，无论是超声波法提取、加热提取、酶解提取等，灰分比较高，一般在3-5％左右，而现在很多欧美客户在要求高含量的同时，还要求灰分在3％以下，而现有的工艺、传统的工艺无法直接生产出这样规格的产品。而本专利技术的方法得到的总黄酮，含量在99.0％以上、灰分在1.5％以下。2、本专利技术在亚临界水萃取时，在物料中加入一定量的羟乙基纤维素是关键。在前期的实验中发现，如果没有添加羟乙基纤维素，直接采用亚临界水萃取，得到的最终产品灰分(3％左右)和现有技术相比没有差异性，而加入了羟乙基纤维素，则可以显著降低最终产品灰分(1.5％以下)，分析是因为，亚临界水萃取过程中萃取量是随着萃取温度和萃取时间的增加而增加，萃取产物的溶出，在活性成分溶出的同时，其他成分的溶出也会有所增加，而随着羟乙基纤维素的加入，对萃取的物料形成了一定程度的包裹，可以在活性成分的溶出和防止其他杂质的溶出之间达到一个平衡。3、现有提取方法后的纯化，树脂的重复使用，一般在3-4次，总黄酮的回收率会下降，导致含量下降，需要再生，而使用本专利技术的方法，树脂可以重复使用8次以上，才需再生，节约了大量工时和成本。具体实施方式下面以实施例对本专利技术作进一步说明，但本专利技术并不局限于这些实施例。实施例1：从金钱草中提取总黄酮的方法，具体包括如下步骤：1)将金钱草清洗干净，晾干，用粉碎机粉碎，过20目筛；2)亚临界水萃取：将处理好的原料置于萃取釜中，加入相当于原料0.001重量份的羟乙基纤维素，将脱氧去离子水以小于10mL/min的流速注入釜中，萃取温度150-250℃，压力8-10Mpa，萃取时间0.5h，对金钱草进行萃取，萃取结束，泄压，萃取液流入收集罐中冷却至室温，得到萃取液；3)纯化：将步骤2)得到的萃取液浓缩，温度控制≤50℃，真空控制在-0.08±0.01MPa，浓缩至0.95-1.05g/ml，通过DM130大孔树脂进行柱层析，上样浓度8.0mg/mL，上样量为3BV，洗脱时，先用水洗至流出液近无色，随后用6BV的50％(v/v)乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，得到成品。实施例2：从金钱草中提取总黄酮的方法，具体包括如下步骤：1)将金钱草清洗干净，晾干，用粉碎机粉碎，过40目筛；2)亚临界水萃取：将处理好的原料置于萃取釜中，加入相当于原料0.001重量份的羟乙基纤维素，将脱氧去离子水以小于10mL/min的流速注入釜中，萃取温度150-250℃，压力8-10Mpa，萃取本文档来自技高网...

【技术保护点】
从金钱草中提取总黄酮的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将金钱草清洗干净，晾干，用粉碎机粉碎，过筛；2)亚临界水萃取：将处理好的原料置于萃取釜中，加入相当于原料0.001重量份的羟乙基纤维素，将脱氧去离子水注入釜中，萃取温度150‑250℃，压力8‑10Mpa，萃取时间0.5‑1.0h，对金钱草进行萃取，萃取结束，泄压，萃取液流入收集罐中冷却至室温，得到萃取液；3)纯化：将步骤2)得到的萃取液浓缩，通过大孔树脂进行柱层析，50％v/v的乙醇洗脱，得到洗脱液，浓缩，干燥，得到成品。

【技术特征摘要】
1.从金钱草中提取总黄酮的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将金钱草清洗干净，晾干，用粉碎机粉碎，过筛；2)亚临界水萃取：将处理好的原料置于萃取釜中，加入相当于原料0.001重量份的羟乙基纤维素，将脱氧去离子水注入釜中，萃取温度150-250℃，压力8-10Mpa，萃取时间0.5-1.0h，对金钱草进行萃取，萃取结束，泄压，萃取液流入收集罐中冷却至室温，得到萃取液；3)纯化：将步骤2)得到的萃取液浓缩，通过大孔树脂进行柱层析，50％v/v的乙醇洗脱，得到洗脱液，浓缩，干燥，得到成品。2.根据权利要求1所述的从金钱草中提取总黄酮的方法，其特征在于：步骤1)所述的过筛，是过20-80目筛。3.根据权利要求1所述的从金钱草中提取总黄酮的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢冬养，
申请(专利权)人：桂林纽泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45