产生重组多肽的方法技术

本发明专利技术涉及用于产生表达目的重组多肽的经转化真核宿主细胞的方法，该方法包括将下列物质导入真核宿主细胞：（ａ）第一多核苷酸载体，其包含（ｉ）编码目的重组多肽的第一核苷酸序列；以及（ｉｉ）编码选择性标记的第二核苷酸序列，其中当宿主细胞与选择性试剂接触时该第二核苷酸序列被扩增；以及（ｂ）第二多核苷酸载体，其核苷酸序列与第一多核苷酸载体基本相同，不同之处在于第二核苷酸序列替换为编码不同选择性标记的第三核苷酸序列；第一多核苷酸载体和第二多核苷酸载体被稳定整合入宿主细胞基因组中。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于产生表达重组多肽的宿主细胞的方法，所述重组多肽如人促红细胞生成素，以及涉及用于产生该多肽的方法。特别是，本专利技术涉及包含多种选择性标记的双载体表达系统和应用该系统的方法。
技术介绍
红细胞生成的调控主要由一种糖蛋白激素即促红细胞生成素(Epo)完成，该激素于1977年发现。当时，Epo的分离和纯化由于起始材料的相对缺乏而受到限制，所述起始材料为再生障碍性贫血患者的尿液。仅可获得亚微克数量的纯化激素用于研究。在19世纪70年代末，应用亲和柱子中以琼脂糖固定的凝集素首次进行了纯化尝试。麦芽和植物凝集素结合促红细胞生成素，且尿的粗制备物中的Epo可浓缩达100倍。19世纪80年代初期，已经测定并克隆了人促红细胞生成素的DNA序列。促红细胞生成素为一单链糖蛋白，分子量约30到34kDa。该蛋白含有四个半胱氨酸残基，并分别在Cys7、Cys161以及Cys29、Cys33间形成两个链内二硫键。已显示Cys7和Cys161间形成的二硫键对生物活性至关重要。促红细胞生成素为高度糖基化蛋白，其分子量中约35到40％由碳水化合物组成。尿液制备物间碳水化合物的量存在差异，因此该不均本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于产生表达目的重组多肽的经转化真核宿主细胞的方法，该方法包括将下列载体导入真核宿主细胞：（ａ）第一多核苷酸载体，其包含（ｉ）编码目的重组多肽的第一核苷酸序列，以及（ｉｉ）编码选择性标记的第二核苷酸序列，其中当宿主细胞与选择性试剂接 触时所述第二核苷酸序列被扩增，以及（ｂ）第二多核苷酸载体，其具有的核苷酸序列与第一多核苷酸载体基本相同，不同之处在于将第二核苷酸序列替换为编码不同选择性标记的第三核苷酸序列；第一多核苷酸载体和第二多核苷酸载体被整合入宿主细胞 的基因组中。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：K肖尔根多费，J温迪施，R库纳，F温特路戈尔，
申请(专利权)人：桑多斯有限公司，
类型：发明
国别省市：AT[奥地利]