细胞培养方法技术

本发明专利技术提供了一种生产目的重组多肽的方法，该方法包括：ａ）提供一种宿主细胞，该细胞含有编码目的重组多肽并指导目的重组多肽在宿主细胞中表达的核苷酸序列；ｂ）提供一种无血清培养基，该培养基（ｉ）含有水、植物来源的胨、重量摩尔渗透压浓度调节剂、缓冲剂、能源、至少一种氨基酸、脂源或前体、铁源、非铁金属离子和任选地一种或多种维生素和辅因子；和（ｉｉ）不含有任何全长多肽；和ｃ）在允许目的重组多肽表达的条件下在培养基中培养所述宿主细胞。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及使用重组细胞系划算地生产重组治疗性糖蛋白如人红细胞生成素(Epo)的方法。
技术介绍
红细胞生成素(Epo)是调节红细胞祖细胞(erythroid progenitor cell)增殖和分化以及循环血红细胞的生理水平维持的主要激素。在胎儿中，Epo主要在肝脏中产生，胎儿出生后Epo的约90％的生产转移到肾。当Epo水平由于慢性或急性肾衰竭(例如在癌症病人中)而降低时，必须从外部施用Epo以防止贫血发展。自从发现Epo基因并将其在啮齿类细胞中表达以来，已经可以得到具有治疗活性的人红细胞生成素。人Epo基因编码一27个氨基酸的信号肽和一理论分子量为18399道尔顿的有166个氨基酸的蛋白质。成熟蛋白通常在N末端有一个氨基酸缺失，长度为165个氨基酸。信号序列将肽导向参与正确糖基化的细胞区室，形成具有三个N糖基化和一个O糖基化位点的成熟蛋白。糖部分构成总分子量的约40％，对Epo的完整生物学活性是必须的。一些研究已经表明末端唾液酸残基的数目对体内半衰期具有正影响，虽然体外活性(即对受体的结合)在无糖基化或者部分糖基化形式下是最高的(Takeuchi和Kobata，1991(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生产目的重组多肽的方法，该方法包括：ａ）提供一种转化的真核宿主细胞，该细胞含有编码目的重组多肽并指导目的重组多肽在宿主细胞中表达的核苷酸序列；ｂ）提供一种无血清培养基，该培养基（ｉ）含有水、植物来源的胨、重量摩尔渗透压浓 度调节剂、缓冲剂、能源、氨基酸、脂源或前体，铁源、非铁金属离子和一种或多种维生素和辅因子；且（ｉｉ）不含有任何全长多肽；和ｃ）在允许目的重组多肽表达的条件下在所述培养基中培养转化的真核宿主细胞。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：S曾，FM勃格纳，R库纳，D米勒，F温特路戈尔，
申请(专利权)人：桑多斯有限公司，
类型：发明
国别省市：AT[奥地利]