安全连续封闭式细胞培养、病毒生产和灭活的方法技术

一种生物工程技术领域的安全连续封闭式细胞培养、病毒生产／灭活的方法，步骤为：１）接种细胞，悬浮培养，实现细胞的初级培养；２）流加新鲜培养基，同时泵出细胞悬浮液，维持细胞培养生物反应器稳定，保证细胞在反应器中的停留时间内扩增，实现细胞的连续培养；３）泵出细胞悬浮液至含有病毒的病毒增殖反应器，实现病毒在细胞中的初级感染增殖；４）随着细胞悬浮液的流入和含病毒上清液的流出，在维持整个系统动态平衡的过程中实现病毒的连续培养；５）收集从病毒增殖反应器中泵出的病毒上清液，灭活病毒，实现连续封闭培养细胞和灭活病毒。本发明专利技术便于自动化控制，标准化生产，且降低了污染机会和提高了生产安全系数。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生物工程
的方法，具体地讲，是一种。
技术介绍
利用细胞来生产病毒，主要有两种方式(1)细胞和病毒种子一同培养，在细胞增殖的过程中，复制病毒，达到大量生产病毒的目的，这是模拟生物体内自然生存状态的一种方法；(2)将细胞和病毒的扩增过程分开，即先大量扩增细胞，达到一定程度后再加入病毒种子，维持细胞的活性，通过子代病毒在细胞间的不断感染和复制，来达到大量生产病毒的目的。随着对病毒研究的不断深入，发现细胞扩增过程和病毒在细胞中增殖过程的最优化培养条件有一定的差异，因此，目前主要采用细胞培养过程和病毒在细胞中增殖过程分开的方法制备病毒。在生产病毒时，大量、高密度细胞的培养是产生高滴度病毒的前提，间歇培养和补料培养不能够充分提供足够的营养物质和及时去除有毒的代谢产物，已逐渐被灌注培养的方法所替代。灌流培养是一种在连续动态监测条件下的培养过程，可及时地按需要加入新鲜培养基同时抽出含细胞代谢产物的消耗性培养基，使细胞始终保持在一种相对稳定，有充足营养的生长环境中生长，在细胞生长速度、细胞密度以及细胞形态方面都有良好的效果，因而适用于高密度细胞培养和大规模病毒生产。经对现有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种安全连续封闭式细胞培养、病毒生产／灭活的方法，其特征在于，包含以下步骤：１）向细胞培养生物反应器中接种１～２×１０↑［５］ｃｅｌｌｓ／ｍＬ的细胞，悬浮培养，扩增至０．２～１．０×１０↑［７］ｃｅｌｌｓ／ｍＬ，对于微载体悬浮培养时 ，微载体上８０～９０％汇满细胞，实现细胞的初级培养；２）根据培养细胞的生长特性和生物反应器体积的大小，以０．３～１．０倍反应器工作体积／天的流速流加新鲜培养基，同时以同样流速泵出细胞悬浮液，维持细胞培养生物反应器稳定的同时，保证细胞 在反应器中的停留时间内扩增至０．２～１．０×１０↑［７］ｃｅｌｌｓ／ｍＬ，对于微载体悬浮培养时，微载体上...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：罗凤山，齐瀚实，陈彦田，孙海英，耿涛，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]