一种快速检测纺织品中β‑溶血性链球菌的方法技术
A method for rapid detection of textiles in beta hemolytic streptococci
The invention discloses a rapid detection of textiles.
【技术实现步骤摘要】
一种快速检测纺织品中β-溶血性链球菌的方法
本专利技术涉及一种β-溶血性链球菌的检测方法，具体涉及一种快速检测纺织品中β-溶血性链球菌的方法。
技术介绍
β-溶血性链球菌(β-hemolyticstreptococcus)在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中。在链球菌属中与环境卫生和人身安全有关的链球菌主要是β-溶血性链球菌，按其C抗原，可分为18个组，对人致病的大多属于A组、B组、C组和G组。β-溶血性链球菌对人的毒力、侵袭力较强，能产生多种胞外酶和外毒素，引起各种化脓性疾病、肺炎、伤口感染和败血症等。可通过直接接触、空气飞沫或皮肤、粘膜伤口感染传播，通常引起皮肤和皮下组织的化脓性炎症及呼吸道感染，还可引起猩红热、流行性咽炎、急性扁桃体炎和脓疱疮，甚至可引起严重的侵袭性感染如败血症、坏死性筋膜炎和链球菌中毒休克综合征。β-溶血性链球菌属革兰氏阳性球菌，无芽胞无鞭毛，血平板培养后形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径呈0.5mm～0.75mm的细小菌落，周围形成一个2mm～4mm宽、界限分明、完全透明的无色溶血环，...
【技术保护点】
一种快速检测纺织品中β‑溶血性链球菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、免疫磁珠的制备取0.1mL磁珠液于盛有1.0mL PBST缓冲液的离心管中，混匀，3000r/min离心2min，弃液体；重复上述步骤清洗3次，加入1.0mL PBST缓冲液使磁珠重悬其中；向上述重悬液中加入0.1mLβ‑溶血性链球菌免疫血清，放摇床，室温轻缓旋转振荡3h；用1.0mL 1×洗液清洗5次后，加入0.5mL重悬液，于4℃保存备用；步骤二、RPA引物及探针设计于NCBI数据库中下载编码HtrA的靶基因序列，采用CLUSTAL X软件进行序列比对，在HtrA基因中找到了一段仅保守于β‑溶...
【技术特征摘要】
1.一种快速检测纺织品中β-溶血性链球菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、免疫磁珠的制备取0.1mL磁珠液于盛有1.0mLPBST缓冲液的离心管中，混匀，3000r/min离心2min，弃液体；重复上述步骤清洗3次，加入1.0mLPBST缓冲液使磁珠重悬其中；向上述重悬液中加入0.1mLβ-溶血性链球菌免疫血清，放摇床，室温轻缓旋转振荡3h；用1.0mL1×洗液清洗5次后，加入0.5mL重悬液，于4℃保存备用；步骤二、RPA引物及探针设计于NCBI数据库中下载编码HtrA的靶基因序列，采用CLUSTALX软件进行序列比对，在HtrA基因中找到了一段仅保守于β-溶血性链球菌的A、B、C、G组的特异性序列，并在此序列中设计一套以RPA技术为核心技术的特异性引物及探针；步骤三、β-型溶血性链球菌的免疫磁珠富集制备检样悬液，免疫磁珠富集，得带有β-溶血性链球菌的磁珠悬液；步骤四、RPA鉴定4.1)DNA模板的制备取100μLβ-溶血性链球菌磁珠悬液于0.5mL离心管中，100℃水浴10min，5000r/min离心5min，取上清液，-20℃保存备用；4.2)RPA扩增反应4.2.1)根据样本数量设定所需要的RPA反应管数n(n＝1管空白对照+1管阴性对照+1管阳性对照+样本数)；向含有冻干酶粉的0.2mLTwistAmpExoRPA反应管中依次加入表1中各成分，充分混匀后2000r/min离心10sec，将反应试管放在RPA便携式荧光检测仪(Twista)中进行实时荧光扩增，37℃恒温反应20min；表1反应体系RPA试剂1管试验用量n管试验用量水化缓冲液29.5μL29.5×nμLRP...
【专利技术属性】
技术研发人员：李轲，郭会清，禹建鹰，张淑霞，郭华麟，连素梅，徐超，苗丽，
申请(专利权)人：郭会清，
类型：发明
国别省市：河南,41
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