北冬虫夏草菌种培养方法技术

一种可以代替冬虫夏草入药、能代替天然冬虫夏草药源的北冬虫夏草菌种培养方法。技术方案是包括下列步骤：（１）母种制备；（２）母种转原种和栽培种；（３）悬浮液菌种或／液体菌种的制备；（４）北冬虫夏草菌种的人工栽培。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于领域，尤其是一种。
技术介绍
冬虫夏草是我国特有的一类珍贵药材，具有极高的医疗保健价值加经济价值，在国内外享有盛誉，素有“东方传奇式珍宝”之美称，是我国传统的出口创汇商品，所以，冬虫夏草是我国传统医药宝库中的一朵奇葩。唯有冬虫夏草的医疗保健价值及经济价值最高，所以在国内外真菌界、医药界、食品界、生物界等多年来致力于研究开发的重点。冬虫夏草具有抗疲劳、耐缺氧、抗衰老、抗肿瘤以及提高人体免疫功能等多种医疗保健作用。对人体可起到滋肺补肾、止血化痰、平喘、扩张气管、镇静抗各类细菌、降血压等作用。冬虫夏草中含有虫草素、冲草酸多种人体必需氨基酸，有益微量元素的维生素、虫草多糖、超氧化物歧化酶(SOD)等多种营养物质和抗癌抗衰老的活性物质，主要成份之一虫草素是一种具有抗生作用和抑制细胞分裂作用的物质，能抑制癌细胞的增生。国内外同位素检测技术对冬虫夏草研究证明冬虫夏草中虫草素和冲草酸不仅具有补肾壮阳、益精定喘的作用，而且能明显地对抗细胞衰老。冬虫夏草生长在我国西部与西南部的高寒地区，生长环境特殊，资源有限，随着多年来国内外的深入研究，进一步认识到冬虫夏草对人体的医疗和滋补研究，进一步认识到冬虫夏草对人体的医疗和滋补所具有的重要价值，需求不断增加，由于天然冬虫夏草资源本就不多，加上虫草资源数量锐减，产量不断下降，供求矛盾日益加剧，造成市场供求脱节，价格昂贵，针对这种情况，投入对冬虫夏草的人工引种驯化，栽培遗传及应用等方面的研究工作之中，作为一种有发展潜力的新技术新工艺，开辟药源生物发酵技术确实具有重大价值和发展前途。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可以代替冬虫夏草入药、能代替天然冬虫夏草药源的。本专利技术的技术方案是，包括下列步骤(1)母种制备；(2)母种转原种和栽培种；(3)悬浮液菌种或/液体菌种的制备；(4)北冬虫夏草菌种的人工栽培。所述的母种制备包括(1)制作培养基；(2)试管母种制备；(3)试管母种的扩大培养；(4)出草试验；(5)组织分离制作母种。所述的母种转原种和栽培种包括(1)培养基的配制、(2)母种转管扩大。所述的悬浮液菌种制备包括(1)培养基配制、(2)灭菌、(3)接种培养。所述的液体菌种制作包括(1)液体菌种培养基配方、(2)接种培养。所述的北冬虫夏草菌种人工栽培包括(1)按培养基配方制作培养基，培养基配方为下列五种之一①炒大米93％，葡萄糖2％，蛋白胨2％，柠檬酸0.29％，硫酸镁0.2％，蚕蛹粉2.5％，维生素B10.01％；②高粱米85％，蚕蛹粉10％，蔗糖1.99％，蛋白胨2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.1％，酵母粉0.8％，另加维生素B10.01％；③小米95％，葡萄糖3.49％，酵母膏1.2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.2％，另加维生素B10.01％；④高粱米45％，玉米渣40％，小米10％，蔗糖2％，蛋白胨2％，酵母粉0.8％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.1％；⑤大米50％，麦麸25％，玉米粉9.99％，葡萄糖(或蔗糖)2％，木屑10％，蚕蛹粉2％，尿素0.1％，硫酸镁0.9％，另加维生素B10.01％；(2)拌料装瓶；(3)灭菌；(4)接种；(5)培养室培养；(6)后期管理；(7)采收。所述的母种制备中，制作培养基配方为两种之一(1)葡萄糖20克、琼脂20克、去皮土豆200克(煮汁)、水1000毫克(PDA培养基)；(2)燕麦片30克、琼脂20克、水1000毫升；试管母种扩大培养基配方为下列三种之一 (1)蛋白胨10克，葡萄糖10克，含脂蚕蛹10克，全脂奶粉10克，磷酸二氢钾15克，琼脂20克，水1000毫升；(2)葡萄糖10克，蛋白胨10克，酵母膏1克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，生长素5毫升，水1000毫升；(3)去皮土豆200克(煮汁)，葡萄糖20克(或蔗糖40克)，磷酸二氢钾1.5克，琼脂20克，维生素B110克，增长灵0.5克，水1000毫升。母种转原种和栽培种的培养基为下列之一(1)蔗糖10克，蛋白胨10克，琼脂15克，硫酸镁0.5克，维生素B15片1000毫升；(2)葡萄糖20克，琼脂20克，土豆200克(煮汁)，维生素B13片，蛋白胨5克，磷酸二氢钾(试剂)0.5克。悬浮液菌种的培养基为下列之一(1)磷酸二氢钾3克，食盐3克，维生素B15片，葡糖糖15克，硫酸镁0.5克，味精0.2克，黄豆粉15克，水1000毫升；(2)玉米粉12克，酵母粉3克，磷酸二氢钾1克，葡萄糖22克，黄豆粉10克，维生素B1180-200毫，硫酸镁0.5克，水1000毫升；(3)葡糖糖35克，蛋白胨25克，磷酸二氢钾1克，食盐2.5克，维生素B13片。液体菌种制备的培养基为下列之一(1)蛋白胨12克、酵母粉25克、玉米粉10克、黄豆粉10克、磷酸二氢钾0.5克、硫酸镁0.3克、味精0.1克、葡萄糖20克、食盐0.3克、维生素B1100毫克、水1000毫升；(2)葡萄糖10克、磷酸二氢钾0.5克、硫酸镁1克、氯化钙1克、氨基酸复合粉5克、去皮土豆250克(煮汁)、蝉蛹20克、水1000毫升；(3)磷酸二氢钾0.05克、维生素B11150毫克、蛋白胨15克、葡萄糖25克、酵母粉10克、硫酸镁0.05克、食盐8克、水1000毫升。本专利技术的效果是通过本专利技术的，能够增加冬虫夏草的产量，从根本上降低冬虫夏草的价格，为广大患者减轻疾病的痛苦发挥作用，为我国传统医药宝库中又增加另一朵奇葩。下面结合具体实施方式对本专利技术做进一步的说明。具体实施例方式，包括下列步骤一、母种制备母种制备采用孢子分离法，属于有性繁殖法。它是在无菌条件下利用菌类子实体自行弹射孢子的原理，使孢子散落在人工培养基上，通过培养，得到原始菌系体，然后再移接入斜面试管进行培养。具体包括下列步骤(一)制作培养基培养基可以选择下列两种配方进行制作1、葡萄糖20克、琼脂20克、去皮土豆200克(煮汁)、水1000毫克(PDA培养基)2、燕麦片30克、琼脂20克、水1000毫升配制方法燕麦片加水，在沸腾水浴中加热1小时用两层纱布滤后加水补足到配制量，加琼脂深化后装入培养器灭菌即成。(二)试管母种制备1、一直径25厘米左右的搪瓷盆，上衬4层纱布，在纱布上放一中号培养器(器内装有培养基)，并在器内放一不锈钢三角架，供插虫草子座用，在培养器上方加盖一个玻璃钟罩，连同瓷盘一起用纱布包好，在147千帕压力下灭菌1小时，冷却后备用。2、选取新鲜、优质、成熟、尚未散发孢子的正常虫草子座用清水冲洗干净、晾干。3、将上述灭过菌的整套装置去掉纱布，连同虫草子实体0.1％升汞液(或75％酒精)无菌水等一起放入接种箱内严格消毒，消毒之后，在无菌条件下，用0.1％升汞液(或75％酒精)对虫草子实体表面消毒，并用无菌水清洗表面残留药液，然后拆开钟罩，将虫草子实体插放于三角架上，再盖好钟罩。用纱布将钟罩底部周围塞好，并往纱布上倒0.1％升汞水，最后将整套孢子采集装置从接种箱取出，放入恒温箱中(25摄氏度左右)，使孢子下落，待培养基上有虫草菌落出现时，在无菌条件下挑取单个或多个菌落移接至试管斜面培养基上培养(15摄氏度-20摄氏度恒温条件下避光培养)培养成功后，即可移接、扩制。(三)、试管母种的扩大培养经用分离方法制成试管母种后，还本文档来自技高网...

【技术保护点】
北冬虫夏草菌种培养方法，其特征是包括下列步骤：（１）母种制备；（２）母种转原种和栽培种；（３）悬浮液菌种或／液体菌种的制备；（４）北冬虫夏草菌种的人工栽培。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：岳汪运，周永祥，王志荣，
申请(专利权)人：周永祥，岳汪运，王志荣，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]