具有神经元祖细胞特性的细胞制造技术

公开了具有神经元祖细胞特性的细胞，以及通过调节与骨髓附着干细胞的神经胶质转分化作用相关的在骨髓附着干细胞中的细胞通路而从骨髓附着干细胞获得其的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有神经元祖细胞特性的细胞，以及通过调节与骨髓附着干细胞的神经胶质转分化作用相关的在骨髓附着干细胞中的细胞通路而从骨髓附着干细胞获得其的方法。
技术介绍
中枢神经系统(CNS)或周围神经系统(PNS)疾病的治疗及研究上的局限是常规地认为末端分化的神经元被很大地限制了它们增殖的能力。因此，需要移植末端分化的神经元的CNS或PNS疾病的任何治疗都是难以完成的。为了克服该困难提出的一个方法是人工培养大量具有神经元祖细胞特性的有丝分裂的细胞(″CPCs″)。该细胞理论上可在体内分化成在CNS和/或PNS疾病的治疗中起作用的神经元。可选地，CPCs可在体外分化成神经元然后移植给患者。然而，这些CPCs很稀有并且很难从供体上分离开。因此，常规地，研究者已尝试从处理过的胚胎及胎儿干细胞(下文中全部称为“胚胎干细胞”)中获得CPCs。胚胎干细胞，作为多能细胞，已经用于产生多种多样的组织类型，并且可以是CPCs的来源。I.Weissman，Stem cellsunits of development，unitsof regeneration，and units in evolution(Review).Cell 100，157-168(2000)。然而，胚胎干细胞的使用引起了大量伦理方面的关注，并因此成为不赞成干细胞用于CPCs的生产的看法的根源。另外，胚胎干细胞可致瘤，这引起了人们对能潜在导致胚胎干细胞递送入患者中的任何移植过程的安全性问题的关注，例如从胚胎干细胞形成CPC移植物。一些研究者已尝试利用其他类型的干细胞，例如在CPCs的形成中的间充质干细胞。Prockop等人在2003年1月2日提交的题为“Directed in vitrodifferentiation of marrow stromal cells into neural cell progenitors”的美国专利申请20030003090公开了，在人间充质干细胞中经与0.5mM IBMX和1mM dbcAMP培育后可增加NSE和波形蛋白的表达水平。NSE与波形蛋白mRNAs的这种增加与神经细胞在培养中的表现相一致。然而，Prockop等报道，这并没有改变MAP1B或TuJ-1的表达水平。既然，NSE、MAP1B与TuJ-1都是早期神经元特征性的标记物，并且波形蛋白是神经胶质的早期标记物，因而Prockop等提出，hMSCs在体外能转分化成神经元或神经胶质的一些早期祖先。然而，Prockop的早期祖细胞可能不符合应用的要求，因为它们看上去具有非常不成熟的神经元表型，其临床疗效仍不太了解。因此，例如，对于在CNS或PNS疾病的研究和治疗中的使用，缺乏常规可利用的以及合适的CPCs的来源。进一步地，缺乏可以用于以合适的方式产生这些适合使用的CPCs的方法。因此，需要能够克服这些问题的方法和组合物。专利技术简介一方面，本专利技术涉及一种从包含骨髓附着干细胞的材料中制备具有神经元祖细胞特性的细胞的方法，该方法包括调节与骨髓附着干细胞的神经胶质转分化作用相关的在骨髓附着干细胞中的细胞通路；其中充分调节该细胞通路以诱导至少一部分骨髓附着干细胞转分化成具有神经元祖细胞特性的细胞；条件是所述调节不包括用缺刻蛋白基因胞内域(notch intracel lular domain)转染骨髓附着干细胞。另一方面，本专利技术涉及一种用于制备具有神经元祖细胞特性的细胞的方法，包括用神经胶质调节剂来培育骨髓附着干细胞，所述神经胶质调节剂的量足以诱导至少一部分的骨髓附着干细胞转分化成具有神经元祖细胞特性的细胞；条件是，这种相互作用不包括用缺刻蛋白基因胞内域转染骨髓附着干细胞。
技术实现思路
专利技术人出乎意料地惊奇地发现，上述的问题以及局限可通过实施这里公开的专利技术进行克服。本专利技术提出了通过调节与MASCs的神经胶质转分化作用相关的在MASCs中的细胞通路来从骨髓附着干细胞(MASCs)中产生CPCs。施行和使用本专利技术的方法将在这里进行描述。本文所引用的所有参考文献在此以其整体并且对于所有目的以相同的程度进行引用作为参考，就好像每个单独的出版物或专利或专利申请特定和单独地被指明对于所有目的以其整体进行引用作为参考。这里对参考文献的讨论仅仅只希望将这些参考文献的作者的主张概括在一起，并且不承认任何引用的参考文献构成了现有技术。申请人保留对所引用参考文献的准确性和相关性提出置疑的权利。具有神经元祖细胞特性的细胞(“CPCs”)被定义为，为了本专利技术的目的，是这样的细胞，即其是有丝分裂的，表达巢蛋白以及特异于神经的前体/神经的祖细胞的其他细胞标记物，并且来源于MASCs。CPCs能够分化成神经元、神经胶质、和少突神经胶质细胞以及上述任一的前体。CPCs可以依据这里公开的方法从MASCs获得。在实施例中，人CPCs是EfnB2+、CD90-、以及PDGF受体β-的。这些标记物可在依据本专利技术的MASCs的神经胶质转分化作用之后，用来通过采用FACS从MASCs中分离CPCs。操作CPCs的适宜的方法是常规公知的，包括，例如，Goldman等在美国专利申请20020012903中公开的那些方法。通常，依据本专利技术的CPCs可通过调节与MASCs的神经胶质转分化作用相关的在MASCs中的细胞通路来制得，充分调节该细胞通路以诱导至少一部分MASCs转分化成CPCs。多种多样的调节方法在本专利技术的实践中是有用的。这些方法包括，但不限于，如果离体生长时，细胞生长的培养基及条件的改变；如果在体内生长时，MASCs所存在的组织环境的改动；或用神经胶质调节剂培育MASCs。调节的精确方式并不影响本专利技术的目的，只要MASCs的神经胶质转分化能得到有效地调节，因此允许MASCs分化成CPCs。通常，与MASCs的神经胶质转分化作用相关的在MASCs中的细胞通路的调节发生在适合维持任意MASCs或CPCs处于有丝分裂和有生存力状态的条件下。这些条件对于任一本领域普通技术人员来说是已知的，以及可以找到，例如，在M.Kallos等人，Large-scale expansion ofmammalian neural stem cellsa review.Med Biol Eng Comput.2003 May；41(3)271-82中。对于细胞培养以及体内环境的适宜条件以及技术也可以在该文献中的别处找到。本专利技术的优选的实施方案中，与MASCs的神经胶质转分化作用相关的在MASCs中的细胞通路的调节，可通过使用神经胶质调节剂培育MASCs来完成。在更优选的实施方案中，与MASCs的神经胶质转分化作用相关的在MASCs中的细胞通路的调节，可通过用神经胶质调节剂培育MASCs来完成，所述神经胶质调节剂的量足以诱导至少一部分MASCs转分化成CPCs。本专利技术的上下文中的培育可包括在神经胶质调节剂存在下培养MASCs，目的是神经胶质调节剂与MASC细胞表面受体相互作用，或被转运到MASCs的内部而与内部的细胞通路相互作用。这种转运可能是被动的，例如扩散性的转运，或是主动的，例如通过主动转运蛋白，或者是两者的混合。体外培育可以以常规方式执行，例如在α-MEM或相似培养基中培育MASCs的培养物，在这些培养基中加入神经胶质调本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从包含骨髓附着干细胞的材料制备具有神经元祖细胞特性的细胞的方法，该方法包括：调节与骨髓附着干细胞的神经胶质转分化作用相关的在骨髓附着干细胞中的细胞通路；其中充分调节该细胞通路以诱导至少一部分的骨髓附着干细胞转分化成具有神经元祖细胞特性的细胞；条件是所述调节不包括用缺刻蛋白基因胞内域转染骨髓附着干细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：出泽真理，
申请(专利权)人：桑比欧公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]