一种检测红细胞免疫功能的试剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及检测红细胞免疫功能试剂，成份有酵母菌和补体血清，单个散在的酵母菌和补体血清的配比１∶１，补体血清采用豚鼠或人ＡＢ型血清。其制备工艺是，第一步制备未致敏酵母菌使用液，第二步加入补体血清获取致敏酵母菌使用液。用打碎机打碎工序取代过滤工序，用豚鼠或人ＡＢ型血清取代小白鼠血清。得到经济实用的检测试剂。本发明专利技术的优点是，成品保存期长，制作成本低，工艺简单，效果好，宜于推广应用。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种医用检测试剂及其制备。特别是检测红细胞免疫功能试剂及其制备工艺。“检测红细胞免疫功能试剂”可简称为红细胞免疫试剂。红细胞免疫是当今医学研究的一个新领域。各国学者都在致力探索并努力将研究成果应用于临床诊断，而对于有关红细胞免疫功能试剂的研制和运用是其中的一个课题，其有助于人类确诊和检测生理性、病理性疾病的起因、演化和进行积极治疗中的效果监测数据的获取。据了解，国外在1981年，由Slegel等提出“红细胞免疫系统”的新概念，引起医学界的关注，按照Slegle等“标准的红细胞免疫粘附(RCIA)试验”的原理为当今医学研究所推崇，但其在试验中采用红细胞免疫检测试剂的配制和制备繁杂，价格昂贵，需要一定的高档精密仪器设备，不易普及推广使用。国内，由中国人民解放军第二军医大学第一附属医院郭峰等人根据Selgel等“标准的红细胞免疫粘附(RCIA)试验原理，建立了简易的红细胞C3b受体花环试验与红细胞免疫复合物花环试验，采用的红细胞免疫功能检测试剂是致敏酵母菌试剂和未致敏酵母菌试剂。C3b致敏酵母菌试剂用于红细胞C3b花环试验，未致敏酵母菌试剂用于红细胞免疫复合物花环试验。其制作工艺如下1)将洗涤3次后的1%酵母菌悬液经定性滤纸过滤，恢复原体积煮沸20分钟，充分混匀洗涤2次，使在低倍显微镜下呈单个细胞分散状态，加等量小白鼠血清，37℃水浴15分钟，用生理盐水混匀，洗涤、离心1次，配成1×108/ml C3b致敏酵母菌使用液。按“郭峰改良法”获得的试剂制作流程为将1g活性干酵母溶于99ml蒸馏水(DHO)中，制成混合液，用二层定性滤纸或3层纱布过滤，再将其隔水煮沸30分钟，用生理盐水洗涤3次，配制成1×108/ml(人工计数)未致敏酵母菌溶剂，取其中的一部分加入补体，小白鼠血清按1∶1的比例加入，放入37℃水浴15分钟，再用生理盐水(N.S)洗涤2次，制成1×108/ml(人工计数)致敏酵母菌溶液。由上述制作工艺可知致敏酵母菌试剂的配方成份为酵母菌和补体小白鼠血清。申请人在红细胞免疫功能检测试验和临床应用中发现，采用Slgel原理的郭峰改良法生产上述未致敏酵母菌试剂和致敏酵母菌试剂有以下几点不足，(1)生产试剂方法操作繁锁，原料浪费较大，增加了试剂的成本。(2)补体失活现象严重，试剂保存期短，影响检测结果的可靠性。(3)使用该试剂进行红细胞免疫功能检测，操作繁锁，需要抽取患者静脉血，要一定的量，造成患者顾虑不易接受，操作人员也感到麻烦。本专利技术的目的是，针对上述现有技术的不足，进行改进，提出一种检测红细胞免疫功能试剂及其制备工艺，并使其获得良好的检测效果，易于推广普及。本专利技术的技术解决方案是，成份有酵母菌和补体血清，单个散装的酵母菌和补体血清的配比为1∶1，其特征在于，补体血清系豚鼠血清。补体血清也可采用人AB型血清。上述技术解决方案提出红细胞免疫功能检测试剂的制备工艺是，第一步是制备未致敏酵母菌使用液，第二步是加入等量补体血清制备致敏酵母菌使用液，其工艺基本流程包括，按1∶99比例将酵母菌(固体)与蒸馏水(液体)混合，隔水煮沸≥20分钟，用生理盐水洗涤2-3次，得混合均匀试液，使在低倍显微镜下呈单细胞分散状态，配制成未致敏酵母菌使用液，再取部分配制好的未致敏酵母菌使用液，等量加入补体血清致敏，37℃水浴15分钟，用生理盐水洗涤2次，配制成致敏酵母菌使用液，其特征在于，当(固体)酵母菌按比例与蒸馏水混合后，即用打碎机打碎工序取代用定性滤纸或纱布过滤的工序，使之酵母菌全部呈单个个体，加入等量的补体血清是豚鼠血清或人AB型血清，进行致敏。打碎机打碎酵母菌与蒸馏水混合液的时间为1.5-2.5分钟。打碎机打碎的最佳时间为2分钟。申请人在研制和反复试验中，将郭峰改良法制备的试剂与本专利技术的试剂、工艺方法及补体血清材料优劣进行了比较，情况如表Ⅰ <p>值得注意的是，对静脉抽血，郭峰改良法要求反复用生理盐水(N.S)洗涤三次才能用于正式试验，而且结果不易判断。而应用本专利技术的试剂进行试验，取样血是采取末稍血，(比如人的指头上毛细管上的血)，只需10μL量少不说，而且不需进行专门处理，即可以直接进行试验用。本专利技术的优点是，1)选用的补体易获得，豚鼠血清和人AB型血清易获得，小白鼠的血清获取方式麻烦，一般要摘除眼球取血，一只小白鼠的全血量还不到1ML。2)活性干酵母按比例与蒸馏水混合液经打碎机打碎2.5～2.5分钟即可以获得全体能使用的液体取代了繁锁而又花时间又浪费原料的过滤工序，从而使制备工艺容易为一般医务工作者掌握，为加速应用红细胞免疫功能检测方式创造了条件，同时本专利技术应用效果与现有的郭峰改良法制备的试剂和制备工艺相比有明显的进步和优势，其主要在于，试剂成本较低，补体无失活，成品保存期长，进行试验获取的结果较直观易判断，其使用操作法中，采集血样方法简便易行，颇受使用者试验者欢迎，本专利技术的制备工艺相应简单，效果好，宜于推广应用。附图说明图1，使用本专利技术试剂进行C3b受体花环试验，在放大1000倍显微镜下检测结果示意图之一。图2，本专利技术试剂进行C3b受体花环试验，在放大1000倍显微镜下检测结果示意图之二。下面描述本专利技术的实施例。本专利技术提出的检测红细胞免疫功能试剂是由酵母菌和补体血清致敏，单个散在的酵母菌和补体血清的配比为1∶1，在这里，补体血清选择人的AB型血清或者选择豚鼠血清，还可以选择家兔的血清，不过以人的AB型血清和豚鼠血清为制作本专利技术的理想补体血清及其制备工艺是，第一步，配制未致敏酵母菌使用液，取进口原装的法国燕牌的活性干酵母1g，加入蒸馏水(DH2O)至100ML。使用打碎机打碎其混合液1.5～2.5分钟，打碎的最佳时间为2分钟，使活性干酵母均呈单个个体，溶于蒸馏水中，获得混合均匀含量为1%的酵母菌水溶液，隔水煮沸30分钟，再用生理盐水(N.S)洗涤3次，再用微镜进行人工计数，使混合液配制成1×108/ML未致敏酵母菌使用液，该使用液即为红细胞免疫复合物花环(RBC-IC)试验的试剂。第二步，再配制致敏菌酵母菌使用液，取部分未致敏酵母菌使用液，加入等量的豚鼠血清或者人的AB型血清，混合均匀，放入37℃水浴15分钟，使用生理盐水(N.S)洗涤2次，采用人工数配制成1×108/ML C3b致敏酵母菌使用液，即红细胞C3b受体花环(RBC-C3b)试验试剂。使用本专利技术的试剂进行正常人的红细胞免疫功能检测，结果表明，C3b受体花环率(%)达到18.33±1.37;免疫复合物花环率(%)为6.22±1.07，与郭峰改良法试剂相比P值&lt;0.05无显著的差异。为了进行比本专利技术与现有试剂的优劣和特性，申请人还进行多种试剂的比较试验。结果如下表表II 注表中的“同济”是同济医大提供的采用小白鼠血清配制的红细胞免疫试剂，其它各栏均由申请人自制提供。由表Ⅱ显示，各种动物的补体血清致敏试剂与同济医大基础免疫教研室提供的红细胞免疫试剂相比，P&lt;0.05无显著性差比。表Ⅲ 致敏试剂RBC上粘附酵母菌数比较< >由表Ⅲ显示，RBC上粘附2个酵母菌在自制试剂中，用豚鼠或者人的AB型血清所致敏的试剂与同济医大提供的试剂相比，有着非常显著的差异，P&lt;0.001同本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测红细胞免疫功能试剂，成分有酵母菌和补体血清，单个散装的酵母菌和补体血清的配比１∶１，其特征在于，补体血清系豚鼠血清。２、一种检测红细胞免疫功能试剂，成分有酵母菌和补体血清，单个散在的酵母菌和补体血清的配比１∶１，其特征在于，补体血清选用人ＡＢ型血清。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：祝爱霞，唐跃华，
申请(专利权)人：中国第一冶金建设公司职工医院，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]