经修饰的CEA/B7载体制造技术

本发明专利技术涉及编码多肽的核酸和所述核酸或多肽在预防和／或治疗癌症中的用途。具体地，本发明专利技术涉及用于插入和表达编码肿瘤抗原的外源基因的改进载体，以用于癌症的免疫治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的CEA/B7栽体 专利技术领城本专利技术涉及编码多肽的核酸和所述核酸或多肽在预防和/或治疗 癌症中的用途.具体地，本专利技术涉及用于插入和表达编码肺瘤抗原的 外源基因的改进栽体，以用于癌症的免疫治疗.专利技术背景因为在基于原发性肿瘤和正常细胞的表达特征的分子鉴定上取 得巨大的进展，所以近年来在使用肿瘤相关抗原(TAAs)的癌症疫苗 开发上已获得巨大的增长，所述分子鉴定借助于几种技术，例如高密 度微阵列、SEREX、免疫組织化学(IHC) 、 RT-PCR、原位杂交(ISH) 和激光捕获显微镜术(Rosenberg, Immunity, 1999; Sgroi等人， 1999, Schena等人，1995, Offringa等人，2000),所述TAAs是由 肿瘤细胞表达或超表达的抗原并且对一种或几种肿瘤特异，例如CEA 抗原在结肠直肠癌、乳腺癌和肺癌中表达.Sgroi等人(1999 )结合 使用激光捕获显微解剖和cDM微阵列鉴定了几种在侵袭性和转移性 癌细胞中差异表达的基因。几种递送系统如DNA或病毒可用于抗人癌 症的治疗性接种(Bonnet等人，2000 ),并且可引起免疫应答，且 也可打破抗TAAs的免疫耐受性。通过插入编码T细胞共刺激分子例 如B7. 1或细胞因子IFN"Y、 IL2、 GM-CSF等的转基因可使肿瘤细胞 更具免疫原性.TAA和细胞因子或共刺激分子的共表达可开发有效的 治疗性疫苗(Hodge等人，95， Bronte等人，1995， Chamberlain等 人，1996),在本领域需要用于刺激预防或治疗癌症的免疫应答的试剂和方法学.本专利技术提供了这样的试刑和方法学，其克服了许多其它试剂和 方法学在试困治疗癌症例如癌的过程中遇到的困难.特別地，本专利技术 提供了新的CBA编码序列.该核苷酸序列CEA (6D) -1,2包含消除 CEA截短形式的表达(当从表达栽体表达时)的序列修饰.本领域技 术人员想要用这种经修饰的的序列来提高CEA的表达和改善免疫方 案.专利技术概述本专利技术提供了给患者施用以预防和/或治疗癌症的免疫原性靶，特別地，所迷免疫原性靶是CEA肺瘤抗原("TA")和/或血管发生 相关抗原("AA")。在一个实施方案中，免疫原性靶由经修饰的在 经转化的细胞中提高CEA表达的CEA核苷酸序列(CEA (6D) -1，2) 编码.在某些实施方案中，将TA和/或AA以包含于质粒或其它递送 栽体例如重组病毒中的核酸的形式给患者施用.TA和/或AA也可与 免疫刺激物例如共刺激分子或佐剂联合施用.附困简述困l.A.包舍在部分H6启动子控制下的具有6D修饰的CEA编码 序列的质粒p3，H6MCBA的困解，B.质粒pSE1544. 9 (pUC18-mCEA重 复l)的图解.图2.质粒pSE1616.44(pUC18-mCEA修饰的重复l)的困解。 困3.质粒pSE1658. 15 (p3'H6MCBA修饰的重复1)的困解。 困4.质粒pBSmCEA的困解，困5.质粒pSE1686. 1 (pUC18 mCEA修饰的重复2)的围解.困6.质粒pSE1696. 1 (pUC18 mCEA修饰的重复2)的图解.困7.质粒p3'H6modMCEA-第1和笫2重复的困解.困8.质粒pNVQH6MCBA(6D笫l和笫2)的困解。图9A-D. CAP (6D)和CAP (6D) -1， 2的核苷酸序列的比较，下划线标明序列之间的差异.困10.确定NYVAC DNA中存在CAP (6D)-1， 2的PCR分析.困11.举例说明在表达CAP (6D)- 1,2的细胞中不存在截短的 CEA的免疫印迹.困12. ALVAC C6供体质粒中在H6启动子控制下的人B7. l基因.困13. ALVAC C3供体质粒中在H6启动子控制下的CAP(6D)-1，2 CEA DNA序列.详迷本专利技术提供了用于治疗和/或预防癌症的试刑和方法学.所有本申请引用的参考资料都引用作为参考.在一个实施方案中，本专利技术涉及诱导或增强抗一种或多种肿瘸抗原("TA")的免疫应答以预防和/或治疗癌症.在某些实施方案中， 可将一种或多种TAs组合.在优选的实施方案中，免疫应答由在例如 施用编码肿瘤抗原的核酸栽体或以肽或多肽形式存在的肿痗抗原自 身后TA在宿主细胞内的表达产生，如此处所用的，"抗原"是指在已施用抗原的宿主中产生免疫应 答的分子(例如多肽)或其部分.所述免疫应答可包括产生结合至少 一种抗原表位的抗体和/或产生抗表达所述抗原表位的细胞的细胞免 疫应答，所述应答可以是通过例如导致增加的抗体生产、产生具有增 加的对抗原的亲和力的抗体或增加的细胞应答(即，增加的T细胞) 而增强当前的免疫应答.可选择地，产生免疫应答的抗原可被称作是 具有免疫原性的或被称作免疫原.在描述本专利技术中，TA可称作"免 疫原性靶".TA包括肺癌相关抗原(TAAs)和肿瘸特异抗原(TSAs)，其中癌 细胞是所述抗原的来源.TAA是在肿瘸细胞表面以高于在正常细胞表 面观察到的量表达的抗原或是在胎儿发育期间在正常细胞上表达的 抗原。TSA是对肿瘤细胞而言独特的抗原并且不在正常细胞中表达. TA进一步包括TAAs或TSAs、其抗原性片段和保持其抗原性的经修饰 的版本，根据其表达模式、功能或遣传来源，TAs—般分为5类癌-睾丸 (CT)抗原(即，MAGE、 NY-ES0-1)、黑素细胞分化抗原(即Melan A/MART-1、酪氨酸酶、gplOO)、突变抗原(即,MUM-1、 p53、 CDK-4)、 超表达的'自身，抗原(即，HER-2/neu、 p5"和病毒抗原(即，HPV、 BBV).为实践本专利技术的目的，合适的TA是任何在已施用TA的宿主内 诱导或增强抗肿瘤免疫应答的TA.合适的TA包括，例如，gp100 (Cox 等人，5W,e， 264: 716-719 (1994))、 MART-1/Melan A (Kawakami 等人，J.Exp. Med. ， 180: 347-352 (1994) )、 gp75(TRP-1) (Wang 等人，J.Exp.Med. ， 186: 1131-1140 ( 1996))、酪氨酸酶(Wolfel 等人，Eur. / 7ip迈wzo/.， 24: 759-764 ( 1994 ) ; 200175117; W0 200175016 ; WO200175007 ) 、 NY-ES0-1 ( W0 98/14464 ; 99/18206 )、黑素病蛋白聚糖(Hellstrom等人，/ /瓜迈咖0/. ， 130: 1467-1472 ( 1983 ) ) 、 MAGE家族抗原(即，MAGB-1， 2, 3, 4, 6, 12, 51; Vander Bruggen等人，Science, 254: 1643-1647 ( 1991 ); 美国专利号6, 235, 525; CN 1319611) 、 BAGE家族抗原(Boel等人， 力咖w ",， 2: 167-175 ( 1995 ) ) 、 GAGE家族抗原(即，GAGE-1，2; Van den Eynde等人，/. iU77. , 182: 689-698 ( 1995 );本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含如在ＳＥＱＩＤＮＯ．：２４和图９中举例说明的核酸序列ＣＥＡ（６Ｄ）－１，２或其片段的表达载体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M帕林顿，L张，B罗文斯基，L格里茨，P格林哈尔夫，
申请(专利权)人：圣诺菲帕斯图尔公司，特里昂生物学公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]