本发明专利技术提供用于在涉及ＳＡＡ表达的青光眼中抑制血清淀粉状蛋白ＡｍＲＮＡ表达的ＲＮＡ干扰。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗青光眼的血清淀粉状蛋白A的RNAi抑制专利
本专利技术涉及干扰RNA组合物用于抑制青光眼、尤其是原发性开角型 青光眼中血清淀粉状蛋白A(SAA)表达的领域。专利技术背景青光眼是共有某些临床特征的一组多样的视神经病。青光眼中视力损 失的原因是神经视网膜中视网膜神经节细胞的选择性死亡，该选择性死亡 在临床上通过视野特征性改变、神经纤维层缺陷和视神经头(ONH)进行性 杯化来诊断。青光眼t艮的一个主要风险因素是高眼压症(升高的眼内压 力，IOP)的存在。需要足够的眼内压力以维持眼的形状并提供压力梯度以 允许房水流向无血管的角膜和晶状体。IOP似乎还参与正常张力青光眼的 发病机制，此时常认为患者具有正常的IOP。与青光^bf目关的升高的IOP的原因是位于眼前房虹膜角膜角内一小片 特化组织-小梁网(TM)中升高的房水流出阻力。TM的青光眼性改变包括 TM细胞的损失和胞外残片(包括蛋白斑样物质)沉积和聚集.此外，还 发生青光B艮性ONH的改变，在青光眼性眼中，ONM神经胶质细胞中存在 形态学改变和运动性改变.作为对升高的IOP和/或短暂缺血性损伤的反细胞轴突形态学发生改变，原发性青光眼因具有解剖学或生理学基础的眼内液体流动紊乱造成。 继发性青光眼因眼的外伤或创伤或宿疾发生。原发性开角型青光眼 (POAG)，也称作慢性或单纯性青光眼，占全部原发性青光眼的90 % 。 POAG 以小梁网的退化为特征，该退化导致对来自眼的液体排出有异常高的阻力。这种阻力的后果是IOP的增加，这种增加为推动由眼正常产生的液体克服这种增加的阻力所需要。目前的抗青光眼疗法包括通过使用房水形成抑制剂或增强葡萄膜巩膜流出的药剂降低IOP、激光小梁成型术或作为旨在改善排出的滤过手术的小梁切除术。药物抗青光眼方法已经显示出多种有害副作用。例如，缩瞳 药如毛果芸香碱可以引起视力模糊和其它不利的视觉副作用。全身施用的 碳酸酐酶抑制剂还可以引起恶心、消化不良、疲劳和代谢性酸中毒.另夕卜，某些)8-阻断剂已经日益与严重的肺部副作用相关，其原因是i3-阻断剂对肺 组织中/3-2受体的影响，拟交感神经药引起心动过速、心律不齐和高血压。 此类副作用可以导致患者适从性降低或终止治疗。更重要地是，目前的抗青光眼疗法不直接解决持续无法緩解的对小梁 网、视神经的病理性损伤以及视网膜神经节细胞和轴突的损失。鉴于青光 眼的重要性以及目前治疗方法的不当，拥有对付青光眼JSJL^础性原因的 治疗青光眼的改良方法会受到欢迎。专利技术简述本专利技术涉及把向SAA mRNA并因此干扰SAA mRNA表达的千扰 RNA。本专利技术的干扰RNA用于治疗SAA相关性青光眼。本专利技术的实施方案提供减弱受试者眼中血清淀粉状蛋白A mRNA表 达的方法，该方法包括向受试者眼中施用包含有效量的19至49个核苷酸 长度的干扰RNA(如双链(ds) siRNA或单链(ss) siRNA)和可药用载体的组 合物.双链siRNA包含有义核苷酸序列、反义核苷酸序列和至少19个核苷 酸接近完全连续互补的区域。此外，反义序列在生理条件下与对应于SEQ ID NO: 1、 SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3的mRNA的一部分杂交， 并具有与分别对应于SEQ ID NO: 1、 SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3 的mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域，其中 SEQ ID NO: 1、 SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3是分别编码SAAl、 SAA2和SAA4的DNA的有义链(GenBank参考号NM—000331、 BC020795和 NM_006512)。此组合物的施用减弱受试者眼中血清淀粉状蛋白A mRNA 的表达。当干扰RNA是单链时，干扰RNA包含具有与对应于SEQ ID NO: 1、 SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3的mRNA的杂交部分有至少19个核苷 酸接近完全连续互补的区域的核苷酸序列。在本专利技术的一个实施方案中，将反义siRNA设计成靶向对应于SEQ ID NO: 1的mRNA中在230、 357、 362、 380、 447、 470、 527、 531、 548 或557位核苷酸处起始的核苷酸序列。在本专利技术另一个实施方案中，将反 义siRNA设计成靶向对应于SEQ ID NO: 2的mRNA中在43、 170、 175、 193、 260、 283、 339或370位核苷^起始的核苷酸序列。在本专利技术又一 个实施方案中，将反义siRNA设计成靶向对应于SEQ ID NO: 2的mRNA 中在252、 271、 276、 325或343位核苷酸处起始的核苷酸序列。在本专利技术 的又一个实施方案中，将反义siRNA设计成靶向对应于SEQ ID NO: 3的 mRNA中在153、 166、 222、 227、 251、 268、 297、 335、 356、 384、 3卯、 396、 406或423位核香酸处起始的核苷酸序列。本专利技术的又一个实施方案是治疗有此需要的受试者中血清淀粉状蛋白 A相关性青光眼的方法。该方法包括向受试者眼中施用包含有效量的19 至49个核苷酸长度的干扰RNA和可药用载体的组合物，其中干扰RNA 包含有义核苷酸序列、反义核苷酸序列和至少19个核苷酸接近完全连续互 补的区域。反5Uf列在生理^Hf下与对应于SEQIDNO: 1、 SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3的mRNA的一部分杂交，并具有与分别对应于SEQ ID NO: 1、 SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3的mRNA的杂交部分有至少 19个核苷酸接近完全连续互补的区域。血清淀粉状蛋白A相关性青光眼因 此得到治疗。附图简述附图说明图1提供SAA2 mRNA/18s rRNA比率的QPCR分析以检查siRNA对用靶向SAA mRNA的SMARTPOOL siRNA转染的NTM 765正常小梁 网细胞中内源性SAA mRNA的影响。使用三个不同浓度的Dharmafect#l 试剂将小梁网细胞用100 nM siRNA转染24小时Con:对照；处理l: 以0.05 #1/100 孔处理的处理1;处理2:以0.2 pi/100 /tl孔处理的处理2; 处理3:以0.4 #1/100 /il孔处理的处理3。图2提供SAA2 mRNA/18s rRNA比率的QPCR分析以检查siRNA对 用靶向SAA mRNA的SMARTPOOL siRNA转染的GTM686青光眼小 梁网细胞中内源性SAA mRNA的影响。使用三个不同浓度的Dharmafect 弁l试剂将小梁网细胞用100 nM siRNA转染24小时Con:对照；处理l: 以0.05 #1/100 /d孔处理的处理1;处理2:以0.2 #1孔处理的处理2; 处理3:以0.4 /d/100 孔处理的处理3。 *:通过单因素方差分析和 Newman-Keuls多重比较检验，相对于对照和处理1 p<0.05。图3提供SAA siRNA处理对正常小梁网细胞(NTM 765-04)和青光目艮 小梁网细胞(GTM 686-03)的生长和形态学影响的实时电子监测 本文档来自技高网...
【技术保护点】
减弱受试者眼中血清淀粉状蛋白Ａ ｍＲＮＡ表达的方法，包括向受试者眼中施用包含有效量的１９至４９个核苷酸长度的干扰ＲＮＡ和可药用载体的组合物，其中血清淀粉状蛋白Ａ ｍＲＮＡ的表达因此减弱；所述干扰ＲＮＡ包含有义核苷酸序列、反义核苷酸序列以及在有义序列和反义序列间有至少１９个核苷酸接近完全连续互补的区域；其中反义序列在生理条件下与对应于ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３的ｍＲＮＡ的一部分杂交，并具有与分别对应于ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３的ｍＲＮＡ的杂交部分有至少１９个核苷酸接近完全连续互补的区域。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：AF克拉克，王万恒，L麦克纳特，
申请(专利权)人：爱尔康公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]
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