利用重组核酸内切酶系统的最佳化基因编辑技术方案

本文描述了用于基因组编辑的方法和组合物。用于基因组编辑的核酸内切酶涉及诱发双链DNA中的断裂，对于此来说，敲入是非常低效的，因为其依赖于通过修复蛋白将同源DNA序列随机整合至断裂位点。为了解决这些问题，本文描述了新颖的重组融合蛋白，所述重组融合蛋白主动在较接近基因组裂解位点处募集线性DNA插入物，提高了大DNA片段整合至基因组的效率。此类对基因组编辑技术的改良允许在不牺牲效率下使用较低的线性DNA浓度，并且可以进一步与例如荧光蛋白报告系统等其它特征组合。

Optimal gene editing by using recombinant nucleic acid endonuclease system

This article describes the methods and compositions for genome editing. For genome editing endonuclease involved in fracture induced by double stranded DNA, for this, typing is very inefficient, because it depends on the repair protein homologous DNA sequence random integration to fracture site. In order to solve these problems, a novel recombinant fusion protein is described. The recombinant fusion protein initiatively gets linear DNA inserts near the genome cleavage site, and improves the efficiency of the integration of large DNA fragments into the genome. The improvement of genome editing technology allows low DNA concentration without sacrificing efficiency, and can further be combined with other features such as fluorescent protein reporting system.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】利用重组核酸内切酶系统的最佳化基因编辑专利
本文描述了用于遗传序列的体外和体内操控以进行研究和治疗活动，包括产生敲除和敲入序列以进行基因组编辑的方法和组合物。专利技术背景在过去的10年间，CRISPR-Cas基因组编辑已经成为一项更加成熟的技术。像所有其它的基因组编辑技术一样，它能够产生敲除表型，但是在引入供体DNA序列的敲入方面不是非常有效。对生物技术和初级研究更有用的酶的研发包括提高酶的功效，创造新的酶来满足需求，或修改酶以扩大其功能性。举例来说，克列诺(Klenow)核酸外切酶-酶是克列诺大片段的截短形式。此经修饰的DNA聚合酶保持其聚合酶活性，但失去了大片段回嚼(chewback)3’DNA悬垂物的能力。另一个实例包括DNA聚合酶，DNA聚合酶是一种有专利权的融合蛋白，它由校对DNA聚合酶加赋予较高拷贝速率的另一DNA聚合酶的结构域组成。将这些原理扩大至基因组编辑领域，将能够创造一种新的Cas-9蛋白，所述蛋白保持现存的DNA核酸内切酶活性，同时提高了供体DNA序列整合至基因组的效率。提出了若干策略来解决此需求。尤其在供体DNA插入基因组方面存在若干障碍。非同源末端接合(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，所述组合物包含如下载体，所述载体编码包含至少一种核酸内切酶和DNA结合部分的融合蛋白。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.05.14 US 62/161,4871.一种组合物，所述组合物包含如下载体，所述载体编码包含至少一种核酸内切酶和DNA结合部分的融合蛋白。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述融合蛋白包含至少一种选自由以下组成的群组的核酸内切酶：cas规则间隔的短回文(CRISPR)蛋白、锌指核酸酶(ZFN)和类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)。3.如权利要求2所述的组合物，其中所述CRISPR蛋白包含cas9。4.如权利要求1所述的组合物，其中所述DNA结合部分包含锌指蛋白。5.如权利要求4所述的组合物，其中所述锌指包含左旋CCR5结合蛋白。6.如权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种核酸内切酶和DNA结合部分由包含两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个氨基酸的连接子接合。7.如权利要求1所述的组合物，其中所述融合蛋白包含荧光标记蛋白。8.如权利要求7所述的组合物，其中所述荧光标记蛋白包含一种或多种选自由以下组成的群组的蛋白质：绿色荧光蛋白(GFP)、增强型绿色荧光蛋白(eGFP)、红色荧光蛋白(RFP)和mCherry。9.如权利要求1所述的组合物，其中所述融合蛋白包含核定位信号(NLS)。10.如权利要求9所述的组合物，其中所述NLS是SV40NLS。11.一种基因组编辑方法，所述方法包括：(a)提供一定量的一种或多种载体，所述载体编码包含至少一种核酸内切酶和DNA结合部分的融合蛋白；以及(b)使细胞群体与所述量的所述一种或多种载体接触...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·君格，T·亨特，S·费拉瑟，
申请(专利权)人：南加利福尼亚大学，
类型：发明
国别省市：美国,US