一种核酸提取保存液制造技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，公开了一种核酸提取保存液，包含了强效螯合金属离子且不溶于溶剂的树脂，阴离子型表面活性剂，PH缓冲剂，葡萄糖，将所述上清液进行混匀，得到核酸提取保存液，取一定质量的核酸提取保存液后，测定其中含量，成份达到事先标准才能再进行下一步，然后所述一定质量的核酸提取保存液经105℃灭菌30min，并使用前，以处方量进行再稀释一倍；得到稀释一倍的一定质量的核酸提取保存液；本发明专利技术的优点为考虑全面、实验全面，在核酸提取保存液中，限定了保存条件和成份，并且通过实验测试保存的参数条件，能更好地应用到实际情况中。

【技术实现步骤摘要】
一种核酸提取保存液
本专利技术属于生物
，涉及一种核酸提取保存液。
技术介绍
核酸(DNA或RNA)因为很容易被环境中存在的核酸酶分解，因此在一般的环境下能完整存在的时间很短，特别RNA保存难度更大，同时由于核酸中因含有食物，细菌等来源各异的杂质存在，如何从核酸中得到高品质及完整的核酸一直是生物领域亟待争决的问题。美国安比恩(ambion)公司生产的一种可保存完整细胞的溶液RNAlater(美国专利第6204375号)该产品由25mM柠檬酸钠、10mM乙二胺四乙酸(EDTA)与100ml内含70克硫酸铵(PH5.2)。不需要将细胞冷冻，核酸在37摄氏度下可稳定保存一天，25摄氏度下可稳定保存1周，也不会明显降解，然而每0.5克组织需要使用5倍体积的保存液进行保存，并且在纯化前需离必去除上清后才可以进行后续实验，使用中非常不方便，且对于大体积的组织块会因为浸泡不彻底而造成样本降解现象。另外市场上有很多基于异硫氰酸胍开发的多种核酸保存液，因异硫氰酸胍本身成分的不稳定性，被氧化后结构发生变化，造成保存效果极期不稳定。。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题是突破上述缺点，提供一种核酸提取保存液；目前核酸样本核酸保存液中因普遍存在抑制核酸酶能力弱，或保存液中自身核酸酶抑制物不稳定等原因，使得现有的保存液普遍存在保存时间短，不稳定或核酸片段化严重等问题，本专利技术旨在通过优化保存液中各抑制物成份，解决核酸在常温下保存时间短，核酸易降解，核酸片段完整性差的问题本专利技术的内容为：一种核酸提取保存液，具体步骤如下：预处理：首先在PVC保存袋中加入适量的洁净水：按处方小样配制，取常温22℃、27℃、29℃、33℃、23℃、53℃、65℃热蒸馏水，并分别加入Tris-盐酸(Tris-HCl，20mmol/l)，并调节pH为8.3，并分别在常温22℃、27℃、29℃、33℃、23℃、53℃、65℃进行操作控制，得到溶解澄明的七种的预处理液，并分别保存到七袋的PVC保存袋中；灭菌温度和时间：进行湿热灭菌时，PVC保存袋中遇热不稳定，PVC保存袋昙点(遇热变型点)为110℃，因此中试实验温度取22℃，分别进行湿热灭菌30min，40min，45min，结果以22℃效果最佳，符合PVC保存袋变型爆破率最低的要求；七种的预处理液在-22℃温度条件冷冻1个月后，配成七种的特定PH含药培养预备液；七种的特定PH含药培养预备液中放在旋转台中分别加入葡萄糖溶液，葡萄糖溶液为20mmol/l，旋转台的旋转速度为7200转/分，生成七种的缓冲剂；对七种的缓冲剂进行10μm微孔滤膜、1μm微孔滤膜、0.5μm微孔滤膜的三级过滤，10μm微孔滤膜上加二层绸布，中间夹二层滤纸进行预过滤；得到七种的预过滤溶液；此后，七种的预过滤溶液再分别加入亚胺二乙酸型树脂、氨基膦酸型树脂、酰胺肟型树脂、吡啶型树脂、多胺型树脂、二硫代氨基甲酸型树脂和硫醇型树脂，得到七种的待处理液体，亚胺二乙酸型树脂、氨基膦酸型树脂、酰胺肟型树脂、吡啶型树脂、多胺型树脂、二硫代氨基甲酸型树脂和硫醇型树脂要调制为第一次所有液体的质量百分比的1％；经七种的待处理液体进行混匀，必要时加入进行超声振荡，然后才能得到均匀悬浮液，在常温22℃，53℃，65℃用水重新称释一倍后，得到七种的稳定悬浮溶液，并在22℃中摆放20分钟；按照处方量，在七种的稳定悬浮溶液随机取出五种一定体积的预处理后的液体，调节一定的PH值与离子强度后，分别加入合适体积脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸盐，十二烷基苯磺酸及其钠盐，仲烷基磺酸钠SAS-60，脂肪酸甲酯乙氧基化物磺酸盐FMES，脂肪醇聚氧乙烯醚羧酸盐AEC；脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸盐，十二烷基苯磺酸及其钠盐，仲烷基磺酸钠SAS-60，脂肪酸甲酯乙氧基化物磺酸盐FMES，脂肪醇聚氧乙烯醚羧酸盐AEC要调制为第二次所有液体的质量百分比的0.05％；第二次所有液体在22℃温度下进行络合，待络合完全后，离心得到沉淀物即为核酸提取络合物，得到的核酸提取络合物可以用一定体积和离子强度的盐溶液在一定的温度下解离一段时间后，进行混匀，必要时加入进行超声振荡，得到稳定悬浮溶液；将稳定悬浮溶液进22℃中摆放10天，在得到稳定悬浮的核酸提取保存液后，取一定质量的核酸提取保存液，测定其中含量，成份达到事先标准才能再进行下一步，然后一定质量的核酸提取保存液灌封，105℃灭菌30min，并使用前，以处方量进行再稀释一倍；得到稀释一倍的一定质量的核酸提取保存液；将符合稀释一倍的一定质量的核酸提取保存液转入不同玻璃容器中，并在50℃条件下处理30分钟。具体实施方式为了使本专利技术所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行详细的说明。应当说明的是，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术，能实现同样功能的产品属于等同替换和改进，均包含在本专利技术的保护范围之内。具体方法如下：实例一本专利技术所采用的试剂均可以稳定存在，不易被空气氧化，可以强效持久的达到抑制核酸酶保护核酸稳定的目的，同时葡萄糖的存在加大了溶液粘稠度，使得在运输过程中，核酸不易因为分子间剪切力而发生断裂现象。替代方案是指：强效螯合金属离子且不溶于溶剂的树脂被“强效有螯合金属离子作用的其它试剂所替代”；加热溶解于适量蒸馏水中，再依次溶解NaCl，KCl，MgSO4、过滤，加蒸馏水至全量，搅匀，用氨丁三醇调pH值在8.3左右，消毒灭菌后灌装于1000mL的PVC保存袋中，条件为：在冰箱中取出表面带有少许冰块PVC保存袋，最后每1000mL加入50％灭菌葡萄糖溶液10mL；溶解温度：首先在PVC保存袋中加入适量的洁净水：按处方小样配制，取常温22℃、27℃、29℃、33℃、23℃、53℃、65℃热蒸馏水，并分别加入Tris-盐酸(Tris-HCl，20mmol/l)(包括但不限于TRIS-HCL)，并调节pH为8.3，并分别在常温22℃、27℃、29℃、33℃、23℃、53℃、65℃进行操作控制，得到溶解澄明的七种的预处理液，并分别保存到六袋的PVC保存袋中，实验结果表明，溶解澄明，操作方便；保存液包含强效螯合金属离子且不溶于溶剂的树脂(包括但不限于亚胺二乙酸型、氨基膦酸型、酰胺肟型、吡啶型、多胺型、二硫代氨基甲酸型和硫醇型等)；对本品进行湿热灭菌时，PVC遇热不稳定，符合要求，PVC袋变型爆破率最低，可以用活性炭，用陶瓷滤器，玻璃滤器或板框式压滤机进行预滤，再用微孔滤膜进行精滤的三级过滤法方法为；微孔滤膜三级过滤微孔滤膜h′.加二层绸布，中间夹二层滤纸进行预过滤。实际操作中可以对七种的缓冲剂进行10μm微孔滤膜、1μm微孔滤膜、0.5μm微孔滤膜的三级过滤，10μm微孔滤膜上加二层绸布，中间夹二层滤纸进行预过滤；得到七种的预过滤溶液；灭菌温度和时间：进行湿热灭菌时，PVC保存袋中遇热不稳定，PVC保存袋昙点(遇热变型点)为110℃，因此中试实验温度取22℃，分别进行湿热灭菌30min，40min，45min，结果以22℃效果最佳，符合PVC保存袋变型爆破率最低的要求；七种的预处理液在-22℃温度条件冷冻1个月后，配成七种的特定PH含药培养预备液；七种的特定PH含药培养预备液中放在旋转台中分别加入本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核酸提取保存液，其特征在于，具体步骤如下：预处理：首先在PVC保存袋中加入适量的洁净水：按处方小样配制，取常温22℃、27℃、29℃、33℃、23℃、53℃、65℃热蒸馏水，并分别加入Tris‑盐酸(Tris‑HCl，20mmol/l)，并调节pH为8.3，并分别在常温22℃、27℃、29℃、33℃、23℃、53℃、65℃进行操作控制，得到溶解澄明的七种的预处理液，并分别保存到七袋的PVC保存袋中；灭菌温度和时间：进行湿热灭菌时，所述PVC保存袋中遇热不稳定，所述PVC保存袋昙点(遇热变型点)为110℃，因此中试实验温度取22℃，分别进行湿热灭菌30min，40min，45min，结果以22℃效果最佳，符合所述PVC保存袋变型爆破率最低的要求；所述七种的预处理液在‑22℃温度条件冷冻1个月后，配成七种的特定PH含药培养预备液；所述七种的特定PH含药培养预备液中放在旋转台中分别加入葡萄糖溶液，所述葡萄糖溶液为20mmol/l，旋转台的旋转速度为7200转/分，生成七种的缓冲剂；对所述七种的缓冲剂进行10μm微孔滤膜、1μm微孔滤膜、0.5μm微孔滤膜的三级过滤，所述10μm微孔滤膜上加二层绸布，中间夹二层滤纸进行预过滤；得到七种的预过滤溶液；此后，所述七种的预过滤溶液再分别加入亚胺二乙酸型树脂、氨基膦酸型树脂、酰胺肟型树脂、吡啶型树脂、多胺型树脂、二硫代氨基甲酸型树脂和硫醇型树脂，得到七种的待处理液体，所述亚胺二乙酸型树脂、所述氨基膦酸型树脂、所述酰胺肟型树脂、所述吡啶型树脂、所述多胺型树脂、所述二硫代氨基甲酸型树脂和所述硫醇型树脂要调制为第一次所有液体的质量百分比的1％；经所述七种的待处理液体进行混匀，必要时加入进行超声振荡，然后才能得到均匀悬浮液，在常温22℃，53℃，65℃用水重新称释一倍后，得到七种的稳定悬浮溶液，并在22℃中摆放20分钟；按照处方量，在七种的稳定悬浮溶液随机取出五种一定体积的预处理后的液体，调节一定的PH值与离子强度后，分别加入合适体积脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸盐，十二烷基苯磺酸及其钠盐，仲烷基磺酸钠SAS‑60，脂肪酸甲酯乙氧基化物磺酸盐FMES，脂肪醇聚氧乙烯醚羧酸盐AEC；所述脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸盐，所述十二烷基苯磺酸及其钠盐，所述仲烷基磺酸钠SAS‑60，所述脂肪酸甲酯乙氧基化物磺酸盐FMES，所述脂肪醇聚氧乙烯醚羧酸盐AEC要调制为第二次所有液体的质量百分比的0.05％；所述第二次所有液体在22℃温度下进行络合，待络合完全后，离心得到沉淀物即为核酸提取络合物，得到的所述核酸提取络合物可以用一定体积和离子强度的盐溶液在一定的温度下解离一段时间后，进行混匀，必要时加入进行超声振荡，得到稳定悬浮溶液；将所述稳定悬浮溶液进22℃中摆放10天，在得到稳定悬浮的核酸提取保存液后，取一定质量的核酸提取保存液，测定其中含量，成份达到事先标准才能再进行下一步，然后所述一定质量的核酸提取保存液灌封，105℃灭菌30min，并使用前，以处方量进行再稀释一倍；得到稀释一倍的一定质量的核酸提取保存液；将符合所述稀释一倍的一定质量的核酸提取保存液转入不同玻璃容器中，并在50℃条件下处理30分钟。...

【技术特征摘要】
1.一种核酸提取保存液，其特征在于，具体步骤如下：预处理：首先在PVC保存袋中加入适量的洁净水：按处方小样配制，取常温22℃、27℃、29℃、33℃、23℃、53℃、65℃热蒸馏水，并分别加入Tris-盐酸(Tris-HCl，20mmol/l)，并调节pH为8.3，并分别在常温22℃、27℃、29℃、33℃、23℃、53℃、65℃进行操作控制，得到溶解澄明的七种的预处理液，并分别保存到七袋的PVC保存袋中；灭菌温度和时间：进行湿热灭菌时，所述PVC保存袋中遇热不稳定，所述PVC保存袋昙点(遇热变型点)为110℃，因此中试实验温度取22℃，分别进行湿热灭菌30min，40min，45min，结果以22℃效果最佳，符合所述PVC保存袋变型爆破率最低的要求；所述七种的预处理液在-22℃温度条件冷冻1个月后，配成七种的特定PH含药培养预备液；所述七种的特定PH含药培养预备液中放在旋转台中分别加入葡萄糖溶液，所述葡萄糖溶液为20mmol/l，旋转台的旋转速度为7200转/分，生成七种的缓冲剂；对所述七种的缓冲剂进行10μm微孔滤膜、1μm微孔滤膜、0.5μm微孔滤膜的三级过滤，所述10μm微孔滤膜上加二层绸布，中间夹二层滤纸进行预过滤；得到七种的预过滤溶液；此后，所述七种的预过滤溶液再分别加入亚胺二乙酸型树脂、氨基膦酸型树脂、酰胺肟型树脂、吡啶型树脂、多胺型树脂、二硫代氨基甲酸型树脂和硫醇型树脂，得到七种的待处理液体，所述亚胺二乙酸型树脂、所述氨基膦酸型树脂、所述酰胺肟型树脂、所述吡啶型树脂、所述多胺型树脂、所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈佳艳，
申请(专利权)人：上海涛济医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31