一种分离的RNASEK基因及其在制备抗血管衰老药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种分离的RNASEK基因及其在制备抗血管衰老药物中的应用，属于生物医药领域。本发明专利技术通过系统筛选促进血管细胞衰老的miRNA，发现miR‑92b*对血管细胞，尤其是血管内皮细胞衰老具有明显的促进作用。然后通过在其他类型的血管相关细胞模型中验证miR‑92b*，通过所得到的过表达miR‑92b*时其他衰老相关分子或表型的改变结果，确定了miR‑92b*具有促进血管细胞衰老的作用。在此基础上，进一步通过实验确定了miR‑92b*通过调控RNASEK基因的表达下调来促进血管细胞衰老，过表达RNASEK能够有效减缓血管细胞衰老。本发明专利技术为研发针对性的血管衰老预防及治疗提供新的科学依据，为发展新的抗血管衰老药物，尤其是抗血管细胞衰老药物及新的血管衰老分子机制提供了新线索。

A separate RNASEK gene and its application in the preparation of antivascular senescence drugs

The present invention discloses a separate RNASEK gene and its application in the preparation of antivascular aging drugs, which belongs to the field of biological medicine. The present invention promotes vascular cell senescence by miRNA screening system, miR 92b* on vascular cells, especially the senescence of vascular endothelial cells plays a significant role in promoting. Then through the verification of miR 92b* in vascular cell model of other types, obtained by changing the results of other aging related molecules or phenotype of the over expression of miR 92b*, miR is determined 92b* can promote vascular cell senescence. On this basis, through further experiments to determine the miR 92b* through the regulation of RNASEK gene expression down to promote vascular cell senescence, overexpression of RNASEK can effectively reduce the vascular cell senescence. The invention provides a new scientific basis for developing targeted vascular aging prevention and treatment, and provides new clues for developing new anti angiogenic aging drugs, especially for anti vascular cell senescent drugs and new molecular mechanisms of vascular senescence.

【技术实现步骤摘要】
一种分离的RNASEK基因及其在制备抗血管衰老药物中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，特别涉及一种分离的RNASEK基因及其在制备抗血管衰老药物中的应用。
技术介绍
衰老是生命的基本特征，衰老可以发生在个体、组织器官和细胞等不同层次，是由内在编程决定并受环境因素影响的过程。威廉·奥斯勒(WilliamOsier)在完成大量人体解剖后指出“血管衰老，人即衰老”，说明了血管衰老在衰老中的重要作用。血管衰老与增龄相关的各类血管性疾病，例如高血压、冠心病、脑卒中、血管性老年痴呆、动脉粥样硬化和中风的发生密切相关。上述这些疾病严重影响着老年人的健康和生活质量，给患者和社会带来沉重的负担。所以，研究血管衰老是解析个体衰老以及衰老相关疾病发生发展机制的一个重要突破口，是通过延缓衰老控制衰老相关疾病的发生，提供康复、干预与保护措施及解决我国人口老龄化和衰老相关疾病所带来的一系列社会问题的重要基础和有效切入点。研究发现，大部分引起衰老表型改变的分子能调节细胞衰老，这意味着细胞衰老与衰老之间紧密相关。而且，以衰老血管细胞为衰老模型，对血管衰老有关的重要分子信号通路的研究也验证了血管细胞衰老与上述与增龄相关的各类血管性疾病密切相关。组织学上，血管包括内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞。内皮细胞是血管的屏障，负责对外来刺激的应答，对平滑肌具有重要的调节作用；平滑肌是动脉的主要结构细胞，维持血管的收缩和张力；而成纤维细胞主要位于血管结缔组织中，对细胞外基质和损伤修复有重要作用。血管衰老是血管组成细胞衰老的综合效应。与其他细胞的衰老一样，血管组成细胞的衰老也是一个程序化的过程。随着时间的进行，细胞中的一组“衰老相关基因”有序启闭导致衰老的发生。目前已经发现多个衰老相关基因，其中包括非编码的microRNA(简称miRNA)基因。miRNA是一类内源性非编码单链RNA，长度为21-25个核苷酸，在进化上具有高度保守性、时序性和组织特异性，几乎存在于所有多细胞生物体中。到目前为止，专门收录miRNA序列的数据库miRBase涵盖了包括植物、动物和病毒在内的超过8000种miRNA，其中，有超过800个人类miRNA存在于miRBase数据库中。据推测miRNA调节着人类三分之一的基因，参与机体诸多生理病理过程。miRNA主要作用于靶基因的3′非翻译区直接引起靶基因mRNA的降解或者抑制靶基因mRNA的翻译。可见miRNA能够参与调节细胞功能，在人类疾病的调控过程中具有重要的作用。目前已有多篇文章报道了miRNA参与了多种细胞的衰老调控，例如人间质干细胞的复制型衰老、肺癌细胞的诱导型衰老等。然而，由于miRNA的调控具有细胞特异性。专利技术人发现系统评价miRNA及其靶基因在血管相关细胞，特别是血管内皮细胞衰老过程中的调控作用的报道较少。
技术实现思路
本专利技术实施例所要解决的技术问题在于，提供了一种分离的RNASEK基因及其在制备抗血管衰老药物中的应用。具体技术方案如下：第一方面，本专利技术实施例提供了一种分离的RNASEK基因，所述RNASEK基因的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。第二方面，本专利技术实施例提供了上述RNASEK基因在制备抗血管衰老药物中的应用。第三方面，本专利技术实施例提供了一种表达载体，所述表达载体含有上述的分离的RNASEK基因。第四方面，本专利技术实施例提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：治疗有效量的分离的RNASEK基因或表达载体；以及药学上可接受的赋形剂。作为优选，所述药物组合物还包括miR-92b*的抑制剂。作为优选，所述药物组合物还包括RNASEK基因表达的正向调节剂。第五方面，本专利技术实施例提供了一种体外调控组织或细胞中RNASEK基因表达的方法，所述方法包括：抑制该组织或细胞中miR-92b*的表达，和/或对RNASEK基因中的miR-92b*结合位点实施同义突变；和/或施加上述分离的RNASEK基因或表达载体。本专利技术实施例提供的技术方案带来的有益效果是：本专利技术实施例提供了分离的RNASEK基因及其在制备抗血管衰老药物中的应用，首先，通过系统筛选促进血管细胞衰老的miRNA，发现miR-92b*对血管细胞，尤其是血管内皮细胞衰老具有明显的促进作用。然后通过在其他类型的血管相关细胞模型中验证miR-92b*，获取过表达miR-92b*时其他衰老相关分子或表型的改变现象，确定了miR-92b*具有促进血管细胞衰老的作用。进一步地，本专利技术实施例确定了RNASEK基因为miR-92b*的下游靶基因，过表达RNASEK能够有效抑制miR-92b*诱发的细胞衰老过程，进而能够有效减缓血管细胞衰老。可见，本专利技术为研发针对性的血管衰老预防及治疗提供新的科学依据，为发展新的抗血管衰老药物，尤其是抗血管细胞衰老药物及新的血管衰老分子机制提供了新线索。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术实施例1提供的HUVEC细胞、转染miR-34a的HUVEC细胞以及转染miR-92b*的HUVEC细胞中的β-gal染色结果示意图；图2是本专利技术实施例2提供的HCAEC细胞、转染miR-34a的HCAEC细胞以及转染miR-92b*的HCAEC细胞中的B-gal染色结果示意图；图3是本专利技术实施例2提供的HASMC细胞、转染miR-34a的HASMC细胞以及转染miR-92b*的HASMC细胞中的β-gal染色结果示意图；图4是本专利技术实施例3提供的HUVEC细胞、过表达miR-34a的HUVEC细胞以及过表达miR-92b*的HUVEC细胞中的p21和p16蛋白的表达示意图；图5是本专利技术实施例3提供的HUVEC细胞以及过表达miR-92b*的HUVEC细胞中G0/G1阻滞示意图；图6是本专利技术实施例4提供的miR-92b*的13个下游靶标基因的双荧光报告系统检测结果示意图；图7是本专利技术实施例4提供的在破坏RNASEK基因的microRNA结合位点后，miR-92b*对RNASEK基因的调控表达示意图；图8是本专利技术实施例5提供的RNASEK表达敲低后的HUVEC细胞和HASMC细胞中β-gal染色结果示意图。图9是本专利技术实施例5提供的通过过表达miR-92b*和RNASEK时，HUVEC细胞和HASMC细胞中β-gal染色结果示意图。具体实施方式为使本专利技术的技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本专利技术实施方式作进一步地详细描述。第一方面，本专利技术实施例提供了一种分离的RNASEK基因，该RNASEK基因的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。第二方面，本专利技术实施例提供了上述RNASEK基因在制备抗血管衰老药物中的应用。研究发现，miR-92b*对血管细胞，尤其是血管内皮细胞衰老具有明显的促进作用。然后通过在其他类型的血管相关细胞模型中验证miR-92b*，获取过表达miR-92b*时其他衰老相关分子或表型的改变现象，确定了miR-92b*具有促进血管细胞衰老的作用。进一步地，本专利技术实施例确定了RNASEK基因为miR-92b*的下游本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的RNASEK基因，其特征在于，所述RNASEK基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种分离的RNASEK基因，其特征在于，所述RNASEK基因的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。2.权利要求1的分离的RNASEK基因在制备抗血管衰老药物中的应用。3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求1所述的分离的RNASEK基因。4.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括：治疗有效量的权利要求1所述的分离的RNASEK基因或权利要求3所述的表达载体；以及药学上可接受的赋形剂。5.根据权利要求4的...

【专利技术属性】
技术研发人员：田小利，李扬，
申请(专利权)人：田小利，李扬，
类型：发明
国别省市：江西,36