来源于木霉的脂肪酶基因及其相关产品与应用制造技术

本发明专利技术公开了来源于木霉的脂肪酶基因及其相关产品与应用。该脂肪酶基因是编码序列为序列2的第13‑1659位的TlLipA基因或编码序列为序列2的第1‑1659位的RTlLipA基因。TlLipA基因或RTlLipA基因表达的蛋白质具有脂肪酶活性，该蛋白质的脂肪酶的最适pH是9.5、最适温度是50℃，该蛋白质的脂肪酶活性可被表面活性剂Triton X100、Tween 20和SDS增强；该蛋白质在pH值6‑9的条件下脂肪酶活性稳定。TlLipA基因或RTlLipA基因表达的蛋白质是对表面活性剂具有强耐受性的碱性嗜温脂肪酶，可应用于洗涤行业。

【技术实现步骤摘要】
来源于木霉的脂肪酶基因及其相关产品与应用
本专利技术涉及生物
中来源于木霉的脂肪酶基因及其相关产品与应用。
技术介绍
脂肪酶(EC3.1.1.3)被认为是最重要的商业酶之一，在快速增长的生物
引起了极大的关注。脂肪酶可以在油和水的界面催化三酰基甘油水解，释放二酰基甘油酯，长链脂肪酸(>10个碳)和甘油。在水解过程中，脂肪酶与底物酰基结合形成脂肪酶-酰基复合物，然后将酰基转移到水分子的羟基基团上从而实现水解。在非水溶条件下，脂肪酶可以将羧酸的酰基转移到亲核试剂。根据蛋白质结构的相似性，脂肪酶属于α/β水解酶家族，其中催化三联体(通常是丝氨酸，组氨酸和天冬氨酸或谷氨酸)和氧阴离子孔(即活性位点中的口袋)对催化至关重要，其盖子的结构决定了底物对催化位点的可接近性和可结合性。微生物来源的脂肪酶广泛用于各领域，包括工业，食品，饲料，医疗。自20世纪60年代以来，加酶洗涤剂已被引入全球市场，能够有效去除甘油酯和脂肪酸的脂肪酶成为洗涤剂的主要添加剂之一。脂肪酶在工业和环境上的应用意义包括但不限于：脂肪酶为洗涤剂提供更强的去污力，特别是在低温和轻中度碱性洗涤环境下；具有低底物特异性的脂肪酶能够非常有效地去除顽固性污渍，例如血液或脂肪；脂肪酶不仅具有很高的生物降解能力，而且对水生生态系统无有害影响。然而，几个瓶颈限制了脂肪酶在洗涤剂中的应用，例如低底物特异性的脂肪酶很难获得，严格的洗涤条件(低温和碱性条件)以及脂肪酶对洗涤剂中化学物质的敏感性等等。前期研究表明来源于细菌和酵母的部分脂肪酶具有高温活性，如来自铜绿假单胞菌(嗜热芽孢杆菌)和酵母Kurtzmanomycessp.的脂肪酶的最适温度为60-75℃，大大高于一般洗涤的温度(20-40℃)。虽然一些细菌来源的脂肪酶具有适碱性，但是在高于pH9.0的条件下酶活很低，大大降低了在洗涤剂中应用的可能。此外，脂肪酶对表面活性剂的敏感性也大大降低了其在洗涤剂中的应用。因此，获得对表面活性剂具有强耐受性的碱性中低温脂肪酶，在洗涤行业具有重大的应用价值。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何获得对表面活性剂具有强耐受性的碱性嗜温脂肪酶。为了解决以上技术问题，本专利技术提供了下述DNA分子，所述DNA分子为TlLipA基因或RTlLipA基因；所述TlLipA基因是如下T1)或T2)所示的DNA分子：T1)编码序列为SEQIDNo.2的第13-1659位的DNA分子；T2)与T1)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码氨基酸序列是SEQIDNo.3的第5-552位氨基酸残基的蛋白质的DNA分子；所述RTlLipA基因是如下R1)或R2)所示的DNA分子：R1)编码序列为SEQIDNo.2的第1-1659位的DNA分子；R2)与R1)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码氨基酸序列是SEQIDNo.3的蛋白质的DNA分子。上述DNA分子中，所述DNA分子可来源于Trichodermalentiforme，如来源于TrichodermalentiformeACCC30425。上述DNA分子中，编码序列为SEQIDNo.2的第13-1659位的DNA分子来源于TrichodermalentiformeACCC30425。上述DNA分子中，编码序列为SEQIDNo.2的第1-1659位的DNA分子是重组DNA分子。上述DNA分子中，具有90％以上的同一性可为具有至少91％、92％、95％、96％、98％、99％或100％的同一性。为了解决以上技术问题，本专利技术提供了具有脂肪酶活性的蛋白质。本专利技术所提供的蛋白质，为如下P1)或P2)：P1)、所述蛋白质的氨基酸序列包括SEQIDNo.3的第5-552位氨基酸残基且具有脂肪酶活性；P2)、所述蛋白质的氨基酸序列与SEQIDNo.3的第5-552位氨基酸残基具有90％以上的同一性且具有脂肪酶活性。上述蛋白质中，所述蛋白质可来源于Trichodermalentiforme，如来源于TrichodermalentiformeACCC30425。上述蛋白质中，所述蛋白质具体可为氨基酸序列是SEQIDNo.3的第5-552位氨基酸残基的蛋白质或氨基酸序列是SEQIDNo.3的蛋白质。其中，氨基酸序列是SEQIDNo.3的第5-552位氨基酸残基的蛋白质名称为TlLipA，来源于TrichodermalentiformeACCC30425；氨基酸序列是SEQIDNo.3的蛋白质名称为RTlLipA，是重组的蛋白质。上述蛋白质中，具有90％以上的同一性可为具有至少91％、92％、95％、96％、98％、99％或100％的同一性。本文中，术语“同一性”指与核酸序列或氨基酸的序列相似性。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。与上述蛋白质相关的生物材料也属于本专利技术的保护范围。所述生物材料具体可为下述B1)至B15)中的任一种：B1)编码所述蛋白质的核酸分子；B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体；B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；B9)含有B1)所述核酸分子的转基因动物细胞系；B10)含有B2)所述表达盒的转基因动物细胞系；B11)含有B3)所述重组载体的转基因动物细胞系；B12)含有B4)所述重组载体的转基因动物细胞系；B13)含有B1)所述核酸分子的转基因植物细胞系；B14)含有B2)所述表达盒的转基因植物细胞系；B15)含有B3)所述重组载体的转基因植物细胞系；B16)含有B4)所述重组载体的转基因植物细胞系。上述生物材料中，B1)所述核酸分子可为上述T1)或T2)所示的DNA分子。上述生物材料中，所述重组载体可为pPIC9-RTlLipA，pPIC9-RTlLipA是用核苷酸序列是SEQIDNo.1的第4-1664位的DNA替换pPIC9的EcoRI和NotI识别位点间的片段(包括EcoRI识别位点和NotI识别位点在内的小片段)，保持pPIC9的其它序列不变，得到的RTlLipA基因重组表达载体。上述生物材料中，所述重组微生物可为E1)或E2)：E1)所述重组微生物为将所述的蛋白质的编码基因导入受体微生物，得到表达所述蛋白质的重组微生物，所述受体微生物可为C1)-C4)中的任一种:C1)真核微生物；C2)酵母；C3)毕赤酵母属真菌；C4)巴斯德毕赤酵母，如巴斯德毕赤酵母GS115。E2)所述重组微生物为将所述pPIC9-RTlLipA导入巴斯德毕赤酵母GS115得到的分泌表达氨基酸序列是SEQIDNo.3的重组蛋白质(名称为RTlLipA)的重组巴斯德毕赤酵母。上述生物材料中，B9)至B16)可包括繁殖材料也可不包括繁殖材料。所述DNA分子、所述蛋白质或所述生物材料在制备脂肪酶中的应用也属于本专利技术的保护范围。为了解决以上技术问题，本专利技术提供了制备脂肪酶的方法。本专利技术所提供的制备脂肪酶的方法，包括：使所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
DNA分子，其特征在于：所述DNA分子为TlLipA基因或RTlLipA基因；所述TlLipA基因是如下T1)或T2)所示的DNA分子：T1)编码序列为SEQ ID No.2的第13‑1659位的DNA分子；T2)与T1)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码氨基酸序列是SEQ ID No.3的第5‑552位氨基酸残基的蛋白质的DNA分子；所述RTlLipA基因是如下R1)或R2)所示的DNA分子：R1)编码序列为SEQ ID No.2的第1‑1659位的DNA分子；R2)与R1)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码氨基酸序列是SEQ ID No.3的蛋白质的DNA分子。

【技术特征摘要】
1.DNA分子，其特征在于：所述DNA分子为TlLipA基因或RTlLipA基因；所述TlLipA基因是如下T1)或T2)所示的DNA分子：T1)编码序列为SEQIDNo.2的第13-1659位的DNA分子；T2)与T1)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码氨基酸序列是SEQIDNo.3的第5-552位氨基酸残基的蛋白质的DNA分子；所述RTlLipA基因是如下R1)或R2)所示的DNA分子：R1)编码序列为SEQIDNo.2的第1-1659位的DNA分子；R2)与R1)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码氨基酸序列是SEQIDNo.3的蛋白质的DNA分子。2.根据权利要求1所述的DNA分子，其特征在于：所述TlLipA基因来源于Trichodermalentiforme，或所述TlLipA基因来源于TrichodermalentiformeACCC30425。3.蛋白质，其特征在于：所述蛋白质为如下P1)或P2)：P1)、所述蛋白质的氨基酸序列包括SEQIDNo.3的第5-552位氨基酸残基且具有脂肪酶活性；P2)、所述蛋白质的氨基酸序列与SEQIDNo.3的第5-552位氨基酸残基具有90％以上的同一性且具有脂肪酶活性。4.根据权利要求3所述的蛋白质，其特征在于：所述蛋白质来源于Trichodermalentiforme，或，所述蛋白质来源于TrichodermalentiformeACCC30425，和/或，所述蛋白质的氨基酸序列是SEQIDNo.3的第5-552位氨基酸残基或SEQIDNo.3。5.根据权利要求3或4所述的蛋白质，其特征在于：所述蛋白质具有下述1)-4)中的至少一种特性：1)所述蛋白质的脂肪酶活性被TritonX100...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾金刚，王宇洲，马锐，李世贵，龚明波，向杰，陈敬师，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业资源与农业区划研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11