一种T‑2毒素‑抗体缀合物及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种T‑2毒素‑抗体缀合物及其用途，所述T‑2毒素‑抗体缀合物由T‑2毒素依次与第一连接子共价连接，所述第一连接子与第二连接子共价连接，所述第二连接子与抗体共价连接，每分子抗体连接的T‑2毒素分子数为1～5。其中第一连接子含有3～24个碳原子，且至少含有一个羧基；第一连接子通过羧基与T‑2毒素的羟基经酯化反应以酯键共价连接；第二连接子通过酰胺键、酯键、C‑C键或C‑N键与第一连接子共价连接。上述T‑2毒素‑抗体缀合物制备工艺简单，对肿瘤细胞具有显著的抑制作用。

A T 2 toxin antibody conjugate and its use

【技术实现步骤摘要】
一种T-2毒素-抗体缀合物及其用途
本专利技术涉及医药领域，具体涉及一种T-2毒素-抗体缀合物及其用途。
技术介绍
恶性肿瘤也称为癌症，是人体细胞分裂失控，导致细胞异常增殖，侵袭邻近组织或发生转移而引发的一类疾病。根据2014年流行病学统计信息，我国恶性肿瘤发病率为235.23/10万（男性268.65/10万，女性200.21/10万），中国人口标化率（中标率）184.58/10万。城市中标发病率187.53/10万；农村地区中标发病率181.10/10万。全国恶性肿瘤死亡率为148.81/10万（男性186.37/10万，女性109.42/10万），中标率113.92/10万。城市中标死亡率109.21/10万。农村中标死亡率119.00/10万。肺癌、女性乳腺癌、胃癌、肝癌、食管癌、结直肠癌、宫颈癌是我国常见的恶性肿瘤，也是主要的肿瘤死因。城市人群癌症发病率高于农村，45岁以上人群发病率高于45以下人群。化疗是目前常用的肿瘤治疗方法，通常与放疗和手术治疗联合使用，以提高治愈率，抑制肿瘤转移和复发。化疗药物多为细胞毒性药物如烷化剂类药物尼莫司汀、卡莫司汀、卡氮芥、3,洛莫司汀、环磷酰胺、环磷氮芥、异环磷酰胺、异磷酰胺、甘磷酰芥；抗代谢药物去氧氟鸟苷、5-氟尿嘧啶、巯嘌呤、阿糖胞苷、替加氟、吉西他滨、安西他滨；抗肿瘤抗生素,放线菌素D、阿霉素、柔红霉素、正定霉素、表柔比星、丝裂霉素、培洛霉素、平阳霉素、博莱霉素、吡柔比星；抗肿瘤植物活性成分,三尖杉酯碱、羟基喜树碱、长春瑞宾、紫杉醇、长春新碱、依托泊苷、足叶乙苷；铂类药物如卡铂、顺铂等以及米托蒽醌、丙卡巴肼等其他药物。此外，一些天然存在的毒素，如美登素、海兔毒素、T-2毒素等对肿瘤细胞也具有极强的杀伤作用。但是，由于化疗药物的细胞毒性作用，在用于杀伤肿瘤组织的同时，也对人体正常组织产生严重的毒性作用。因此如何提高化疗药物的靶向性，降低其对非肿瘤组织的不良影响，是目前抗肿瘤药物研发的热点之一。抗体偶联药物(antibody-drugconjugate,ADC)是将抗体与细胞毒性药物共价连接，其中抗体往往针对肿瘤组织特异性表达的抗原而设计，由此借助抗体的靶向作用将细胞毒药物靶向肿瘤，从而减少细胞毒性药物在正常组织中的分布，进而降低化疗中常见的药物非特异性全身毒性。连接抗体和细胞毒性药物的化学分子称为连接子（Linker）。目前连接子分为可降解连接子和非降解连接子两类，前者可通过人体内特定酶的作用发生水解，从而将细胞毒性药物从ADC上释放出来。目前国内外批准上市的ADC药物尚少，仅有用于治疗何杰金氏淋巴瘤的Adcetris（brentuximabvedotin）和用于治疗HER2阳性乳腺癌的Kadcyla(ado-trastuzumabemtansine)获准上市，其他尚有几十种ADC药物处于研发阶段。T-2毒素是一种主要由镰刀菌属三线镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、梨孢镰刀菌、粉红镰刀菌、禾谷镰刀菌和雪腐镰刀菌等的特定菌株所产生的单端孢霉烯族化合物中毒性较强的一种毒素。申请人及专利技术人在前期研究中已经发现T-2毒素对多种肿瘤具有显著的杀伤作用，在肿瘤治疗领域具有广阔的应用前景（中国专利文献CN105688185A、CN101485653A），并对其ADC药物进行了研究（中国专利文献CN103330937A）。中国专利文献CN103330937A公开了一种单克隆抗体抗原结合片段-T-2毒素偶联物，采用的连接子为肽链、1，4-丁二醇二缩水甘油醚、N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸酯中的一种，所用的抗体为抗人肝细胞癌单克隆抗体HAblSFab片段、抗人肝癌单克隆抗体3Α5Fab'片段、抗IV型胶原酶单抗单克隆抗体3G11Fabi片段中的一种。但上述ADC收率极低，制备及纯化难度极大，不具备成本优势，难以实现大工业化生产。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的之一是提供一种T-2毒素-抗体缀合物，为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种如通式Ⅰ所示的T-2毒素-抗体缀合物,由T-2毒素与连接子和抗体Z通过共价键连接而成，所述连接子由第一连接子X和第二连接子Y组成，所述第一连接子X含有3～24个碳原子，且至少含有一个羧基；所述第一连接子X通过所述羧基与T-2毒素的羟基经酯化反应以酯键共价连接；所述第二连接子Y通过酰胺键、酯键、C-C键或C-N键与所述第一连接子X共价连接；所述n为1～5。优选的，所述第一连接子X为含有3～10个碳原子的直链有机酸。优选的，所述第一连接子X为COOH-CH2-CH2-CH2-COOH、NH4-CH2-CH2-CH2-COOH、COOH-CH2-CH2-COOH或CH2W-CH2-CH2-COOH中的一种；所述W为卤素。优选的，所述CH2W-CH2-CH2-COOH为CH2Cl-CH2-CH2-COOH。优选的，所述第二连接子Y选自6-马来酰亚胺基己酸、MC-Val-Cit-PAB、Fmoc-Val-Cit-PAB、MC-Val-Cit-PAB-PNP、Fmoc-Phe-Lys(Trt)-PAB-PNP中的一种。优选的，所述抗体Z选自抗HER2单抗、抗CD19单抗、抗CD30单抗、抗EGFR单抗中的一种；所述抗体Z通过Lys残基的氨基或Cys残基的巯基与所述第二连接子Y共价连接。在一个进一步优选的实施例中，所述第一连接子X为COOH-CH2-CH2-COOH，所述第二连接子Y为MC-Val-Cit-PAB，所述抗体Z为抗HER2单抗，所述第一连接子X通过酯键分别与T-2毒素和第二连接子Y共价连接，所述单克隆抗体Z通过Cys残基的巯基与第二连接子Y共价连接；所述n为3～4。本专利技术的另一方面提供了上述T-2毒素-抗体缀合物在制备抗癌症药物中的用途。优选的，所述癌症选自白血病、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌、骨肉瘤、结肠癌、直肠癌、鼻咽癌和胃癌。优选的，所述癌症选自白血病、肺癌、前列腺癌、乳腺癌和肝癌。本专利技术技术方案所述的T-2毒素英文名为T-2Toxin，CAS号为:21259-20-1，是一种活性较强的细胞毒性物质，对肿瘤细胞具有显著抑制作用。MC-Val-Cit-PAB为可降解性连接子，通常作为抗体偶联药物的连接臂，实现细胞毒性药物与抗体的偶联；6-马来酰亚胺基己酸、MC-Val-Cit-PAB、Fmoc-Val-Cit-PAB、MC-Val-Cit-PAB-PNP、Fmoc-Phe-Lys(Trt)-PAB-PNP及T-2毒素均可通过市场购得。本专利技术技术方案所述的抗HER2单抗，是指能够与人表皮生长因子-2结合的单克隆抗体，由于氨基酸序列的不同及其与人表皮生长因子-2结合区域的不同存在多种不同的分子，如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗均属于抗HER2单抗，但二者氨基酸序列不同，与人表皮生长因子-2结合的区域也不同。类似的，本专利技术技术方案所述的抗CD30单抗、抗EGFR单抗分别指能够与人CD30抗原或表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)结合的单克隆抗体。已上市的抗CD30单抗如brentuximabvedotin，已上市的抗EGFR单抗如西妥昔单抗、帕尼单抗、尼妥珠单抗均可从市场购本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种如通式Ⅰ所示的 T‑2毒素‑抗体缀合物, 由T‑2毒素与连接子和抗体Z通过共价键连接而成，

【技术特征摘要】
1.一种如通式Ⅰ所示的T-2毒素-抗体缀合物,由T-2毒素与连接子和抗体Z通过共价键连接而成，其特征在于，所述连接子由第一连接子X和第二连接子Y组成，所述第一连接子X含有3～24个碳原子，且至少含有一个羧基；所述第一连接子X通过所述羧基与T-2毒素的羟基经酯化反应以酯键共价连接；所述第二连接子Y通过酰胺键、酯键、C-C键或C-N键与所述第一连接子X共价连接；所述n为1～5。2.根据权利要求1所述的T-2毒素-抗体缀合物，其特征在于，所述第一连接子X为含有3～10个碳原子的直链有机酸。3.根据权利要求2所述的T-2毒素-抗体缀合物，其特征在于，所述第一连接子X为COOH-CH2-CH2-CH2-COOH、NH4-CH2-CH2-CH2-COOH、COOH-CH2-CH2-COOH或CH2W-CH2-CH2-COOH中的一种；所述W为卤素。4.根据权利要求3所述的T-2毒素-抗体缀合物，其特征在于，所述CH2W-CH2-CH2-COOH为CH2Cl-CH2-CH2-COOH。5.根据权利要求1所述的T-2毒素-抗体缀合物，其特征在于，所述第二连接子Y选自6-马来酰亚胺基己酸、MC-Val-Cit-PAB、Fmoc-Val-Cit-P...

【专利技术属性】
技术研发人员：厉保秋，张焕，高继友，李娜，
申请(专利权)人：厉保秋，
类型：发明
国别省市：山东,37