甘露糖化壳聚糖递送系统组装的结核黏膜基因疫苗技术方案

本发明专利技术涉及一种甘露糖化壳聚糖递送系统组装的结核黏膜基因疫苗，其是由甘露糖化壳聚糖与结核抗原编码质粒pPES共聚交联复合而成的纳米颗粒复合物，结核抗原编码质粒pPES为申请号201310682146.4中公开的以热休克蛋白65为表位支架的多T细胞表位结核基因疫苗。本发明专利技术还公开了其制备方法：配制浓度为0.015‑0.025％、pH为5.2‑5.5的甘露糖化壳聚糖溶液；将结核抗原编码质粒pPES溶于缓冲溶液，得到浓度为800μg/ml‑1mg/ml的结核抗原编码质粒溶液；将甘露糖化壳聚糖溶液与结核抗原编码质粒溶液在54‑57℃下，以15000‑17000rpm的速度高速混旋，发生共聚化学交联反应。本发明专利技术还公开了其在制备预防或治疗结核病的药物中的应用。本发明专利技术的结核黏膜基因疫苗具有作为新型预防和治疗性结核疫苗的潜力。

Gene vaccine of tuberculosis mucous membrane assembled by mannan chitosan delivery system

The invention relates to a gene vaccine mucosal tuberculosis mannosylated chitosan delivery system assembly, which is composed of mannosylated chitosan and tuberculosis antigen encoding plasmid pPES crosslink compounded nano particle compound, tuberculosis antigen encoding plasmid pPES for No. 201310682146.4 in open to heat shock protein 65 epitopes bracket multiple T cell epitope vaccine against Mycobacterium tuberculosis. The invention also discloses a preparation method of preparation: concentration of 0.015 0.025%, pH 5.2 5.5 mannosylated chitosan solution; the tuberculosis antigen encoding plasmid pPES dissolved in buffer solution, get the solution of tuberculosis antigen encoding plasmid concentration was 800 g/ml 1mg/ml; the mannosylated chitosan solution and tuberculosis antigen in the 54 plasmid encoding solution of 57 C to 15000 17000rpm high speed mixed spinning, chemical cross-linking copolymerization. The invention also discloses the application of the drug in the preparation of drugs to prevent or treat tuberculosis. The present inventive tuberculosis mucosal gene vaccine has the potential as a new prophylactic and therapeutic tuberculosis vaccine.

【技术实现步骤摘要】
甘露糖化壳聚糖递送系统组装的结核黏膜基因疫苗
本专利技术涉及一种生物基因工程领域，尤其涉及一种甘露糖化壳聚糖递送系统组装的结核黏膜基因疫苗。
技术介绍
结核分枝杆菌感染导致的肺结核病的死灰复燃是当今全球重大的卫生问题，由于人口密度和流动性日益增加、常规BCG疫苗对成人肺结核预防的无效性、结核耐药菌株的出现、及AIDS病导致的结核并发感染，目前结核发病及死亡日趋严重，全球每年有800万活动性结核患者并导致300万死亡；我国约有5.5亿人口曾经感染结核，每年13万人死于结核，每月约有12万新发病人。2006年肺结核已一跃成为我国新发感染性疾病的首位，迄今我国尚未有能够取代传统卡介苗的新型结核预防或治疗性疫苗的问世，研制新型结核疫苗非常迫切。以往的抗结核保护性免疫应答分析提示：诱导CD4+Th1细胞及其分泌的高水平IFNα，不仅能够增强巨噬细胞的吞噬和杀菌能力，还可以通过促进CD8+CTL的诱导发挥特异性杀伤结核菌感染细胞，有助于清除结核杆菌。基因疫苗或称DNA疫苗，是将外源目的基因构建于真核表达质粒、直接注射动物的第三代疫苗，由于可在体内表达目的抗原，通过外源性、内源性以及交叉抗原提呈激本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甘露糖化壳聚糖递送系统组装的结核黏膜基因疫苗，其特征在于：其是由甘露糖化壳聚糖与结核抗原编码质粒pPES共聚交联复合而成的纳米颗粒复合物，所述结核抗原编码质粒pPES为申请号201310682146.4中公开的以热休克蛋白65为表位支架的多T细胞表位结核基因疫苗。

【技术特征摘要】
1.一种甘露糖化壳聚糖递送系统组装的结核黏膜基因疫苗，其特征在于：其是由甘露糖化壳聚糖与结核抗原编码质粒pPES共聚交联复合而成的纳米颗粒复合物，所述结核抗原编码质粒pPES为申请号201310682146.4中公开的以热休克蛋白65为表位支架的多T细胞表位结核基因疫苗。2.根据权利要求1所述的甘露糖化壳聚糖递送系统组装的结核黏膜基因疫苗，其特征在于：所述甘露糖化壳聚糖的分子量为39万-41万g/mol，脱乙酰度为75％-85％，甘露糖取代度为7.5％。3.根据权利要求1所述的甘露糖化壳聚糖递送系统组装的结核黏膜基因疫苗，其特征在于：所述以热休克蛋白65为表位支架的多T细胞表位结核基因疫苗包括载体以及外源目的基因，所述外源目的基因为嵌合了结核杆菌5个T细胞表位基因的结核杆菌热休克蛋白65的全长基因，所述外源目的基因的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，其DNA序列如SEQIDNo.2所示。4.根据权利要求3所述的甘露糖化壳聚糖递送系统组装的结核黏膜基因疫苗，其特征在于：所述载体为真核表达质粒，所述真核表达质粒为pcDNA3.1质粒或pVAX1质粒。5.一种根据权利要求1-4中任一项所述的甘露糖化壳聚糖递送系统组装的结核黏膜基因疫苗的制备方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐薇，吴曼丽，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32