一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法，属于生物工程与技术领域。其制备步骤依次包括：斜面菌种活化培养、液体菌种的制备、液体发酵培养、真空冷冻干燥、超微粉碎、水提取、色素的去除、醇沉多糖、蛋白质的去除及精制多糖的制备。本发明专利技术通过液体发酵的方法培养鸡枞菌菌丝体，不仅克服了现有技术中鸡枞菌人工栽培困难的问题，且可以大规模生产鸡枞菌菌丝体，降低生产成本；其次，本发明专利技术将发酵所得菌丝体真空冷冻干燥、超微粉碎后，采用热水浸提，并协同微波‑超声波技术，显著提高了鸡枞菌多糖的提取率，且所得多糖具有良好的抗氧化和降脂活性。

A method of using liquid fermentation mycelium system of termitomycesalbuminosus preparation of Termitomyces albuminosus polysaccharide

The invention relates to a method for using t.albuminosus liquid fermentation preparation of termitomycesalbuminosus polysaccharide, which belongs to the field of biological engineering and technology. The preparation steps include: culture of oblique bacteria, liquid strain, liquid fermentation, vacuum freeze-drying, ultrafine grinding, water extraction, pigment removal, alcohol precipitation, polysaccharide removal, protein purification and polysaccharide preparation. Through the method of liquid fermentation of Termitomyces albuminosus mycelium, which not only overcomes the existing technology of termitomycesalbuminosus artificial cultivation of difficult problems, and can be mass production of termitomycesalbuminosus hypha, reduce the production cost; secondly, the fermentation mycelium of vacuum freezing and drying, superfine crushing, leaching with hot water, and microwave ultrasonic technology, significantly improve the termitomycesalbuminosus extraction rate of polysaccharides, and the polysaccharide has good anti-oxidation and hypolipidemic activity.

【技术实现步骤摘要】
一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法
本专利技术属于生物工程与
，具体涉及一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法。
技术介绍
鸡枞菌又名蚁枞、鸡脚麟菇，属于担子菌纲、伞菌目、伞菌科、鸡枞菌属。鸡枞菌的生长环境极为特殊，与黑翅大白蚁共生，子实体仅能生长在白蚁巢上，目前尚不能人工栽培，因而野生鸡枞菌在地域上有较大的分布局限，主要分布于我国福建、云南、四川等地。鸡枞菌不但是一种营养丰富、味道鲜美的珍贵食用菌，也是我国传统的药用真菌之一。研究表明，鸡枞菌多糖(CAP)对高血脂症小鼠有降低血脂的作用，对高胆固醇血症大鼠有明显的抗氧化作用，对急性感染小鼠的白细胞(WBC)、C反应蛋白(CRP)、补体C、免疫球蛋白(IGM)的含量有稳定作用。目前食用菌多糖的提取工艺研究主要采用：热水浸提法、微波协同高压热水浸提法、超声波协同高压热水浸提法、亚临界水提取法、碱法提取、有机酸提取、膜分离法、酶解法等提取工艺。其中，水提醇沉是最简单易行的提取方法，但是这样的提取方法会同时把不同聚合度和不同的水溶性物质如蛋白质、核酸一起提取出来，且提取效率低，而亚临界水提取法、碱法提取、有机酸提取及膜分离法也存在能耗大、提取率低等缺陷；微波提取以及超声波技术虽然一定程度上减少了能耗大的难题，但是食用菌多糖的提取率并没有明显的提高。因此，建立更加高效、节能、切实可行的食用菌多糖提取方法具有现实意义。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法，本专利技术通过液体发酵的方法培养鸡枞菌菌丝体，不仅克服了现有技术中鸡枞菌人工栽培困难的问题，且可以大规模生产鸡枞菌菌丝体，降低生产成本；其次，本专利技术将发酵所得菌丝体真空冷冻干燥、超微粉碎后，采用热水浸提，并协同微波-超声波技术，显著提高了鸡枞菌多糖的提取率，且所得多糖具有良好的抗氧化和降脂活性。本专利技术通过以下技术方案来实现：一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法，包括以下步骤：S1、斜面菌种活化培养：从母种培养基上取1cm2的菌块，接种到斜面培养基上，扩大培养至菌丝体长满斜面的2/3以上；S2、液体菌种的制备：挑取步骤S1中活化好的斜面菌种，将其转接入液体培养基中，置于摇床中恒温培养，制得液体菌种；S3、液体发酵培养：将步骤S2中制得的液体菌种接种到装有发酵培养基的发酵罐中进行发酵培养，得到包含鸡枞菌菌丝体的发酵液，将发酵液过滤，取滤渣，得鸡枞菌菌丝体；S4、真空冷冻干燥：将步骤S3制得的鸡枞菌菌丝体放入-26～-32℃冰箱内预冻90～110min，再将其放入真空冷冻干燥机内，启动真空泵抽真空，干燥至最终水分含量为5～10％；S5、超微粉碎：将步骤S4制得的鸡枞菌菌丝体放入摇式粉碎机中进行间歇式粉碎，然后将粉末过80目筛，得鸡枞菌菌丝体粗粉，再将鸡枞菌菌丝体粗粉置于超微粉碎机进行粉碎，即得鸡枞菌菌丝体超微粉；S6、水提取：将步骤S5制得的鸡枞菌菌丝体超微粉加入蒸馏水中，用超声波微波组合系统处理后，再用水浴恒温浸提，浸提完成后6000r/min离心12min，得到上清液A；S7、色素的去除：按重量比为1:1.5将AB-8树脂浸泡在95％乙醇中，24h后装柱水洗至无醇味后，将上清液A加入AB-8树脂去除色素，AB-8树脂与上清液体积比为3:5；S8、醇沉多糖：用旋转蒸发仪将去除色素的上清液减压浓缩至原体积的五分之一后，加入3倍体积的95％乙醇，混合均匀，于4℃冰箱中醇沉10h，多糖呈絮状沉淀析出，5000r/min离心10min，收集沉淀，得鸡枞菌粗多糖；S9、蛋白质的去除：将鸡枞菌粗多糖复溶于蒸馏水中，用Sevag法去除溶液中的蛋白质；S10、精制多糖的制备：向步骤S9所得的去除蛋白质的溶液中加入3倍体积的95％乙醇得到沉淀，5000r/min离心10min，收集沉淀，真空冷冻干燥，得鸡枞菌精制多糖，即本专利技术所述的鸡枞菌多糖。优选地，所述步骤S1中斜面培养基成分为：马铃薯200g，葡萄糖27g，酵母浸膏3.0g/L，VB13.8mg/L，蛋白胨为1.7g/L，水1L，pH为7.0。优选地，所述步骤S2中液体培养基配方为：麸皮14g/L、玉米粉11g/L、大豆粉2g/L、KH2PO41.2g/L、MgSO40.9g/L、水1L、pH6.0。优选地，所述步骤S2中液体培养条件为：培养温度23～28℃，培养时间10～15d，摇床转速170～180r/min。优选地，所述步骤S3中发酵培养基配方为：麸皮14g/L、玉米粉11g/L、大豆粉2g/L、KH2PO41.2g/L、MgSO40.9g/L、水1L、pH6.0。优选地，所述步骤S3中发酵培养条件为：发酵温度25～27℃，发酵时间5～10d，摇床转速170～180r/min。优选地，所述步骤S4中真空冷冻干燥机冷阱温度为-30～-40℃。优选地，所述步骤S5中超微粉碎条件为：粉碎机风速35.3Hz，转速35.57Hz，粉碎时间20min。优选地，所述步骤S6中鸡枞菌菌丝体超微粉与蒸馏水固液比(kg/L)为1:25～35。优选地，所述步骤S6超声波微波组合系统浸提条件为：超声功率200W、超声时间30min、微波功率400W、微波时间30s，水浴温度85～95℃。本专利技术的有益效果：本专利技术通过液体发酵的方法培养鸡枞菌菌丝体，不仅克服了现有技术中鸡枞菌人工栽培困难的问题，且可以大规模生产鸡枞菌菌丝体，降低生产成本；其次，本专利技术将发酵所得菌丝体真空冷冻干燥、超微粉碎后，采用热水浸提，并协同微波-超声波技术，显著提高了鸡枞菌多糖的提取率，且所得多糖具有良好的抗氧化和降脂活性。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法，包括以下步骤：S1、斜面菌种活化培养：从母种培养基上取1cm2的菌块，接种到斜面培养基上，扩大培养至菌丝体长满斜面的2/3以上，斜面培养基成分为：马铃薯200g，葡萄糖27g，酵母浸膏3.0g/L，VB13.8mg/L，蛋白胨为1.7g/L，水1L，pH为7.0；S2、液体菌种的制备：挑取步骤S1中活化好的斜面菌种，按照7％的体积比将其转接入液体培养基中，置于摇床中恒温培养，制得液体菌种；其中，液体培养基配方为：麸皮14g/L、玉米粉11g/L、大豆粉2g/L、KH2PO41.2g/L、MgSO40.9g/L、水1L、pH6.0，液体培养条件为：培养温度23℃，培养时间15d，摇床转速170r/min；S3、液体发酵培养：将步骤S2中制得的液体菌种按照7％的体积比接种到装有发酵培养基的发酵罐中进行发酵培养，得到包含鸡枞菌菌丝体的发酵液，将发酵液过滤，取滤渣，得鸡枞菌菌丝体；其中，发酵培养基配方为：麸皮14g/L、玉米粉11g/L、大豆粉2g/L、KH2PO41.2g/L、MgSO40.9g/L、水1L、pH6.0，发酵培养条件为：发酵温度27℃，发酵时间5d，摇床转速170r/min；S4、真空冷冻干燥：将步骤S3制得的鸡枞菌菌丝体放入-26℃冰箱内预冻110min，再将本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、斜面菌种活化培养：从母种培养基上取1cm

【技术特征摘要】
1.一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、斜面菌种活化培养：从母种培养基上取1cm2的菌块，接种到斜面培养基上，扩大培养至菌丝体长满斜面的2/3以上；S2、液体菌种的制备：挑取步骤S1中活化好的斜面菌种，将其转接入液体培养基中，置于摇床中恒温培养，制得液体菌种；S3、液体发酵培养：将步骤S2中制得的液体菌种接种到装有发酵培养基的发酵罐中进行发酵培养，得到包含鸡枞菌菌丝体的发酵液，将发酵液过滤，取滤渣，得鸡枞菌菌丝体；S4、真空冷冻干燥：将步骤S3制得的鸡枞菌菌丝体放入-26～-32℃冰箱内预冻90～110min，再将其放入真空冷冻干燥机内，启动真空泵抽真空，干燥至最终水分含量为5～10％；S5、超微粉碎：将步骤S4制得的鸡枞菌菌丝体放入摇式粉碎机中进行间歇式粉碎，然后将粉末过80目筛，得鸡枞菌菌丝体粗粉，再将鸡枞菌菌丝体粗粉置于超微粉碎机进行粉碎，即得鸡枞菌菌丝体超微粉；S6、水提取：将步骤S5制得的鸡枞菌菌丝体超微粉加入蒸馏水中，用超声波微波组合系统处理后，再用水浴恒温浸提，浸提完成后6000r/min离心12min，得到上清液A；S7、色素的去除：按重量比为1:1.5将AB-8树脂浸泡在95％乙醇中，24h后装柱水洗至无醇味后，将上清液A加入AB-8树脂去除色素，AB-8树脂与上清液体积比为3:5；S8、醇沉多糖：用旋转蒸发仪将去除色素的上清液减压浓缩至原体积的五分之一后，加入3倍体积的95％乙醇，混合均匀，于4℃冰箱中醇沉10h，多糖呈絮状沉淀析出，5000r/min离心10min，收集沉淀，得鸡枞菌粗多糖；S9、蛋白质的去除：将鸡枞菌粗多糖复溶于蒸馏水中，用Sevag法去除溶液中的蛋白质；S10、精制多糖的制备：向步骤S9所得的去除蛋白质的溶液中加入3倍体积的95％乙醇得到沉淀，5000r/min离心10min，收集沉淀，真空冷冻干燥，得鸡枞菌精制多糖，即本发明所述的鸡枞菌多糖。2.根据权利要求1所述的一种利用鸡枞菌液体发酵菌丝体制备鸡枞菌多糖的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：周关健，
申请(专利权)人：广东日可威食品原料有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44