多肽Lycosin-Ⅰ在制备抗炎和抗弓形虫药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药研发领域，具体涉及多肽Lycosin‑Ⅰ在制备抗炎和抗弓形虫药物中的应用。本发明专利技术中抗炎和抗弓形虫药物含有有效剂量多肽Lycosin‑Ⅰ，Lycosin‑Ⅰ采用Fmoc固相化学合成法合成，利用高效液相色谱法进行纯化，Lycosin‑Ⅰ能够抑制单核细胞THP‑1与血管内皮细胞的粘附，也能抑制TNF‑α诱导的炎症因子细胞间黏附分子‑1、白介素‑6和白介素‑8的表达，还能抑制转录因子NF‑κB的激活和入核，此外，还能明显降低弓形虫速殖子的侵入力和繁殖力。本发明专利技术的多肽Lycosin‑Ⅰ在制备抗炎和抗弓形虫药物中的应用具有明显的抗炎效果和杀灭弓形虫的作用，并能够减轻急性弓形虫病产生炎症所导致对宿主细胞的损害，为预防和治疗弓形虫病奠定了基础。

I polypeptide Lycosin applications in preparation of anti-inflammatory and anti Toxoplasma drugs.

The invention belongs to the field of research and development of biological medicine, and particularly relates to application of polypeptide Lycosin I in preparation of anti-inflammatory and anti Toxoplasma drugs. The effective dose of peptide Lycosin 1 contains anti-inflammatory and anti Toxoplasma drugs in the invention, the Lycosin 1 by Fmoc solid-phase chemical synthesis, using high performance liquid chromatography purification, Lycosin 1 can inhibit monocyte adhesion to THP 1 and vascular endothelial cells, inflammatory factors can inhibit TNF alpha induction of intercellular adhesion molecule 1, interleukin 6 and interleukin 8 expression can inhibit the transcription factor NF kappa B activation and nuclear entry, in addition, can significantly reduce the Toxoplasma invasion capacity and fecundity. The invention of the Lycosin polypeptide I use in preparing anti-inflammatory and anti Toxoplasma drugs has obvious anti-inflammatory effect and killing effect of Toxoplasma gondii, and can alleviate the inflammation caused by acute toxoplasmosis on host cell damage, which laid the foundation for the prevention and treatment of toxoplasmosis.

【技术实现步骤摘要】
多肽Lycosin-Ⅰ在制备抗炎和抗弓形虫药物中的应用
本专利技术属于炎症药物研发
，具体涉及多肽Lycosin-Ⅰ在制备抗炎和抗弓形虫药物中的应用。
技术介绍
炎症是活体组织对各种损伤因子所产生的一种防御性反应，如物理性因素、化学性因素、机械性因素、生物性因素和免疫反应等。炎症的基本特征为红、肿、热和痛。红和热是由于局部毛细血管扩张、血流速度加快所致，肿是由于血管扩张导致的血液成份渗出导致，痛是由于血液的渗出成分及一些炎症介质刺激神经末梢所致。不仅炎症细胞在整个过程中起着重要作用，并且由其分泌的大量炎症因子也起着至关重要的作用，在这些炎症因子中，有着代表性的一类主要是白介素家族、肿瘤坏死因子家族和粘附分子等。血管内皮细胞的活化是促进炎症发生发展的始动因素，当内皮细胞受到刺激后可分泌粘附分子（如细胞间黏附分子-1、血管细胞粘附分子-1）来加强单核细胞对内皮细胞的粘附作用，从而进一步激活内皮细胞，与此同时，一些炎症因子（如白介素-6、白介素-8）的分泌也会同样增加，而这一类炎症因子的分泌继而会进一步诱导炎症的放大。核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的激活在调控炎症方面起着重要作用，它可调节上述细胞间黏附分子-1、白介素-6、白介素-8等炎症因子的分泌，因此可通过抑制核转录因子-κB的激活来达到控制炎症发生发展。弓形虫（Toxoplasmagondii）是一种单细胞真核原生动物，广泛寄生于人和各种动物，由它所引起的弓形虫病是一种重要的人畜共患寄生虫病；全球大约有1/3的人口感染弓形虫，虽然我国弓形虫的人群平均感染率大约为7.9%，但是随着我国饲养宠物家庭数量的增多，人们饮食习惯的改变，弓形虫病的感染率有急剧上升的趋势。孕妇感染弓形虫后，可通过胎盘垂直把虫体传给胎儿，从而可致流产、早产、畸胎和死胎，对我国的优生优育工作造成重大影响。在免疫功能严重受损时，脑弓形虫病是艾滋病等患者最常见的机会性疾病，引发致死性病变。家畜也受到弓形虫病的严重威胁，家畜的弓形虫感染率为10%-50%，给畜牧业造成重大损失。目前没有预防弓形虫病的疫苗，治疗弓形虫病的药物也主要有磺胺嘧啶、乙胺嘧啶、螺旋霉素、阿奇霉素、青蒿素、蒿甲醚等。但是治疗弓形虫病的药物仍然存在可选药物少、治疗周期长、复发率高、药物毒副作用大、产生抗药性等难题，特别是尚无杀灭弓形虫包囊内的缓殖子和清除包囊的药物，这是抗弓形虫药物研发的重点和难点。弓形虫也是一种常见的致炎因子。弓形虫感染宿主，会导致宿主产生急性和慢性的炎症反应，其中以导致局部组织坏死并伴有单核细胞浸润为主的急性炎症反应，是弓形虫病的最基本病理改变。弓形虫感染宿主以后，诱导宿主通过T细胞和巨噬细胞产生多种细胞因子发挥抗弓形虫的免疫调节作用。多肽Lycosin-Ⅰ是由24个氨基酸残基、8个阳离子构成的具有α-螺旋二级结构的线性肽类物质，且为两性分子，羧基端酰胺化，与其他阳离子两性分子抗菌肽结构高度相似。目前对其报道主要有抗菌及抗肿瘤的作用，但在抗炎和抗弓形虫方面未见任何报道。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种多肽Lycosin-Ⅰ在制备抗炎和抗弓形虫药物中的应用，目的是拓展多肽的应用范围，为抗炎和抗弓形虫提供新型药物。本专利技术的多肽Lycosin-Ⅰ在制备抗炎和抗弓形虫药物中的应用，其中所述的多肽Lycosin-Ⅰ的氨基酸序列为：RKGWFKAMKSIAKFIAKEKLKEHL-NH2，-NH2表示C末端残基酰胺化修饰；该抗炎和抗弓形虫药物含有有效剂量多肽Lycosin-Ⅰ；所述的Lycosin-Ⅰ采用Fmoc固相化学合成法合成，利用高效液相色谱法进行纯化；所述的Lycosin-Ⅰ抑制TNF-α诱导的炎症因子的mRNA的表达。所述的炎症因子包括细胞间黏附分子-1、白介素-6和白介素-8。与现有技术相比，本专利技术的特点和有益效果是：现有技术中对于Lycosin-Ⅰ应用的报道主要有抗菌及抗肿瘤的作用，但在抗炎和抗弓形虫方面未见任何报道。本专利技术的Lycosin-Ⅰ在抗炎和抗弓形虫药物中，通过抑制TNF-α诱导的核转录因子-κB抑制蛋白降解和核转录因子-κB激活及核转录因子-κBp65核转位从而减少炎症因子表达，能够抑制TNF-α诱导的HUVECs白介素-6、白介素-8mRNA和细胞间黏附分子-1的表达，从而达到抗炎的效果，同时Lycosin-Ⅰ具有明显的抑制弓形虫速殖子侵入宿主细胞HFF，减轻急性弓形虫病产生炎症所导致对宿主细胞的损害。附图说明图1是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ高效液相色谱纯化和质谱分析结果；其中：A：高效液相色谱纯化图；B：质谱分析图；图2是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ抑制TNF-α诱导的单核THP-1细胞对HUVECs的黏附实验图；其中：A黏附的单核细胞THP-1在光学显微镜（×200）下照片；B：每组取6个视野对黏附的THP-1进行统计学分析；图3是本专利技术实施例中不同浓度的Lycosin-Ⅰ干预下细胞存活率图；图4是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ干预HUVECs不同时间细胞间黏附分子-1的mRNA的表达变化；图5是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ干预HUVECs不同时间白介素-6的mRNA的表达变化；图6是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ干预HUVECs不同时间白介素-8的mRNA的表达变化；图7是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ干预HUVECs不同时间转录因子信号通路中核转录因子-κBmRNA的表达变化；图8是本专利技术实施例中TNF-α干预HUVECs不同时间白介素-6mRNA的表达变化；图9是本专利技术实施例中TNF-α干预HUVECs不同时间白介素-8mRNA的表达变化；图10是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ和地塞米松磷酸钠分别干预HUVECs后再以TNF-α处理后白介素-6mRNA的表达变化；图11是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ和地塞米松磷酸钠分别干预HUVECs后再以TNF-α处理后白介素-8mRNA的表达变化；图12是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ和地塞米松磷酸钠分别干预HUVECs后再以TNF-α处理后细胞上清白介素-8含量的变化；图13是本专利技术实施例中TNF-α干预HUVECs不同时间时细胞间黏附分子-1的mRNA表达变化；图14是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ和地塞米松磷酸钠分别干预HUVECs再以TNF-α处理后细胞间黏附分子-1的蛋白表达变化和灰度值统计分析；图15是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ和地塞米松磷酸钠分别干预HUVECs再以TNF-α处理后细胞间黏附分子-1的mRNA表达变化；图16是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ和地塞米松磷酸钠分别干预HUVECs再以TNF-α处理后，核转录因子-κB抑制蛋白的蛋白表达变化和灰度值统计分析；图17是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ和地塞米松磷酸钠分别干预HUVECs再以TNF-α处理后，p65的蛋白表达变化和灰度值统计分析；图18是本专利技术实施例中Lycosin-Ⅰ和地塞米松磷酸钠分别干预HUVECs再以TNF-α处理后，核转录因子-κB的mRNA表达变化；图19是本专利技术实施例中不同的干预HUVECs条件下荧光显微镜下的荧光信号图；图20是本专利技术实施例中实验小鼠死亡情况图本文档来自技高网...

【技术保护点】
多肽Lycosin‑Ⅰ在制备抗炎和抗弓形虫药物中的应用，其中所述的多肽Lycosin‑Ⅰ的氨基酸序列为：RKGWFKAMKSIAKFIAKEKLKEHL‑NH2，‑NH2表示C末端残基酰胺化修饰；其特征在于该抗炎和抗弓形虫药物含有有效剂量多肽Lycosin‑Ⅰ；所述的Lycosin‑Ⅰ采用Fmoc固相化学合成法合成，利用高效液相色谱法进行纯化；所述的Lycosin‑Ⅰ抑制TNF‑α诱导的炎症因子的表达。

【技术特征摘要】
1.多肽Lycosin-Ⅰ在制备抗炎和抗弓形虫药物中的应用，其中所述的多肽Lycosin-Ⅰ的氨基酸序列为：RKGWFKAMKSIAKFIAKEKLKEHL-NH2，-NH2表示C末端残基酰胺化修饰；其特征在于该抗炎和抗弓形虫药物含有有效剂量多肽Lycosin-Ⅰ；所述的Lyco...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋立平，李先耀，唐雅琴，蒋进英，侯圣杰，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43