一种绞股蓝皂苷及制备方法与其在制备抗炎药物中的应用技术

本发明专利技术属于中药领域，公开了一种绞股蓝皂苷及制备方法与其在制备抗炎药物中的应用。所述方法包含如下步骤：(1)将绞股蓝粉碎，过筛，得绞股蓝粗粉；(2)采用乙醇溶液加热回流提取绞股蓝粗粉，然后将提取液离心，并将上清液浓缩，得到浓缩的绞股蓝乙醇粗提物浸膏；(3)将绞股蓝乙醇粗提物浸膏用蒸馏水溶解，加入有机溶剂进行萃取，去除含有色素的有机层，然后向水层中加入氯仿或乙酸乙酯继续进行萃取，去除有机层，得到水溶液；加入正丁醇进行萃取，收集正丁醇相，浓缩蒸干，得到绞股蓝皂苷。所述绞股蓝皂苷具有显著的抗炎活性，且植物皂苷的使用剂量低，在同样剂量下的毒副作用也较低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药领域，具体涉及一种绞股蓝皂苷及制备方法与在制备抗炎药物中的应用。
技术介绍
皂苷(saponins)因其发泡性特点而得名，是一类具有重要医药价值的配糖体化合物，根据水解后生成皂苷元的结构，分为三萜皂苷和甾体皂苷两大类。皂苷广泛存在于自然界，如大豆、苦瓜、大枣等常见食物，另外，皂苷也是一些本草著作中记载的具有“久服轻身不老”的中药的主要有效成分，这些中药如人参、三七、知母、远志、甘草、薯蓣等因显著的保健作用而被古人推崇为“上品药”。许多慢性疾病的发病机制都涉及炎症，例如冠心病、癌症、高血脂等。因此抑制前炎症因子的生成可以作为预防或者治疗一些慢性疾病的重要靶点。脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞是常见研究炎症反应的模型。巨噬细胞在脂多糖LPS刺激下，可促使炎症因子如一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌。绞股蓝(GynostemmapentaphyllumMakino)又名七叶胆、五叶参，是葫芦科绞股蓝属多年生草质藤木，在我国陕西、四川、湖南、广西、云南等省均有分布，有“南方人参”的美誉，在日本被誉为“福音草”。早在20世纪70年代后期，日本学者已从该植物中分离出80多种皂甙，发现有4种绞股蓝皂苷分别与人参皂苷Rb1、Rb3、Rd和F2的结构完全相同，并且绞股蓝总皂苷含量是人参的3倍。现代药理、毒理及临床实验证明：绞股蓝主要有效成分为绞股蓝皂苷，具有抗疲劳、抗衰老、抗诱变、提高机体免疫能力、调节心脑血管和改善神经系统等作用。绞股蓝皂苷因其独特的功效，可开发用于绞股蓝茶制品、功能性口服液、保健酒、抗衰老化妆品、饲料添加剂等。但目前，绞股蓝更多的是简单加工为绞股蓝茶，而对于其中有效成分绞股蓝皂苷的提取、纯化及加工利用程度还远远不够，因此绞股蓝皂苷的提取纯化和药理活性等方面的研究还有待进一步深入探讨，全面加强绞股蓝皂苷的生物利用，对于开发新药、指导临床用药具有重要的意义。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足和缺点，本专利技术的首要目的在于提供一种绞股蓝皂苷的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供上述制备方法制备得到的绞股蓝皂苷。本专利技术的再一目的在于提供上述绞股蓝皂苷在制备抗炎药物中的应用。本专利技术的目的通过下述方案实现：一种绞股蓝皂苷的制备方法，包含如下步骤：(1)将绞股蓝(GynostemmapentaphyllumMakino)粉碎，过筛，得绞股蓝粗粉；(2)采用乙醇溶液加热回流提取绞股蓝粗粉，然后将提取液离心，并将上清液浓缩，得到浓缩的绞股蓝乙醇粗提物浸膏；(3)将绞股蓝乙醇粗提物浸膏用蒸馏水溶解，加入有机溶剂进行萃取，去除含有色素的有机层，然后向水层中加入氯仿或乙酸乙酯继续进行萃取，去除有机层，得到水溶液；加入正丁醇进行萃取，收集正丁醇相，浓缩蒸干，得到绞股蓝皂苷即绞股蓝总皂苷。步骤(3)中所述有机溶剂为石油醚或乙醚中一种以上；优选为石油醚。步骤(3)中所述加入有机溶剂进行萃取的次数为3～5次，每次萃取的时间为30～60min；所述加入氯仿或乙酸乙酯继续进行萃取的次数为3～5次，每次萃取的时间为30～60min；所述加入正丁醇进行萃取的次数为3～5次，每次萃取的时间为30～60min。步骤(1)中所述粉碎过筛为50～60目筛；步骤(2)中所述乙醇溶液的体积分数为70～85％；优选为75％。步骤(2)中所述乙醇溶液与绞股蓝粗粉的体积质量比为(10～20)mL:1g。步骤(2)中所述加热回流提取的温度为90～100℃；所述加热回流提取的次数为2～4次，每次加热回流提取的时间为2～4h。步骤(2)中所述离心的转速为3000～5000r/min；所述离心的时间为8～12min。步骤(2)和(3)中所述浓缩为减压浓缩，浓缩的温度为40～60℃。步骤(2)和(3)中所述减压浓缩的温度优选为50℃。步骤(3)所述绞股蓝乙醇粗提物浸膏中绞股蓝粗粉与蒸馏水质量体积比为为200g：(1～3)L。步骤(3)中萃取所用的有机溶剂、氯仿或乙酸乙酯以及正丁醇总的体积用量与溶解浸膏的蒸馏水的体积用量比为(1～3)：(1～3)：(1～3)：(1～3)。一种绞股蓝皂苷(GPMS)，通过上述制备方法制备得到。所述绞股蓝皂苷(GPMS)在制备抗炎药物中的应用。所述的绞股蓝皂苷(GPMS)可作为新型的抗炎药物，应用于炎症的治疗。一种抗炎药物，含有绞股蓝皂苷(GPMS)；本专利技术的原理：植物来源的皂苷能通过调节巨噬细胞的免疫功能体现出各种有益的药理作用。本专利技术发现和确证植物皂苷具有显著的抗炎活性，且植物皂苷的使用剂量低，在同样剂量下的毒副作用也较低。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：(1)本专利技术首次发现绞股蓝皂苷(GPMS)在体外能显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO的释放。(2)本专利技术首次发现绞股蓝皂苷(GPMS)在体外能显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞iNOS、IL-6、TNF-α、IL-1β、和COX-2mRNA的表达。(3)本专利技术首次发现绞股蓝皂苷(GPMS)在体外能显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞p-JNK、p-p38、p-p65和COX-2蛋白的表达。(4)绞股蓝皂苷(GPMS)的用药剂量比较低，而且在有效用药剂量范围内毒性较低。附图说明图1是实施例1制备得到的绞股蓝皂苷(GPMS)对RAW264.7巨噬细胞的毒性作用图；图2是实施例1制备得到的绞股蓝皂苷(GPMS)对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞释放NO的影响图；图3是实施例1制备得到的绞股蓝皂苷(GPMS)对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞形态的影响图；图4是实施例1制备得到的绞股蓝皂苷(GPMS)对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞iNOSmRNA表达的影响图，其中，##：与control组比较，P<0.01，**：与LPS组比较，P<0.01；图5是实施例1制备得到的绞股蓝皂苷(GPMS)对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IL-6mRNA表达的影响图，其中，##：与control组比较，P<0.01，**：与LPS组比较，P<0.01；图6是实施例1制备得到的绞股蓝皂苷(GPMS)对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TNF-αmRNA表达的影响图，其中，##：与control组比较，P<0.01，**：与LPS组比较，P<0.01；图7是实施例1制备得到的绞股蓝皂苷(GPMS)对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IL-1βmRNA表达的影响图，其中，##：与control组比较，P<0.01，**：与LPS组比较，P<0.01；图8是实施例1制备得到的绞股蓝皂苷(GPMS)对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞COX-2mRNA表达的影响图，其中，##：与control组比较，P<0.01，**：与LPS组比较，P<0.01；图9是实施例1制备得到的绞股蓝皂苷(GPMS)对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞磷酸化JNK(p-JNK)蛋白水平影响的结果分析图，其中图A为p-JNK蛋白表达曝光图，图B为p-JNK蛋白相对表达量；其中，##：与control组比较，P<0.01，**：与LPS组比较，P本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于：包含如下步骤：(1)将绞股蓝粉碎，过筛，得绞股蓝粗粉；(2)采用乙醇溶液加热回流提取绞股蓝粗粉，然后将提取液离心，并将上清液浓缩，得到浓缩的绞股蓝乙醇粗提物浸膏；(3)将绞股蓝乙醇粗提物浸膏用蒸馏水溶解，加入有机溶剂进行萃取，去除含有色素的有机层，然后向水层中加入氯仿或乙酸乙酯继续进行萃取，去除有机层，得到水溶液；加入正丁醇进行萃取，收集正丁醇相，浓缩蒸干，得到绞股蓝皂苷即绞股蓝总皂苷。

【技术特征摘要】
1.一种绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于：包含如下步骤：(1)将绞股蓝粉碎，过筛，得绞股蓝粗粉；(2)采用乙醇溶液加热回流提取绞股蓝粗粉，然后将提取液离心，并将上清液浓缩，得到浓缩的绞股蓝乙醇粗提物浸膏；(3)将绞股蓝乙醇粗提物浸膏用蒸馏水溶解，加入有机溶剂进行萃取，去除含有色素的有机层，然后向水层中加入氯仿或乙酸乙酯继续进行萃取，去除有机层，得到水溶液；加入正丁醇进行萃取，收集正丁醇相，浓缩蒸干，得到绞股蓝皂苷即绞股蓝总皂苷。2.根据权利要求1所述绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述有机溶剂为石油醚或乙醚中一种以上；步骤(2)中所述乙醇溶液的体积分数为70～85％。3.根据权利要求2所述绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述有机溶剂为石油醚；步骤(2)中所述乙醇溶液的体积分数为75％。4.根据权利要求1所述绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述加热回流提取的温度为90～100℃；所述加热回流每次提取的时间为2～4h；步骤(2)中所述加热回流提取的次数为2～4次。5.根据权利要求1所述绞股蓝皂苷的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述加入有机溶剂进行萃取的次数为3～5次，每次...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜建国，申春燕，石嫚嫚，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44