一种地黄蛋白纳米颗粒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种地黄蛋白及其纳米颗粒的制备方法，颗粒由两个蛋白组成，两个地黄蛋白的N‑端一级结构序列分别为SEQ ID NO:1：R‑E‑K‑D‑I‑A‑G‑A‑V‑Q‑T‑V和SEQ ID NO:2：R‑E‑K‑D‑I‑V‑X。本发明专利技术涉及的地黄蛋白提取分离于鲜地黄、生地黄或熟地黄中，在这些传统使用的地黄原料中稳定存在；其纳米颗粒的制备方法不涉及任何交联剂，且其成品广泛存在于各类使用地黄为原料加以传统热加工工艺制作的汤剂中，为广大人群服用多年，安全性高。本发明专利技术涉及的地黄蛋白纳米颗粒除安全高效发挥自身功效外，还有望与其它原料配伍，高效协同发挥作用。

A Rehmannia glutinous nanoparticle and its preparation method

The invention discloses a preparation method of Rehmannia protein and nano particles, particles composed of two proteins, two protein N terminal Dihuang sequences were SEQ ID NO:1:R E K D I A G A V Q T V ID NO:2:R and SEQ E K D I V X. Isolated from fresh radix rehmanniae and Radix Rehmanniae extract disclosed Rehmannia protein, are stable in these traditional use of raw materials in the nano particles of Rehmannia; the preparation method does not involve any crosslinking agent, which widely exists in all kinds of finished decoction as raw material to use Rehmanniae traditional hot processing technology. Take to the masses of people for many years, high safety. In addition to its safety and efficiency, the Rehmannia glutenin nanoparticles are also expected to be compatible with other raw materials and play an effective and synergistic role.

【技术实现步骤摘要】
一种地黄蛋白纳米颗粒及其制备方法
本专利技术涉及医药
中的蛋白药物新剂型和制剂技术，具体涉及到一种地黄蛋白纳米颗粒及其制备方法。
技术介绍
近几十年来，纳米颗粒研究广泛，经过材料的纳米化后，纳米材料的物化性质（光学、电学、表面活性等）均会呈现与原始材料截然不同的性质，有靶向性和穿透性等优点的同时，也暴露出在生物相容性、细胞毒性和可降解性方面的缺点。目前应用于纳米药物载体研究的生物大分子（如血清白蛋白、丝蛋白等）皆没有可以参照的天然研究模型，获得纳米颗粒的物化性质及其相关生物安全性也需要长期的观测，才能得到全面评估。纳米药物载体发展带来的潜在风险引起了科学界广泛的担忧。地黄是一种我国人民长期使用的食品原料和中药药材，地黄在中药汤剂，特别是中药复方汤剂中具有非常重要的用途。地黄来源于玄参科植物地黄（RehmanniaglutinosaLibosch）的块根，具有调节免疫、抗肿瘤、抗辐射、保护胃粘膜、抗衰老等药理作用，临床上用于止血，并用于治疗糖尿病、心脑血管疾病及高血压等。鲜地黄中梓醇含量较高，约为5.33%，相当于生地黄的10倍，熟地黄的35倍，鲜地黄和生地黄性寒，味甘苦，清热生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种地黄蛋白纳米颗粒，其特征在于：由两个地黄蛋白组成，由13个地黄蛋白DHP1单体和11个地黄蛋白DHP2单体形成一个球状的蛋白纳米颗粒；所述的地黄蛋白DHP1和DHP2的N‑端一级结构序列分别为SEQ ID NO:1：R‑E‑K‑D‑I‑A‑G‑A‑V‑Q‑T‑V和SEQ ID NO:2：R‑E‑K‑D‑I‑V‑X。

【技术特征摘要】
1.一种地黄蛋白纳米颗粒，其特征在于：由两个地黄蛋白组成，由13个地黄蛋白DHP1单体和11个地黄蛋白DHP2单体形成一个球状的蛋白纳米颗粒；所述的地黄蛋白DHP1和DHP2的N-端一级结构序列分别为SEQIDNO:1：R-E-K-D-I-A-G-A-V-Q-T-V和SEQIDNO:2：R-E-K-D-I-V-X。2.根据权利要求1所述的一种地黄蛋白纳米颗粒，其特征在于：该纳米颗粒其平均粒径为120.61±0.46nm，表面电荷呈负性，范围在-18±5mV。3.根据权利要求1所述的一种地黄蛋白纳米颗粒，其特征在于：所述的地黄蛋白提取方法，具体包括以下步骤：1）地黄蛋白粗提液的制备：鲜地黄经榨汁机、生地或熟地黄原料经高速粉碎机将其磨碎，料液比1:3加入0.2mol/L、pH7.0的磷酸缓冲液混合均匀，置于4℃，搅拌浸提24h；用8层纱布过滤得到的地黄浸提液，弃去滤渣，将滤液在4℃下经15000rpm离心20min，收集上清液；在4℃磁力搅拌条件下，向地黄蛋白抽提液中缓慢加入无水硫酸铵，使溶液盐浓度达到20%，待完全溶解后，4℃下静置4h，以12000rpm离心20min，收集上清液；继续向收集的上清液中缓慢加入无水硫酸铵至饱和度为40%，待完全溶解后，于之前同样步骤收集上清液；继续向上清液加入硫酸铵至饱和度为60%，待固体全溶后，于之前同样步骤收集上清液；继续向上清液加入硫酸铵至饱和度为80%，待固体全溶解后，4℃下放置4h，15000rpm离心20min，收集沉淀；沉淀用0.2mol/L、pH7.0磷酸缓冲液充分溶解后以相同浓度pH7.0磷酸缓冲液透析12h，将透析液在15000rpm，4℃条件下，离心20min，收集上清液，得到的溶液即为地黄蛋白粗提液；2）地黄蛋白DHP1的离子交换色谱分离：将100mL地黄蛋白初提液流加至以0.02mol/L、pH4.6的醋酸-三水合醋酸钠缓冲液平衡的CM-SephadexC-50弱阳离子常压色谱柱，以同样浓度醋酸-三水合醋酸钠缓冲液继续平衡3倍柱体积后，再以含0～1mol/LNaCl的0.02mol/L、pH4.6的醋酸-三水合醋酸钠缓冲液线性梯度洗脱300mL，最后用1mol/LNaCl的0.02mol/L、pH4.6的醋酸-三水合醋酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁伟，柯李晶，周建武，饶平凡，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33