环匹阿尼酸类生物碱化合物的用途制造技术

本发明专利技术涉及环匹阿尼酸类化合物的制备方法及新用途。将米曲霉进行固体或液体发酵，对发酵产物进行分离纯化，并通过应用质谱、核磁共振波谱、红外光谱等技术及文献对于本发明专利技术制备的3个化合物进行表征。本发明专利技术还提供了环匹阿尼酸类化合物在制备用于预防和/或治疗神经退行性疾病的药物中的应用。

Use of cyclic Arni acid alkaloids

The invention relates to the preparation and new use of the ring Arni acid compound. Aspergillus oryzae was fermented solid or liquid, and the fermentation products were separated and purified. The 3 compounds were characterized by mass spectrometry, nuclear magnetic resonance spectroscopy, infrared spectroscopy and literature. The invention also provides the application of the ring Arni acid compound in the preparation of drugs for the prevention and / or treatment of neurodegenerative diseases.

【技术实现步骤摘要】
环匹阿尼酸类生物碱化合物的用途
本专利技术涉及医药
，具体而言，涉及来源于米曲霉的环匹阿尼酸类生物碱化合物在预防和/或治疗神经退行性疾病类药物中的新用途。
技术介绍
随着人口老龄化时代的到来，神经退行性疾病呈逐年上升的趋势，呈现出较高的发病率，严重威胁中老年人的生活质量和身体健康。神经退行性疾病是由于神经元和/或其髓鞘的丧失所导致的一类疾病，主要病理特征是神经元脱失和功能异常，可分为急性神经退行性疾病(主要包括脑缺血、脑损伤和癫痫等)和慢性神经退行性疾病(包括阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩性侧索硬化、不同类型脊髓小脑共济失调和Pick病等)。目前，神经退行性疾病仍无有效的治疗方法，临床上主要采用神经保护剂进行治疗。常用的神经保护剂有谷氨酸拮抗剂、抗炎因子、钙离子通道阻断剂、自由基清除剂、GABA受体拮抗剂、5-羟色胺拮抗剂等，上述药物仅限于缓解症状，且大多数副作用明显。因此，开发有效的神经保护药物成为防治神经退行性疾病的研究热点。患病率研究显示，美国在2000年的老年痴呆症例数为450万例。年龄每增加5岁，老年痴呆症病人的百分数将上升2倍，也就是说，60岁人群的患病率为1％，而85岁人群的患病率为30％。老年痴呆症是一组病因未明的原发性退行性脑变性疾病，目前公认的发病机制主要有两种：(1).由于淀粉样前蛋白的异常导致蛋白成分漏出细胞膜，导致神经元纤维缠结和细胞死亡，基因位于21号染色体(ArchGenPsychiatry,2005；62(11):1186-92.)。(2).与载脂蛋白E(APO-E4)的基因有关，APO-E4的增多能对抗APO-E2或APO-E3的功能。APO-E4使神经细胞膜的稳定性降低，导致神经元纤维缠结和细胞死亡。APO-基因纯合子比杂合子患病几率高(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,2005；102(4):1211-6)。因此，促进受损神经的修复与再生是目前亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供来源于米曲霉(Aspergillusoryzae)的环匹阿尼酸类生物碱化合物的新用途。本专利技术所述环匹阿尼酸类生物碱化合物可用于制备预防和/或治疗神经退行性疾病类药物。本专利技术所述的环匹阿尼酸类生物碱化合物具体可为下述1-3中的任意一种：上述式Ⅰ-Ⅲ药学上可接受的盐、酯及溶剂合物也属于本专利技术的保护范围。本专利技术还提供了所述环匹阿尼酸类生物碱化合物的制备方法，包括以下步骤：(1)将米曲霉(Aspergillusoryzae)菌种接种到PDA试管琼脂培养基斜面上，进行预培养；预培养的条件为：25摄氏度，避光培养7天(PDA培养基组成：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂粉16g，纯净水定容至1L(pH自然))。(2)待菌丝长满整个斜面后，在无菌条件下将菌丝体转接到液体培养基中进行培养，得到种子培养液；培养的条件为：25摄氏度，避光培养7天。液体培养基：葡萄糖4.0g/L，MaltExtract(麦芽提取物)10.0g/L，YeastExtract(酵母)4.0g/L，水定容至1L；YeastExtract(酵母提取物)购自OxoidLtd.，批号为1074139。(3)取10毫升种子培养液分别接种到经过灭菌的装有固体培养基的500毫升三角瓶中，接种10瓶，25摄氏度，避光培养40天(固体培养基由80g籼米和120ml水组成)。(4)发酵结束，将3L有机溶剂加到三角瓶中，常温浸泡提取一周，重复提取3次，合并有机溶剂提取液减压蒸馏干燥，得到80g提取物。(5)有机溶剂提取物经过硅胶开放柱色谱(青岛海洋化工有限公司200-300目,柱层析硅胶150g；Φ4.5×80cm)分离，正己烷-乙酸乙酯梯度洗脱(100:0,80:1,50:1,30:1,20:1,10:1；v/v),二氯-甲醇混合溶剂梯度洗(100:0,100:1,80:1,50:1,30:1,20:1,10:1,5:1,3:1,2:1；v/v)，每个梯度洗脱溶剂5000毫升，每500毫升收集为一个流份。正己烷-乙酸乙酯20:1洗脱的馏分减压浓缩干燥后,反相ODS柱梯度洗脱(甲醇-水：30％,40％,50％,60％,70％,80％,100％)。(6)40％甲醇-水洗脱的馏分凝胶LH20(二氯-甲醇1:1)得式Ⅰ化合物(化合物1)。(7)40％甲醇-水洗脱的馏分用甲醇重结晶得到式Ⅱ化合物(化合物2)。(8)二氯-甲醇50:1洗脱的第二个馏分减压浓缩后，再用HPLC分离(38％乙腈-水，YMC-ODSC18column；5μm；9.4×250mm)得到式Ⅲ化合物(化合物3)。在如上所述的本专利技术方法中，本领域技术人员应当理解所述有机溶剂包括多种不溶于水的在室温下是液态的有机溶剂，诸如石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等，步骤(4)所述有机溶剂是乙酸乙酯。本专利技术提供了利用米曲霉发酵制备化合物1-3，并提供了化合物1-3在制备神经退行性疾病类药物中的应用，与文献报道的其他神经退行性疾病药物相比，具有显著的活性。本专利技术为研究与开发新的神经退行性疾病类药物提供了候选化合物。附图说明图1不同浓度化合物1对未分化PC12细胞轴突生长的作用图。图2不同浓度化合物1对未分化PC12细胞轴突生长作用的代表性图。图3不同浓度化合物2对未分化PC12细胞轴突生长的作用图。图4不同浓度化合物2对未分化PC12细胞轴突生长作用的代表性图。图5不同浓度化合物3对未分化PC12细胞轴突生长的作用图。图6不同浓度化合物3对未分化PC12细胞轴突生长作用的代表性图。具体实施方式下面用实施例来进一步详述本专利技术，但本专利技术的内容并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例1米曲霉菌株的培养，化合物的提取分离(1)菌株活化、培养将米曲霉菌种接种到PDA试管琼脂培养基斜面上，进行预培养；预培养的条件为：25摄氏度，避光培养7天(PDA培养基组成：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂粉16g，纯净水定容至1L(pH自然))。待菌丝长满整个斜面后，在无菌条件下将菌丝体转接到液体培养基中进行培养，得到种子培养液；培养的条件为：25摄氏度，避光培养7天。液体培养基：葡萄糖4.0g/L，MaltExtract(麦芽提取物)10.0g/L，YeastExtract(酵母)4.0g/L，水定容至1L；YeastExtract(酵母提取物)购自OxoidLtd.，批号为1074139。取10毫升种子培养液分别接种到经过灭菌的装有固体培养基的500毫升三角瓶中，接种10瓶，25摄氏度，避光培养40天(固体培养基由80g籼米和120ml水组成)。(2)、化合物的提取分离发酵结束，将3L乙酸乙酯加到三角瓶中，常温浸泡提取一周，重复提取3次，合并乙酸乙酯提取液减压蒸馏干燥，得到80g提取物。乙酸乙酯提取物经过硅胶开放柱色谱(青岛海洋化工有限公司200-300目,柱层析硅胶150g；Φ4.5×80cm)分离，正己烷-乙酸乙酯梯度洗脱(100:0,80:1,50:1,30:1,20:1,10:1；v/v),二氯-甲醇混合溶剂梯度洗(100:0,100:1,80:1,50:1,30:1,20:1,10:1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种环匹阿尼酸类生物碱化合物在制备预防和/或治疗神经退行性疾病药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.一种环匹阿尼酸类生物碱化合物在制备预防和/或治疗神经退行性疾病药物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的神经退行性疾病包括血管性痴呆、血管性认知障碍、老年痴呆症、记忆力减退、脑组织退行性病变症候群或胆碱能神经退行性病变。3.根据权利要求1所述环匹阿尼酸类生物碱化合物，其特征在于：所述的化合物为式Ⅰ化合物、式Ⅱ化合物、式Ⅲ化合物；所述的式Ⅰ化合物的结构式为：所述的式Ⅱ化合物的结构式为：所述的式Ⅲ化合物的结构式为：4.一种健康食品组合物，其特征在于，包括式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ的一种或/和几种化合物。5.根据权利要求4所述的健康食品组合物，其特征在于，其剂型包括片剂、胶囊、口服液、颗粒剂。6.一种药物组合物，其特征在于，包括式Ⅰ、式Ⅱ、式Ⅲ的一种或/和几种化合物。7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，其剂型包括片剂、胶囊、口服液、乳剂、注射剂、混悬剂、酊剂、颗粒剂、气雾剂。8.权利要求1所述环匹阿尼酸类生物碱化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将米曲霉菌种接种到PDA试管琼脂培养基斜面上，进行预培养；(2)待菌丝长满整个斜面后，在无菌条件下将菌丝体转接到液体培养基中进行培养，得...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宏伟，刘丽，宝丽，韩俊杰，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11