一种预测乳腺癌对曲妥珠单抗联合化疗治疗敏感性的生物标志物制造技术

本发明专利技术公开了一种预测乳腺癌对曲妥珠单抗联合化疗治疗敏感性的生物标志物，具体的涉及预测HER2阳性乳腺癌患者对曲妥珠单抗靶向治疗联合化疗治疗敏感性的TRBV7‑7生物标志物，本发明专利技术通过高通量二代测序方法，对曲妥珠单抗联合化疗剂治疗HER2阳性乳腺癌患者前外周血TCRβ链CDR3区进行基因测序，发现在病理完全缓解(pCR)组TRBV7‑7基因频率显著低于非病理完全缓解组(non‑pCR)，提示TRBV7‑7可以作为评估曲妥珠单抗联合化疗剂疗效的标志物应用于临床，进而筛选出曲妥珠单抗联合化疗新辅助治疗中生存获益的乳腺癌人群，实现HER2阳性乳腺癌的个性化治疗。

A biomarker for the prediction of breast cancer sensitivity to trastuzumab combined with chemotherapy

The invention discloses a method for predicting breast cancer to trastuzumab combined with chemotherapy in the treatment of sensitive biomarkers to predict 7 biomarkers of TRBV7 trastuzumab targeted therapy combined with chemotherapy in the treatment of sensitivity in patients with HER2 positive breast cancer specific, the two generation of high-throughput sequencing methods to trastuzumab combined chemotherapy agent HER2 positive breast cancer patients peripheral blood before treatment CDR3 TCR beta chain gene sequencing, found in pathological complete remission (pCR) group TRBV7 7 gene frequency was significantly lower than that of non pathological complete remission group (non pCR), suggesting that TRBV7 7 can be used to evaluate the efficacy of trastuzumab in combination with chemotherapy agents. Markers in clinical application, and then screened neoadjuvant trastuzumab combined with chemotherapy in the treatment of breast cancer survival benefit groups, individualized treatment of HER2 positive breast cancer.

【技术实现步骤摘要】
一种预测乳腺癌对曲妥珠单抗联合化疗治疗敏感性的生物标志物
本专利技术涉及生物
，涉及一种预测乳腺癌对曲妥珠单抗联合化疗治疗敏感性的生物标志物，具体的涉及预测HER2阳性乳腺癌患者对联合治疗敏感性的TRBV7-7生物标志物。
技术介绍
乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤，占所有女性恶性肿瘤的23％。据2017年美国癌症统计数据显示每年约有25万女性被诊断为乳腺癌，占女性恶性肿瘤发病率首位，乳腺癌死亡约4万例为女性恶性肿瘤死亡率第二位。2015年中国癌症统计数据显示乳腺癌已成为我国女性恶性肿瘤发病率的首位，每年新发病人数约26.9万、死亡约7.1万例。新辅助化疗(NeoadjuvantChemotherapy,NAC)是在20世纪70年代初由Frei首先提出，主要应用于局部进展期肿瘤在化疗后使不可切除的肿瘤达到可切除或由不可保乳达到可保乳的目的。NAC在乳腺癌中应用是由意大利米兰癌症研究所率先使用。两项大型临床研究证实NAC与辅助化疗的效果在远期生存方面没有差异。NAC在乳腺癌的降期降级、提高保乳率、评估化疗药物的敏感性方面具有明显的优势。当前，NAC已成为局部进展期乳腺癌的标准治疗方式。NAC后达到病理完全缓解(pathologiccompleteresponse,pCR)的乳腺癌患者在无病生存期和长期生存率上有显著的提高。因此确定对新辅助化疗敏感的乳腺癌患者对于其治疗具有重要的意义。TCR是T细胞表面识别抗原的分子，也是T细胞产生免疫应答的第一个关键分子，经典的克隆选择学说认为：TCR是在胚系基因的基础上，于胸腺中进行V(variable)、D(diversity)、J(joining)、C(constant)基因片段重排(组合、插入、剪接)而形成多样性的抗原互补决定区(CDR1、CDR2、CDR3，其中“CDR3区”(又称超变区)组成最具有多样性的CDR3受体库。TCR是由α、β链或γ、δ链构成的异源性二聚体，其中人TCRβ链重排基因全长为由不连贯分布的TRBV(48个功能性基因片段)、TRBJ(13个功能性基因片段)、TRBD(2个功能性基因片段)和TRBC(2个功能性基因片段)基因重排而形成，TCRβ链“CDR3区”是由“TRBV末端-TRBD-TRBJ前端”基因和“连接处核背酸插入或剪接”构成，单个人体TCRβ链本身的多样性及β链与α链组合的多样性，能形成至少1011以上种类的TCR，不同T细胞克隆具有不同序列或不同长度的TCRCDR3基因，从而决定其特异性。CDR3基因序列出现的频率可以反映相应T细胞克隆扩增的程度，从而反映T细胞功能状态。现有研究发现，特异性的免疫细胞，尤其是肿瘤浸润性的淋巴细胞对乳腺癌的预后具有重要的作用。随着测序技术的发展，应用高通量测序技术对TCRCDR3进行受体库的研究，为免疫学的发展带来新的思路，同时为肿瘤的免疫研究及治疗提供了重要的手段。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一，在于提供一种预测HER2阳性乳腺癌患者对新辅助化疗疗法敏感性的生物标志物，。本专利技术的目的之二，在于提供一种检测试剂盒，用于发现曲妥珠单抗联合化疗治疗的受益群众，从而实现HER2阳性乳腺癌患者的个性化治疗。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测TRBV7-7表达的试剂在制备用于预测HER2阳性乳腺癌患者对曲妥珠单抗联合化疗剂治疗的反应或敏感性的产品中的应用。进一步，所述样品为人外周血。在本专利技术中，可以评估作为生物学样品的患者样品可以是血液样品或血浆样品。获得血液样品和血浆样品的方法是本领域公知的。患者样品可以在新辅助疗法之前或在辅助疗法之前得自患者。进一步，所述化疗剂包括烷化剂类、亚硝脲类、乙撑亚胺类、甲基迷胺类、磺酸烷基酯类、抗代谢物类、长春花生物碱类、表鬼臼毒素类、抗生素、丝裂霉素C、放线菌素、铂配位复合物、蒽二酮类、甲基肼衍生物、激素和拮抗剂。进一步，所述化疗的药物包括紫杉醇、卡铂、表柔比星。进一步，所述试剂包括检测TRBV7-7基因频率或表达水平的试剂。进一步，所述检测基因频率的试剂包括使用免疫组库测序方法检测TRBV7-7基因频率的试剂。进一步，所述检测基因表达水平的试剂包括针对TRBV7-7的探针、引物、抗体或配体。一种用于预测HER2阳性乳腺癌患者对曲妥珠单抗联合化疗剂疗法的反应或敏感性的试剂盒，所述试剂盒包括检测样本中TRBV7-7的试剂。进一步，所述试剂盒包括特异性扩增TRBV7-7基因的引物；优选的，所述引物序列如SEQIDNO.1～2所示。进一步，所述试剂盒还包括RNA提取试剂、GAPDH内参引物、PCR反应液、反转录试剂、阴性对照和阳性对照。附图说明图1是利用二代测序检测与HER2阳性乳腺癌患者治疗疗效相关的基因频率的差异统计图；图2是利用QPCR检测TRVB7-7在HER2阳性乳腺癌患者的差异表达情况图。具体的实施方式本专利技术经过广泛而深入的研究，通过高通量测序方法，检测曲妥珠单抗联合化疗剂治疗HER2阳性乳腺癌患者前后TCR及TCRB表达谱，发现在病理完全缓解(pCR)组和非完全缓解组(non-pCR)不同频率的基因，从而为HER2阳性乳腺癌患者个性化治疗提供重要的手段。通过测序及分析发现，TRBV7-7在pCR组和non-pCR组呈现显著性的差异，提示TRBV7-7可作为标志物筛选新辅助化疗的受益患者，以期实现乳腺癌患者的个性化治疗。生物标志物在本专利技术中，标志物等同于生物标志物或分子标志物，是在组织或细胞中的表达水平与正常或健康细胞或组织的表达水平相比发生改变的任何基因或蛋白，(单独使用或与其他定性术语组合例如乳腺癌标志物、乳腺癌特异性标志物、对照标志物、外源标志物、内源标志物)指可测量、可计算或可以其他方式获得的，与任何分子或分子组合相关，可用作生物和/或化学状态的指示物的参数。在本专利技术中，“标志物”指与一个或多个生物分子相关的参数(即“生物标志物”)例如天然或人工合成产生的核酸(即个体基因，以及编码和非编码DNA和RNA)和蛋白(例如肽、多肽)。本专利技术中的“标志物”还包括指可通过考虑来自两个或多个不同标志物的表达数据计算或以其他方式获得的单个参数。本领域技术人员将认识到，本专利技术的实用性并不局限于对本专利技术的标志物基因的任何特定变体的基因表达进行定量。本专利技术的TRBV7-7还涵盖与其变体和/或同源物的氨基酸序列，以及该序列的片段具有至少85％、至少90％或至少95％同源性的蛋白质，前提是变体蛋白质(包括同等型)、同源物蛋白质和/或片段受到一种或多种TRBV7-7特异性抗体识别。为了测定一种氨基酸或核酸序列与如本文中描述的氨基酸或核酸序列是否具有某种程度的同一性，技术人员可使用本领域公知的手段和方法，例如比对，或是手工或是通过使用本领域已知的或本文中描述的计算机程序。依照本专利技术，术语“相同”或“百分比同一性”在两种或更多种氨基酸或核酸序列的语境中指如使用本领域已知的序列比较算法或通过手工比对和目视检查测量的，在比较窗口上或在指定区域上为最大对应进行比较和比对时，两种或更多种序列或亚序列相同，或规定百分比的氨基酸残基或核苷酸相同，认为具有例如60％至95％或更大序列同一性的序列是基本相同的。此类定义也适用于测试序列的互补本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测样品中TRBV7‑7的试剂在制备用于预测HER2阳性乳腺癌患者对曲妥珠单抗联合化疗剂治疗的反应或敏感性的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测样品中TRBV7-7的试剂在制备用于预测HER2阳性乳腺癌患者对曲妥珠单抗联合化疗剂治疗的反应或敏感性的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述样品为人外周血。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化疗剂包括烷化剂类、亚硝脲类、乙撑亚胺类、甲基迷胺类、磺酸烷基酯类、抗代谢物类、长春花生物碱类、表鬼臼毒素类、抗生素、丝裂霉素C、放线菌素、铂配位复合物、蒽二酮类、甲基肼衍生物、激素和拮抗剂。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述化疗剂为紫杉醇、卡铂、表柔比星。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括检测TRBV7-7基因频率或表达水平的试剂。6.根据权利要求5所述的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐兵河，马飞，樊英，王海娟，王文娜，易宗毕，
申请(专利权)人：中国医学科学院肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：北京,11